學(xué)習(xí)單元21纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)

血液學(xué)檢驗(yàn)

學(xué)習(xí)單元21：纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)檢驗(yàn)技師考試大綱--血栓與止血的基本理論知識(shí)點(diǎn)要點(diǎn)要求纖維蛋白溶解系統(tǒng)纖溶系統(tǒng)組成及特性掌握纖維蛋白溶解機(jī)制掌握01概述纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)纖溶系統(tǒng)作用：是將沉積在血管內(nèi)外的纖維蛋白溶解，起到修復(fù)、祛除和防止血管內(nèi)由于纖維蛋白沉著(如血栓形成)引起的阻塞作用。功能亢進(jìn)可引起出血，功能減低則可導(dǎo)致血栓形成，因而纖溶系統(tǒng)具有重要的生理和病理意義。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)血栓形成出血不止減弱

亢進(jìn)亢進(jìn)減弱凝血纖溶纖溶抑制動(dòng)態(tài)平衡抗凝血纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)纖溶系統(tǒng)的組成纖溶系統(tǒng)的組成纖溶酶原激活物組織纖溶酶原激活物(t-PA)尿激酶樣纖溶酶原激活物(u-PA)纖溶酶原(PLG)和纖溶酶(PL)纖溶抑制物纖溶酶原激活物抑制劑(PAI)纖溶酶抑制物凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)纖維蛋白的溶解機(jī)制纖維蛋白的溶解機(jī)制纖溶酶原被激活為纖溶酶內(nèi)激活途徑外激活途徑外源激活途徑纖溶酶水解纖維蛋白(原)及其他蛋白質(zhì)纖維蛋白原的降解可溶性纖維蛋白的降解交聯(lián)纖維蛋白的降解碎片X’、Y’、D’、E’和D-D二聚體等復(fù)合物纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物的作用纖溶酶對(duì)纖維蛋白和(或)纖維蛋白原裂解產(chǎn)物統(tǒng)稱為纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物(FDP)。FDP中的X(或X’)、Y(或Y’)和E(或E’)片段都保留了類似纖維蛋白原與凝血酶作用的部位，因此這些片段可與纖維蛋白原競(jìng)爭(zhēng)凝血酶，①阻止纖維蛋白單體(FM)形成，并可與FM結(jié)合形成可溶性復(fù)合物，②抑制FM聚合和交聯(lián)成不溶性纖維蛋白，因而發(fā)揮抗凝作用。由于交聯(lián)纖維蛋白的裂解產(chǎn)物D二聚體等發(fā)生在繼發(fā)性纖溶之后，因此它們的檢測(cè)，區(qū)別原發(fā)性與繼發(fā)性纖溶有較高的價(jià)值。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物的作用纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物02實(shí)驗(yàn)室檢查纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)（一）優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間測(cè)定【原理】血漿優(yōu)球蛋白組分中含纖維蛋白原、纖溶酶原和纖溶酶原激活物等，但不含纖溶酶抑制物。用低離子強(qiáng)度和pHh4.5的溶液沉淀和分離優(yōu)球蛋白，再溶于緩沖液中，加鈣或凝血酶使其凝固，F(xiàn)g轉(zhuǎn)變成纖維蛋白凝塊，測(cè)定凝塊完全溶解的時(shí)間，即優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間（ELT）?！緟⒖紖^(qū)間】加鈣法：129min48s±4min6s；加凝血酶法：123±24min?！九R床意義】1.ELT縮短（<70min）表明纖溶活性增強(qiáng)，見于原發(fā)性和繼發(fā)性（DIC）纖溶亢進(jìn)。但在DIC早期尚未發(fā)生繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)時(shí)，或當(dāng)纖溶極度亢進(jìn)，纖溶酶絕大部分已被消化時(shí)，可為陰性。2.ELT延長(zhǎng)表明纖溶活性減低，見于血栓形成前期和血栓形成性疾病。優(yōu)球蛋白：血漿中的一類球蛋白，溶于等滲鹽溶液，不溶于低離子強(qiáng)度的溶液或純水，加入硫酸銨至濃度33%時(shí)沉淀。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)（二）血漿組織纖溶酶原激活物和纖溶酶原激活物抑制劑的測(cè)定（ELISA法）【原理】根據(jù)雙抗體夾心法原理，將純化的組織纖溶酶原激活物（t-PA）或纖溶酶原激活物抑制劑（PAI）單克隆抗體包被在反應(yīng)板上，加入待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品，加過氧化物酶標(biāo)記的t-PA或PAI抗體，再加鄰苯二胺（OPD）顯色后讀取A值，計(jì)算出各自的血漿濃度。【參考區(qū)間】t-PA：1-12μg/L；PAI：2-10μg/L?！九R床意義】1.t-PA增高見于應(yīng)激反應(yīng)、劇烈運(yùn)動(dòng)、先天性增高以及纖溶亢進(jìn)時(shí)。減低往往見于高凝狀態(tài)和血栓性疾病、口服避孕藥、肥胖癥等。2.PAI增高見于血栓性疾病和高凝狀態(tài)，減低見于原發(fā)性或繼發(fā)性纖溶癥。