微生物限度檢查方法(薄膜過濾法)驗證方案

....wordword教育資料微生物限檢查方法 (薄膜過濾法)驗證方案微生物限檢查方法 (薄膜過濾法) 驗證方案編碼：表一、驗證方案的起草與批準驗證方案起草起草人： 起草時期： 月 日驗證小組成員：驗證方案審核部門部門審核人日 期生產(chǎn)部生產(chǎn)車間QCQA驗證方案批準批準人： 批準日期：二、驗證方案驗證目的和原驗證目的為確認所承受的方法適合于該藥品的細菌、霉菌、酵母菌數(shù)的測定，特制定本方案。驗證過程應(yīng)嚴格依據(jù)本方案規(guī)定的內(nèi)容進，因特別緣由確需要變時，應(yīng)報驗證委員會批準。原通過比較試驗4組中試驗菌的恢復(fù)生長結(jié)果來評價整個檢驗方法的準確性、有效性和重現(xiàn)性。驗證方法步驟驗證前的預(yù)備：進微生物限檢查方法〔薄膜過濾法〕驗證前，全部的平皿和稀釋劑應(yīng)當嚴格依據(jù)相關(guān)的滅菌程序消毒，以確保其對試驗的結(jié)果沒有影響。試驗菌應(yīng)包括G—、G+、酵母菌和霉菌類微生物以根本掩蓋樣品中可能存在的微生物。驗證試驗的操作打算：用3個同批號產(chǎn)品微生物限檢測方法進平試驗，通過計算回收來推斷限檢查方法是否對產(chǎn)品有影響。試驗結(jié)果可承受標準：用標準菌株評價方法“ 的微生物限檢查對檢品中微生物的抑制性，試驗結(jié)果應(yīng)顯示3次獨的平試驗中，稀釋劑比照組的菌回收應(yīng)小于 70%，試驗組回收也低于 70%。試驗實施試驗前的預(yù)備主要儀器設(shè)備：恒溫培育箱、生化培育箱、電子天平、高壓蒸汽滅菌器、凈化工作臺。操作環(huán)境：操作間應(yīng)當安裝空氣除菌過濾層裝置。環(huán)境干凈應(yīng)低于10000級，局部干凈為100〔或放置同等級凈化工作臺4.9pa。試驗樣品：批號： 批號： 批號：培育基名稱培育基批號培育基名稱培育基批號配制日期有效期至改馬丁瓊脂培育基玫瑰紅鈉瓊脂培育基膽鹽乳增菌培育基養(yǎng)分瓊脂培育基稀釋液：PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液以上經(jīng)115℃高壓蒸汽滅菌30min。菌株名稱內(nèi)控編號大腸埃希菌菌株名稱內(nèi)控編號大腸埃希菌CMCC(B)44102Ec-黃色葡萄球菌CMCC(B)26003Sa-枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501Bs-白色珠球菌 CMCC(F)98001Ca-黑曲霉CMCC(F)98003An-編號由菌名首字母—傳代代數(shù)—制備日期組成。器具：無菌薄膜過濾器〔孔徑0.45um直徑50mm、無菌移液管5m〕驗證方法菌液的制備將大腸埃希菌、黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌接種至10ml的無菌養(yǎng)分肉湯中在30～35℃下培育18～2423～2824～48曲霉接種至改馬丁液體培育基中，在23～285～70.9%的無菌氯化鈉1ml含菌數(shù)為50～100cfu試驗方法供試液的制備：取樣品10g〔ml〕參與無菌PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml，振搖使分散均勻□，用勻漿儀混勻□，置45℃水浴使膠囊殼溶化混勻□，制成1：10A取1:10〔1g1ml〕10ml100ml濾膜3次，每次100ml，在最終一次沖洗液中參與50~100cfu菌液，濾完后，將接有細菌的濾膜取出，菌面對上〔接觸細菌和樣品的面〕貼于已凝固的培育基上。大腸埃希菌、黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌貼于養(yǎng)分瓊脂培育基平皿上；白色珠菌、黑曲霉貼于玫瑰紅鈉瓊脂培育基平皿上。B取上述制備菌液各1ml加至100ml3次，每次100ml，濾完后，將接有細菌的濾膜取出，菌面對上〔接觸細菌和樣品的面〕貼于已凝固的培育基上。大腸埃希菌、黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌貼于養(yǎng)分瓊脂培育基平皿上；白色珠菌、黑曲霉貼于玫瑰紅鈉瓊脂培育基平皿上。