質(zhì)譜技術(shù)在臨床微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用

質(zhì)譜技術(shù)在臨床微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用2021/10/101（一）、現(xiàn)代感染性疾病和

臨床微生物檢測(cè)現(xiàn)狀耐藥菌株增多疑難菌株增多現(xiàn)代感染性疾病新特點(diǎn)條件致病菌增多人員少、鑒定速度較慢感染菌種類增多2021/10/1022021/10/103臨床微生物當(dāng)前現(xiàn)狀病原生長(zhǎng)時(shí)間報(bào)告時(shí)間需氧菌24h2-3個(gè)工作日厭氧菌48h酵母菌2-5天2-5個(gè)工作日絲狀真菌2-5天2021/10/1042021/10/105常規(guī)微生物檢驗(yàn)遇到的困惑：★呼吸道、腸道標(biāo)本的細(xì)菌種類繁多，常規(guī)的鑒定成本高或者操作麻煩，容易漏掉或者忽視某些細(xì)菌?！飬捬蹙?、彎曲菌、分枝桿菌和真菌：細(xì)菌鑒定的死角，技術(shù)上不好掌握或者目前的方法難以實(shí)施?！镂⑸锏姆旨?jí)報(bào)告制度：存在很多變數(shù)，使得初次報(bào)告的結(jié)果可靠性得不到臨床的認(rèn)可。（比如：直接涂片，初步能估計(jì)細(xì)菌大類，但是無(wú)法確切的到種，和耐藥情況。）實(shí)驗(yàn)室要求：操作方便的，成本便宜的，性價(jià)比高的，臨床迫切需要的。2021/10/1062021/10/1072021/10/108臨床微生物實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化將實(shí)驗(yàn)室人員從一些技術(shù)要求較低的、能由儀器完成的工作中解脫出來(lái)，提高標(biāo)本處理效率，縮短TAT時(shí)間。

2021/10/109臨床的需求……2021/10/1010安圖生物Autof

ms1000MALDI-TOF革命性2021/10/1011臨床微生物獸醫(yī)微生物食品微生物（食品安全與質(zhì)控）環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)質(zhì)譜的應(yīng)用領(lǐng)域2021/10/1012（二）、基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀MALDI-TOFMS的組成飛行時(shí)間質(zhì)量檢測(cè)器（TOF）基質(zhì)輔助激光解吸電離離子源（MALDI）數(shù)據(jù)庫(kù)MALDI-TOFMS主機(jī)2021/10/1013（三）、MALDI-TOFMS的原理基本原理是將樣品分散在基質(zhì)分子中并形成晶體。當(dāng)用激光照射晶體時(shí)，基質(zhì)從激光中吸收能量，樣品解吸附，基質(zhì)-樣品之間發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移使得樣品分子電離，電離的樣品在電場(chǎng)作用下飛過(guò)真空的飛行管，根據(jù)到達(dá)檢測(cè)器的飛行時(shí)間不同而被檢測(cè)，即通過(guò)離子的質(zhì)量電荷之比（M/Z）與離子的飛行時(shí)間成正比來(lái)分析離子，從而測(cè)得并繪出樣品分子的質(zhì)譜圖。2021/10/1014蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)。不同的細(xì)菌或不同疾病的樣品，其蛋白質(zhì)的種類和含量不同。不同的蛋白質(zhì)解析后形成的多肽片段的種類、數(shù)量和分子量也不一樣，因而在一定的條件下，在電離空間的運(yùn)動(dòng)速度和距離不同。用質(zhì)譜儀將各種蛋白質(zhì)解析后在電離空間的運(yùn)動(dòng)速度和距離的軌跡記錄和描繪下來(lái)，則會(huì)形成不同的曲線圖形。2021/10/10152021/10/1016（四）、操作簡(jiǎn)便2021/10/1017樣品靶板細(xì)菌與基質(zhì)飛行管檢測(cè)器質(zhì)譜圖真空系統(tǒng)樣品靶板入口幾秒鐘即可得到結(jié)果基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOFMS)2021/10/1018MALDI-TOFMS蛋白質(zhì)指紋特征2021/10/1019MALDITOF檢測(cè)挑取部分菌落點(diǎn)樣至靶板加基質(zhì)液生成圖譜搜庫(kù)鑒定質(zhì)譜檢測(cè)流程2021/10/1020鑒定結(jié)果顯示綠色并且分?jǐn)?shù)最高的為該樣品的鑒定結(jié)果。2021/10/1021Bruker的結(jié)果報(bào)告：得分范圍分?jǐn)?shù)的解釋2.300-3.000highlyprobablespeciesidentification完全可靠地鑒定到種的水平2.000-2.299securegenusidentification,probablespeciesidentification可靠鑒定到屬的水平，有可能鑒定到種的水平1.700-1.999probablegenusidentification 有可能鑒定到屬的水平0.000-1.699noreliableidentification 沒(méi)有可信的鑒定結(jié)果AnalyteNameOrganism(bestmatch)ScoreOrganism(secondbestmatch)ScoreSample1Pseudomonasaeruginosa199551CHB1.906PseudomonasaeruginosaDSM1117DSM1.881Sample2ProteusmirabilisDSM18254DSM1.774noreliableidentification1.631Sample3Klebsiellapneumoniaessppneumoniae92951CHB2.064KlebsiellapneumoniaessppneumoniaeDSM30104THAM1.994Sample4EnterobactercloacaeMB11506-1_CHB2.299Enterobactercloacae13159_1CHB2.072優(yōu)點(diǎn)：直接可以打印缺點(diǎn)：目前沒(méi)有做接口連接到實(shí)驗(yàn)室的LIS系統(tǒng)2021/10/10222021/10/1023與現(xiàn)有傳統(tǒng)的鑒定診斷技術(shù)相比，具有操作簡(jiǎn)單、快速、通量高、靈敏度高、準(zhǔn)確度好、試劑耗品非常經(jīng)濟(jì)等優(yōu)勢(shì)。準(zhǔn)確度時(shí)間成本MALDI-TOF>90%5

