微生物的生理生化反應(yīng)

微生物的生理生化反應(yīng)微生物的生理生化反應(yīng)第1頁(yè)微生物生理生化反應(yīng)淀粉水解試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)吲哚、甲基紅、V-P反應(yīng)微生物的生理生化反應(yīng)第2頁(yè)

微生物對(duì)大分子淀粉不能直接利用，必須靠產(chǎn)生胞外淀粉酶將其分解后才能吸收利用。微生物胞外酶（如淀粉酶、脂肪酶等）將大分子物質(zhì)分解過(guò)程能夠經(jīng)過(guò)觀察細(xì)菌菌落周圍物質(zhì)改變來(lái)證實(shí)。淀粉遇碘液呈藍(lán)色，但在淀粉被細(xì)菌水解區(qū)域，遇碘不再呈藍(lán)色，這可作為細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶證據(jù)。1、淀粉水解試驗(yàn)微生物的生理生化反應(yīng)第3頁(yè)菌種：枯草芽孢桿菌，大腸桿菌。培養(yǎng)基：固體淀粉培養(yǎng)基。溶液或試劑：盧戈氏碘液。器材：無(wú)菌培養(yǎng)皿，接種環(huán)，試管架。1、淀粉水解試驗(yàn)微生物的生理生化反應(yīng)第4頁(yè)操作步驟：

（1）無(wú)菌操作制備淀粉固定培養(yǎng)基平板。（2）將枯草芽孢桿菌、大腸桿菌分別在同一平板不一樣個(gè)別劃線接種，在平板反面分別寫上菌名。（4）將平板倒置在37℃溫箱中培養(yǎng)24h。（5）觀察各種細(xì)菌生長(zhǎng)情況。滴入少許盧戈氏碘液于平皿中,輕輕旋轉(zhuǎn)平板,使碘液均勻鋪滿整個(gè)平板。1、淀粉水解試驗(yàn)++枯草大腸微生物的生理生化反應(yīng)第5頁(yè)結(jié)果：將結(jié)果填入下表。“＋”表示陽(yáng)性，“－”表示陰性。菌名枯草芽孢桿菌大腸桿菌淀粉水解試驗(yàn)1、淀粉水解試驗(yàn)微生物的生理生化反應(yīng)第6頁(yè)2、糖發(fā)酵試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)是常見(jiàn)判別微生物生化反應(yīng)。一些細(xì)菌能利用糖類作為碳源和能源，使糖類分解而產(chǎn)酸產(chǎn)氣或產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。不一樣種細(xì)菌對(duì)于各種糖類利用能力不一樣，分解產(chǎn)物也不一樣。大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣；普通變形桿菌只能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能分解乳糖。傷寒桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不能分解乳糖。微生物的生理生化反應(yīng)第7頁(yè)1.菌種：大腸桿菌，普通變形桿菌斜面各一支。

2.培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管各3支（內(nèi)裝有倒置杜漢氏小管）。

3.儀器或其它用具：試管架，接種環(huán)等。2、糖發(fā)酵試驗(yàn)微生物的生理生化反應(yīng)第8頁(yè)

產(chǎn)酸指示劑、倒置小管微生物的生理生化反應(yīng)第9頁(yè)1.用標(biāo)簽紙?jiān)诟髟嚬芡獗谏戏謩e標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱和所接種細(xì)菌菌名。2.取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，分別接入大腸桿菌，普通變形桿菌，第三支不接種，作為對(duì)照。另取乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管3支，一樣分別接入大腸桿菌，普通變形桿菌，第三支不接種，作為對(duì)照。2、糖發(fā)酵試驗(yàn)微生物的生理生化反應(yīng)第10頁(yè)在接種后，輕緩搖動(dòng)試管，使其均勻，預(yù)防倒置小管進(jìn)入氣泡。

3.將接種過(guò)和作為對(duì)照6支試管均置37℃培養(yǎng)24～48h。

4.觀察各試管顏色改變及杜漢氏小管中有沒(méi)有氣泡。2、糖發(fā)酵試驗(yàn)微生物的生理生化反應(yīng)第11頁(yè)試驗(yàn)匯報(bào)將結(jié)果填入下表?！?”表示產(chǎn)酸或產(chǎn)氣，“-”表示不產(chǎn)酸或不產(chǎn)氣。