3.t-PA和PAI的檢測(cè)不僅是為了了解纖溶系統(tǒng)激活狀態(tài)，目前在動(dòng)靜脈血栓形成性疾病的診斷、預(yù)后和治療評(píng)價(jià)中也被廣泛應(yīng)用。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)（三）血漿纖溶酶原活性(PLG：A)測(cè)定【原理】免疫擴(kuò)散法受檢血漿（含抗原）加到含抗纖溶酶原（PLG）血清的瓊脂糖擴(kuò)散板中，自然擴(kuò)散一定時(shí)間后，通過測(cè)定抗原抗體反應(yīng)沉淀弧的直徑來計(jì)算受檢者血漿纖溶酶原（PLG抗原）含量。其直徑與PLG含量呈正相關(guān)。發(fā)色底物法受檢血漿中加鏈激酶(SK)和發(fā)色底物(S-2251)，受檢血漿中的PLG在SK的作用下，轉(zhuǎn)變成PL，后者作用于發(fā)色底物，釋出對(duì)硝基苯胺(PNA)而顯色。顯色的深淺與纖溶酶的水平呈正相關(guān)，通過計(jì)算求得血漿中PLG的活性。【參考區(qū)間】免疫擴(kuò)散法：230～340mg/L；發(fā)色底物法：75-150%?！九R床意義】1.減低：見于先天性纖溶酶原缺乏癥，但更常見于纖溶酶原激活物活性增強(qiáng)的情況，如原發(fā)性和繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)、溶栓治療后、重癥肝炎、肝硬化、肝葉切除術(shù)、大手術(shù)后、腫瘤播散、嚴(yán)重感染等。2.增高：見于纖溶活性的降低，如高凝狀態(tài)和血栓性疾病。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)（四）α2-抗纖溶酶（α2-AP）活性及抗原測(cè)定【原理】發(fā)色底物法：受檢血漿中加人過量的纖溶酶，使α2-AP與纖溶酶形成復(fù)合物，剩余的纖溶酶作用于發(fā)色底物（HD-Nva-CHA-Lys-PNA）釋出PNA而顯色，顯色的深淺與血漿中剩余的纖溶酶正相關(guān)，而纖溶酶又與血漿中α2-AP呈負(fù)相關(guān)?！緟⒖紖^(qū)間】95.6%±12.8%?！九R床意義】1.增高：見于靜脈、動(dòng)脈血栓形成，惡性腫瘤、分娩后等。2.減低：見于肝病、DIC、手術(shù)后、先天性α2-AP缺乏癥。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)（五）血漿魚精蛋白副凝固試驗(yàn)【原理】纖維蛋白原在凝血酶作用下釋放出A肽和B肽后轉(zhuǎn)變成纖維蛋白單體(FM)。FM具有自行聚合呈肉眼可見的纖維、絮狀或膠凍狀的特性。如發(fā)生繼發(fā)性纖溶，存在纖維蛋白降解產(chǎn)物，尤其X’片段可和FM形成可溶性復(fù)合物，而硫酸魚精蛋白具有分離這種復(fù)合物的能力，可使FM游離出來，形成肉眼可見的纖維素樣物質(zhì)，這種不需凝血酶的“凝結(jié)”現(xiàn)象叫副凝現(xiàn)象，稱為血漿魚精蛋白副凝固(3P)試驗(yàn)?！緟⒖紖^(qū)間】陰性【臨床意義】1.陽性見于DIC早期、中期，嚴(yán)重創(chuàng)傷，大手術(shù)，咯血、嘔血以及久置冰箱的樣品。2.DIC晚期和原發(fā)性纖溶(因血中無FM)時(shí)也表現(xiàn)為陰性。故在區(qū)別原發(fā)性和繼發(fā)性纖溶時(shí)有一定意義。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)（六）血漿纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物的檢測(cè)【原理】膠乳凝集試驗(yàn)(Fi試驗(yàn))用特異性抗纖維蛋白(原)D.E片段抗體標(biāo)記的膠乳顆粒與受檢血清混合，如血清中含有纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物(FDP)，特別是D.E片段，可發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，導(dǎo)致膠乳顆粒凝集。乳膠增強(qiáng)散射比濁法將FDP抗體包被在乳膠顆粒上，然后與FDP結(jié)合，形成FDP抗原抗體復(fù)合物的乳膠凝集顆粒，體積增大，根據(jù)散射光的變化計(jì)算出其含量。ELISA法將抗FDP抗體(多克隆或單克隆抗體)包被于固相載體上(酶標(biāo)反應(yīng)板)，加入待測(cè)血清或尿液。如存在FDP即發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，形成的復(fù)合物再與酶聯(lián)抗體(過氧化物酶標(biāo)記的相同抗體)反應(yīng)，以O(shè)PD顯色，讀取的A值與FDP含量呈正比，參照用標(biāo)準(zhǔn)品制成的標(biāo)準(zhǔn)曲線可算出待測(cè)樣本的FDP量?！緟⒖紖^(qū)間】膠乳凝集法：陰性；乳膠增強(qiáng)散射比濁法：（0-5）μg/ml；ELISA法：血清（28±17）mg/L?！九R床意義】血漿FDP增高常見于DIC、急性靜脈血栓、原發(fā)性纖溶癥、鏈激酶等溶栓治療、急性心肌梗死、嚴(yán)重的肺炎、大手術(shù)后、惡性腫瘤和休克等。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗(yàn)（七）血漿D-二聚體(D-dimer，DD)測(cè)定【原理】乳膠凝集法受檢血漿中加入標(biāo)有D-二聚體（DD）單克隆抗體的乳膠顆粒懸液，若血漿中的D-二聚體含量高于0.5mg/L，則與乳膠顆粒上標(biāo)記的單抗發(fā)生凝集反應(yīng)。乳膠增強(qiáng)散射比濁法將D-二聚體抗體包被在乳膠顆粒上，然后與D-二聚體結(jié)合，形成D-二聚體抗原抗體復(fù)合物的乳膠凝集顆粒，體積增大，根據(jù)散射光的變化計(jì)算出其含量。ELISA法雙抗體夾心法。【參考區(qū)間】膠乳凝集法：陰性；乳膠增強(qiáng)散射比濁法：