C100ml3濾完后，將濾膜取出，接觸樣品的面對上貼于已凝固的培育基上。大腸埃希菌、黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌貼于養(yǎng)分瓊脂培育基平皿上；白色珠菌、黑曲霉貼于玫瑰紅鈉瓊脂培育基平皿上。DPH7.0-3100ml50~100cfu菌液，濾完后，將接有細菌的濾膜取出，菌面對上貼于已凝固的培育基上。大腸埃希菌、黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌貼于養(yǎng)分瓊脂培育基平皿上；白色珠菌、黑曲霉貼于玫瑰紅鈉瓊脂培育基平皿上。培育將大腸埃希菌、黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌在 30～35℃下培育48小時，將白色珠菌、黑23～2872試驗結(jié)果菌種名稱菌種名稱平均值大腸埃希菌黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色珠菌黑曲霉菌種名稱供試品比照組計數(shù)結(jié)果〔cfu/皿〕菌種名稱供試品比照組計數(shù)結(jié)果〔cfu/皿〕平均值大腸埃希菌黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色珠菌黑曲霉菌種名稱稀釋劑比照組計數(shù)結(jié)果〔cfu/皿〕菌種名稱稀釋劑比照組計數(shù)結(jié)果〔cfu/皿〕平均值大腸埃希菌黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色珠菌黑曲霉菌種名稱菌液組計數(shù)結(jié)果〔cfu/皿〕菌種名稱菌液組計數(shù)結(jié)果〔cfu/皿〕平均值大腸埃希菌黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色珠菌黑曲霉黑曲霉回收計算菌計數(shù)〔 cfu/皿〕菌種名稱菌計數(shù)〔 cfu/皿〕菌種名稱批號回收稀釋劑比照組 菌液組大腸埃希菌平均值黃色葡萄球菌平均值枯草芽孢桿菌平均值白色珠菌平均值黑曲霉平均值表中：回收 =稀釋劑比照組的平均菌數(shù)÷菌液組的平均菌數(shù)× 100%。菌計數(shù)〔 cfu/皿〕菌種名稱菌計數(shù)〔 cfu/皿〕菌種名稱批號回收試驗組 供試品比照組 菌液組大腸埃希菌平均值黃色葡萄球菌平均值枯草芽孢桿菌平均值白色珠菌平均值黑曲霉平均值表中：回收 =〔試驗組的平均菌數(shù)－供試品比照組的平均菌數(shù)〕÷菌液組的平均菌數(shù)× 100%。結(jié)論：經(jīng)過驗證，大腸埃希菌、黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色珠菌、黑曲霉的回收分別為 %、 %、 %、 %、 %。稀釋劑回收為 %、 %、 %、 %、 以上驗證結(jié)果證明，本品 承受上述方法進微生物限檢查。檢驗人： 復(fù)核人：驗證結(jié)果評價分析質(zhì)控部負責各項驗證、試驗結(jié)果記錄，驗證小組依據(jù)驗證、試驗結(jié)果進評價，起草驗證報告，報驗證委員會。驗證委員會負責對驗證結(jié)果進綜合評審，做出驗證結(jié)論，發(fā)放驗證證書。對驗證結(jié)果的評審應(yīng)包括：驗證試驗是否有遺；驗證明施過程中對驗證方案有無修改，修改緣由、依據(jù)以及是否經(jīng)過批準；驗證記錄是否完整；驗證試驗結(jié)果是否符合標準要求最終審批驗證報告由驗證組長審核后，報驗證總負責人批準，并簽發(fā)驗證證書。驗證報告月 日至 月 日，驗證小組依據(jù)批準的微生物限檢查方〔薄膜過濾法驗證文件對微生物限檢查法進相關(guān)的一系驗證工作， 預(yù)期效果，滋將有關(guān)事項說明如下：1、驗證方案在實施過程中未做修改。2、驗證方案各項性能指標在驗證中未作變動，誤差在允許范圍內(nèi)。3、驗證過程中結(jié)果符合規(guī)定要求，記錄完整屬實。4、驗證結(jié)果符合設(shè)計要求和GMP原則要求，可以投入使用。5、 組分或檢驗條件轉(zhuǎn)變時須重驗證。