學習單元21纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗

血液學檢驗

學習單元21：纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗檢驗技師考試大綱--血栓與止血的基本理論知識點要點要求纖維蛋白溶解系統(tǒng)纖溶系統(tǒng)組成及特性掌握纖維蛋白溶解機制掌握01概述纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗纖溶系統(tǒng)作用：是將沉積在血管內外的纖維蛋白溶解，起到修復、祛除和防止血管內由于纖維蛋白沉著(如血栓形成)引起的阻塞作用。功能亢進可引起出血，功能減低則可導致血栓形成，因而纖溶系統(tǒng)具有重要的生理和病理意義。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗血栓形成出血不止減弱

亢進亢進減弱凝血纖溶纖溶抑制動態(tài)平衡抗凝血纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗纖溶系統(tǒng)的組成纖溶系統(tǒng)的組成纖溶酶原激活物組織纖溶酶原激活物(t-PA)尿激酶樣纖溶酶原激活物(u-PA)纖溶酶原(PLG)和纖溶酶(PL)纖溶抑制物纖溶酶原激活物抑制劑(PAI)纖溶酶抑制物凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗纖維蛋白的溶解機制纖維蛋白的溶解機制纖溶酶原被激活為纖溶酶內激活途徑外激活途徑外源激活途徑纖溶酶水解纖維蛋白(原)及其他蛋白質纖維蛋白原的降解可溶性纖維蛋白的降解交聯(lián)纖維蛋白的降解碎片X’、Y’、D’、E’和D-D二聚體等復合物纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗纖維蛋白（原）降解產物的作用纖溶酶對纖維蛋白和(或)纖維蛋白原裂解產物統(tǒng)稱為纖維蛋白(原)降解產物(FDP)。FDP中的X(或X’)、Y(或Y’)和E(或E’)片段都保留了類似纖維蛋白原與凝血酶作用的部位，因此這些片段可與纖維蛋白原競爭凝血酶，①阻止纖維蛋白單體(FM)形成，并可與FM結合形成可溶性復合物，②抑制FM聚合和交聯(lián)成不溶性纖維蛋白，因而發(fā)揮抗凝作用。由于交聯(lián)纖維蛋白的裂解產物D二聚體等發(fā)生在繼發(fā)性纖溶之后，因此它們的檢測，區(qū)別原發(fā)性與繼發(fā)性纖溶有較高的價值。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗纖維蛋白（原）降解產物的作用纖維蛋白(原)降解產物02實驗室檢查纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗（一）優(yōu)球蛋白溶解時間測定【原理】血漿優(yōu)球蛋白組分中含纖維蛋白原、纖溶酶原和纖溶酶原激活物等，但不含纖溶酶抑制物。用低離子強度和pHh4.5的溶液沉淀和分離優(yōu)球蛋白，再溶于緩沖液中，加鈣或凝血酶使其凝固，F(xiàn)g轉變成纖維蛋白凝塊，測定凝塊完全溶解的時間，即優(yōu)球蛋白溶解時間（ELT）?！緟⒖紖^(qū)間】加鈣法：129min48s±4min6s；加凝血酶法：123±24min?！九R床意義】1.ELT縮短（<70min）表明纖溶活性增強，見于原發(fā)性和繼發(fā)性（DIC）纖溶亢進。但在DIC早期尚未發(fā)生繼發(fā)性纖溶亢進時，或當纖溶極度亢進，纖溶酶絕大部分已被消化時，可為陰性。2.ELT延長表明纖溶活性減低，見于血栓形成前期和血栓形成性疾病。優(yōu)球蛋白：血漿中的一類球蛋白，溶于等滲鹽溶液，不溶于低離子強度的溶液或純水，加入硫酸銨至濃度33%時沉淀。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗（二）血漿組織纖溶酶原激活物和纖溶酶原激活物抑制劑的測定（ELISA法）【原理】根據雙抗體夾心法原理，將純化的組織纖溶酶原激活物（t-PA）或纖溶酶原激活物抑制劑（PAI）單克隆抗體包被在反應板上，加入待測樣本和標準品，加過氧化物酶標記的t-PA或PAI抗體，再加鄰苯二胺（OPD）顯色后讀取A值，計算出各自的血漿濃度。【參考區(qū)間】t-PA：1-12μg/L；PAI：2-10μg/L?！九R床意義】1.t-PA增高見于應激反應、劇烈運動、先天性增高以及纖溶亢進時。減低往往見于高凝狀態(tài)和血栓性疾病、口服避孕藥、肥胖癥等。2.PAI增高見于血栓性疾病和高凝狀態(tài)，減低見于原發(fā)性或繼發(fā)性纖溶癥。