min2元常規(guī)方法>80%5~48

h50元對(duì)臨床的意義：分級(jí)報(bào)告，縮短了TAT時(shí)間，尤其是厭氧菌、奴卡菌等非常難鑒定的菌提供巨大的幫助。2021/10/1024五、實(shí)現(xiàn)血培養(yǎng)的三級(jí)報(bào)告2021/10/10252021/10/10262021/10/1027微生物診斷技術(shù)不斷發(fā)展給臨床帶來(lái)了什么？1、非培養(yǎng)/難培養(yǎng)微生物的檢測(cè)能力大大提高2、縮短了常規(guī)微生物培養(yǎng)鑒定診斷藥敏時(shí)間(即TAT時(shí)間)3、從微生物檢驗(yàn)角度提供精準(zhǔn)的診斷2021/10/1028六、安圖微生物質(zhì)譜Autofms1000的優(yōu)勢(shì)1、本土產(chǎn)品維護(hù)保養(yǎng)方便及時(shí)試劑、耗材供應(yīng)及時(shí)價(jià)格便宜2021/10/1029數(shù)據(jù)庫(kù)主要包含：474個(gè)屬、2613多種、9531株（包含細(xì)菌、真菌等）正在開(kāi)發(fā)的數(shù)據(jù)庫(kù)：生物反恐、腸道微生物、海洋致病微生物、肉類蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)……2021/10/1030操作簡(jiǎn)便中文界面，單個(gè)軟件即可完成編輯、采集、鑒定；快速鑒定功能方便使用。2021/10/1031準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好上海臨檢中心評(píng)估項(xiàng)目總結(jié)：01

ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株鑒定準(zhǔn)確性安圖質(zhì)譜檢測(cè)微生物的結(jié)果與172株ATCC國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)菌株的一致性為97.67%，高于布魯克的93.60%。02

臨床菌株鑒定準(zhǔn)確性安圖質(zhì)譜Autofms1000對(duì)176株臨床菌株的鑒定準(zhǔn)確性為100%，高于布魯克的98.30%。04

鑒定重復(fù)性安圖質(zhì)譜Autofms1000對(duì)65株實(shí)驗(yàn)菌株的鑒定結(jié)果全部可靠，重復(fù)性較好。03

不同前處理方法的鑒定準(zhǔn)確性三種前處理方式安圖質(zhì)譜Autofms1000的鑒定準(zhǔn)確性均高于布魯克質(zhì)譜，其中甲酸裂解法更適于臨床使用。Autofms1000鑒定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，適于臨床微生物檢測(cè)。2021/10/10322021/10/1033中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院評(píng)估結(jié)論Autofms1000鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性、重復(fù)性可靠2021/10/10342021/10/1035MALDI-TOFMS對(duì)血培養(yǎng)陽(yáng)性樣本的直接檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)：快速。缺點(diǎn)：操作麻煩，且抽濾容易產(chǎn)生氣溶膠，污染環(huán)境。不易于在臨床推廣。鑒定的缺陷：多重菌感染不能鑒定，或者鑒定有誤，鏈球菌等難于區(qū)分的菌是最大的問(wèn)題。2021/10/1036MRSA的鑒別和分型[Edwards-Jonesetal.JMedMicrobiol.2000]2021/10/1037MRSA的鑒別和分型[Woltersetal.IJMM.2011]從圖中可見(jiàn)，可以做同源性的比較2021/10/1038使用體會(huì)成本低，快速，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確，性價(jià)比高。可以聚類分析，即同源性的研究，在耐藥上有優(yōu)勢(shì)?？梢越?kù)中沒(méi)有的細(xì)菌的數(shù)據(jù)庫(kù)，有地域性的數(shù)據(jù)庫(kù)。最好選擇血平板上的菌落，含指示劑的平板容易降低檢出得分，鑒定準(zhǔn)確性受影響。2021/10/1039