糖類發(fā)酵大腸桿菌普通變形桿菌對(duì)照葡萄糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵2、糖發(fā)酵試驗(yàn)微生物的生理生化反應(yīng)第12頁(yè)吲哚試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)與V.P.反應(yīng)吲哚試驗(yàn)（indoltest）甲基紅試驗(yàn)（methylredtest）V.P.反應(yīng)（Voges-Prokauertest）微生物的生理生化反應(yīng)第13頁(yè)一、目標(biāo)要求了解試驗(yàn)原理及其在腸道菌判定中意義和方法。微生物的生理生化反應(yīng)第14頁(yè)二、基礎(chǔ)原理吲哚試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、伏-普試驗(yàn)主要用來(lái)判別大腸桿菌與產(chǎn)氣腸桿菌（Enterobacteraerogenes）。主要是用于水細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，因?yàn)榇竽c桿菌雖非致病菌，但在飲水中若大腸桿菌超出一定數(shù)量則表示受糞便污染；而產(chǎn)氣腸桿菌則廣泛存在于自然界中，所以，檢驗(yàn)水時(shí)要將二者區(qū)分開來(lái)。微生物的生理生化反應(yīng)第15頁(yè)有些細(xì)菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中色氨酸產(chǎn)生吲哚和丙酮酸。吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，就會(huì)形成紅色玫瑰吲哚。色氨酸水解反應(yīng)吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛反應(yīng)大腸桿菌吲哚反應(yīng)陽(yáng)性，產(chǎn)氣腸桿菌為陰性。吲哚試驗(yàn)微生物的生理生化反應(yīng)第16頁(yè)微生物的生理生化反應(yīng)第17頁(yè)一些細(xì)菌在糖代謝過(guò)程中，將培養(yǎng)基中糖分解為甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基變酸，加入培養(yǎng)基中甲基紅指示劑[pH4.2（紅色）-6.3（黃色）]，可使培養(yǎng)基由原來(lái)桔黃色變?yōu)榧t色，即甲基紅陽(yáng)性反應(yīng)。大腸桿菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸;產(chǎn)氣腸桿菌將有機(jī)酸轉(zhuǎn)化為非酸性末端產(chǎn)物,如乙醇、丙酮酸等。甲基紅試驗(yàn)微生物的生理生化反應(yīng)第18頁(yè)伏-普試驗(yàn)一些細(xì)菌可利用葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)行縮合，脫羧變成乙酰甲基甲醇，此物在堿性條件下能被空氣中氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白胨中精氨酸胍基作用，生成紅色化合物，即伏-普反應(yīng)陽(yáng)性，沒(méi)有紅色化合物產(chǎn)生則為陰性。產(chǎn)氣腸桿菌伏-普反應(yīng)陽(yáng)性，大腸桿菌伏-普為陰性。微生物的生理生化反應(yīng)第19頁(yè)微生物的生理生化反應(yīng)第20頁(yè)三、器材菌種

大腸桿菌，產(chǎn)氣腸桿菌；培養(yǎng)基

蛋白胨水培養(yǎng)基，葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基；溶液或試劑

甲基紅試劑，40％KOH，5％α-萘酚，乙醚，吲哚試劑等。微生物的生理生化反應(yīng)第21頁(yè)四、操作步驟1．接種與培養(yǎng)

(1)將大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌分別接種于2支蛋白胨水培養(yǎng)基中（做吲哚試驗(yàn)），置37℃溫室中培養(yǎng)2天。

(2)將上述二菌分別接種于2支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中（做甲基紅試驗(yàn)與伏-普試驗(yàn)），置37℃溫室培養(yǎng)2天。微生物的生理生化反應(yīng)第22頁(yè)2．觀察結(jié)果

(1)吲哚試驗(yàn)于培養(yǎng)48小時(shí)后蛋白胨水培養(yǎng)物內(nèi)加3—4滴乙醚，搖動(dòng)數(shù)次，靜置1—3分鐘，待乙醚上升后，沿管壁漸漸加入2滴吲哚試劑，在乙醚和培養(yǎng)物之間產(chǎn)生紅色環(huán)狀物為陽(yáng)性反應(yīng)。微生物的生理生化反應(yīng)第23頁(yè)(2)甲基紅試驗(yàn)培養(yǎng)48小時(shí)后，將葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物分為兩小管（其中一管留做伏-普試驗(yàn)），在一管內(nèi)加甲基紅試劑2滴，培養(yǎng)基變紅色者為陽(yáng)性，黃色者為陰性。微生物的生理生化反應(yīng)第24頁(yè)(3)伏—普試驗(yàn)培養(yǎng)兩天后，將另一支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物內(nèi)加入5～10滴40％KOH，然后加入等量5％α-萘酚溶液，用力振蕩，再放入37℃溫箱中保溫15～30min，以加緊