3.t-PA和PAI的檢測不僅是為了了解纖溶系統(tǒng)激活狀態(tài)，目前在動靜脈血栓形成性疾病的診斷、預后和治療評價中也被廣泛應用。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗（三）血漿纖溶酶原活性(PLG：A)測定【原理】免疫擴散法受檢血漿（含抗原）加到含抗纖溶酶原（PLG）血清的瓊脂糖擴散板中，自然擴散一定時間后，通過測定抗原抗體反應沉淀弧的直徑來計算受檢者血漿纖溶酶原（PLG抗原）含量。其直徑與PLG含量呈正相關。發(fā)色底物法受檢血漿中加鏈激酶(SK)和發(fā)色底物(S-2251)，受檢血漿中的PLG在SK的作用下，轉變成PL，后者作用于發(fā)色底物，釋出對硝基苯胺(PNA)而顯色。顯色的深淺與纖溶酶的水平呈正相關，通過計算求得血漿中PLG的活性?！緟⒖紖^(qū)間】免疫擴散法：230～340mg/L；發(fā)色底物法：75-150%?！九R床意義】1.減低：見于先天性纖溶酶原缺乏癥，但更常見于纖溶酶原激活物活性增強的情況，如原發(fā)性和繼發(fā)性纖溶亢進、溶栓治療后、重癥肝炎、肝硬化、肝葉切除術、大手術后、腫瘤播散、嚴重感染等。2.增高：見于纖溶活性的降低，如高凝狀態(tài)和血栓性疾病。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗（四）α2-抗纖溶酶（α2-AP）活性及抗原測定【原理】發(fā)色底物法：受檢血漿中加人過量的纖溶酶，使α2-AP與纖溶酶形成復合物，剩余的纖溶酶作用于發(fā)色底物（HD-Nva-CHA-Lys-PNA）釋出PNA而顯色，顯色的深淺與血漿中剩余的纖溶酶正相關，而纖溶酶又與血漿中α2-AP呈負相關?！緟⒖紖^(qū)間】95.6%±12.8%?！九R床意義】1.增高：見于靜脈、動脈血栓形成，惡性腫瘤、分娩后等。2.減低：見于肝病、DIC、手術后、先天性α2-AP缺乏癥。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗（五）血漿魚精蛋白副凝固試驗【原理】纖維蛋白原在凝血酶作用下釋放出A肽和B肽后轉變成纖維蛋白單體(FM)。FM具有自行聚合呈肉眼可見的纖維、絮狀或膠凍狀的特性。如發(fā)生繼發(fā)性纖溶，存在纖維蛋白降解產物，尤其X’片段可和FM形成可溶性復合物，而硫酸魚精蛋白具有分離這種復合物的能力，可使FM游離出來，形成肉眼可見的纖維素樣物質，這種不需凝血酶的“凝結”現(xiàn)象叫副凝現(xiàn)象，稱為血漿魚精蛋白副凝固(3P)試驗?！緟⒖紖^(qū)間】陰性【臨床意義】1.陽性見于DIC早期、中期，嚴重創(chuàng)傷，大手術，咯血、嘔血以及久置冰箱的樣品。2.DIC晚期和原發(fā)性纖溶(因血中無FM)時也表現(xiàn)為陰性。故在區(qū)別原發(fā)性和繼發(fā)性纖溶時有一定意義。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗（六）血漿纖維蛋白(原)降解產物的檢測【原理】膠乳凝集試驗(Fi試驗)用特異性抗纖維蛋白(原)D.E片段抗體標記的膠乳顆粒與受檢血清混合，如血清中含有纖維蛋白(原)降解產物(FDP)，特別是D.E片段，可發(fā)生抗原抗體反應，導致膠乳顆粒凝集。乳膠增強散射比濁法將FDP抗體包被在乳膠顆粒上，然后與FDP結合，形成FDP抗原抗體復合物的乳膠凝集顆粒，體積增大，根據散射光的變化計算出其含量。ELISA法將抗FDP抗體(多克隆或單克隆抗體)包被于固相載體上(酶標反應板)，加入待測血清或尿液。如存在FDP即發(fā)生抗原抗體反應，形成的復合物再與酶聯(lián)抗體(過氧化物酶標記的相同抗體)反應，以OPD顯色，讀取的A值與FDP含量呈正比，參照用標準品制成的標準曲線可算出待測樣本的FDP量。【參考區(qū)間】膠乳凝集法：陰性；乳膠增強散射比濁法：（0-5）μg/ml；ELISA法：血清（28±17）mg/L?！九R床意義】血漿FDP增高常見于DIC、急性靜脈血栓、原發(fā)性纖溶癥、鏈激酶等溶栓治療、急性心肌梗死、嚴重的肺炎、大手術后、惡性腫瘤和休克等。纖維蛋白溶解系統(tǒng)及檢驗（七）血漿D-二聚體(D-dimer，DD)測定【原理】乳膠凝集法受檢血漿中加入標有D-二聚體（DD）單克隆抗體的乳膠顆粒懸液，若血漿中的D-二聚體含量高于0.5mg/L，則與乳膠顆粒上標記的單抗發(fā)生凝集反應。乳膠增強散射比濁法將D-二聚體抗體包被在乳膠顆粒上，然后與D-二聚體結合，形成D-二聚體抗原抗體復合物的乳膠凝集顆粒，體積增大，根據散射光的變化計算出其含量。ELISA法雙抗體夾心法?！緟⒖紖^(qū)間】膠乳凝集法：陰性；乳膠增強散射比濁法：