高碘酸氧化法測(cè)定葡萄糖酸的含量

《生物產(chǎn)品的分析與檢驗(yàn)技術(shù)》有機(jī)酸的分析與檢驗(yàn)-----葡萄糖酸的分析與測(cè)定生物技術(shù)及應(yīng)用專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)主講教師：張惠目錄1．葡萄糖酸性質(zhì)2.葡萄糖酸的結(jié)構(gòu)3．葡萄糖酸的用途4．葡萄糖酸的測(cè)定方法用高碘酸氧化法測(cè)定發(fā)酵液中葡萄糖酸含量。一、葡萄糖酸的性質(zhì)葡萄糖酸，又名D-葡萄糖酸，醛糖酸，是葡萄糖的醛基經(jīng)氧化生成的糖酸；葡萄糖酸天然存在于水果、蜂蜜、紅酒和紅茶菌中。弱酸性，可溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚和大多數(shù)有機(jī)溶劑。二、葡萄糖酸的結(jié)構(gòu)化學(xué)式為C6H12O7，分子量為196.1566結(jié)構(gòu)式如下：三、葡萄糖酸的用途用作蛋白凝固劑、食品防腐劑和食品酸度調(diào)節(jié)劑；用于生產(chǎn)葡萄糖酸鹽，如葡萄糖酸鈉、葡萄糖酸鉀、葡萄糖酸鈣、葡萄糖酸鋅等。在水溶液中轉(zhuǎn)化為葡萄糖酸內(nèi)酯和葡萄糖酸內(nèi)酯的平衡混合液。葡萄糖酸內(nèi)酯可以作為調(diào)味劑、豆腐凝固劑pH降低劑及膨松劑的原料；加入牛乳中可以防止乳石，加入牙膏中有助于清除牙垢。葡萄糖內(nèi)酯點(diǎn)出的內(nèi)酯豆腐更加細(xì)膩和富于營(yíng)養(yǎng)。四、葡萄糖酸含量測(cè)定方法高碘酸氧化法異羥肟酸比色法測(cè)定方法一、高碘酸氧化法測(cè)定葡萄糖酸含量（一）測(cè)定原理葡萄糖酸經(jīng)過(guò)高碘酸（HIO4）氧化后生成甲醛，生成的甲醛用乙酰丙酮比色法測(cè)定。過(guò)剩的HIO4

和生成的HIO3用NaHSO3溶液還原。在過(guò)量銨鹽存在下，甲醛與乙酰丙酮生成黃色的二乙?；浔R易司啶，根據(jù)顏色的深淺，比色定量，生成的顏色能穩(wěn)定10h。（二）儀器設(shè)備

主要儀器設(shè)備

可見分光光度計(jì)旋渦混合儀恒溫水浴鍋

玻璃器皿比色管25mL容量瓶100ml

移液管（三）操作步驟1.溶液的配制（1）乙酰丙酮試劑：醋酸銨25g，冰醋酸3mL，新蒸餾的乙酰丙酮0.2mL，全部溶解于100mL水中。（2）0.02mol/L高碘酸溶液（3）1g/L亞硫酸氫鈉溶液（4）5mmol/L的葡萄糖酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（三）操作步驟2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確配制5mmol/L的葡萄糖酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，按下表在各管中加樣試管號(hào)012345678910標(biāo)準(zhǔn)樣/mL00.10.20.30.40.50.60.70.80.91高碘酸/mL01111111111（三）操作步驟2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制（1）在室溫下任其反應(yīng)20min。在旋渦混合器上充分混合并滴加NaHSO3至褐色剛褪。每管各加2mL乙酰丙酮試劑，定容至25mL。沸水浴中加熱3min，冷卻。（2）在可見分光光度計(jì)420nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值，用空白管溶液調(diào)零點(diǎn)，以葡萄糖酸濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（三）操作步驟2.試樣中葡萄糖酸含量的測(cè)定精確稱取樣品0.1~0.2g，加水溶解并定容至100mL。將樣品溶液稀釋適當(dāng)倍數(shù)，吸取1.0mL樣品稀釋液加入試管中，再按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法操作，以下各步相同，測(cè)得的吸光值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的葡萄糖酸含量。（四）結(jié)果記錄與計(jì)算表1：實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)記錄表1.結(jié)果記錄：將測(cè)定結(jié)果按下表內(nèi)容準(zhǔn)確填寫試管編號(hào)123平均值樣品質(zhì)量，g樣品溶液的稀釋倍數(shù)從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的葡萄糖酸的含量，μg樣品中葡萄糖酸的含量,%（四）結(jié)果記錄與計(jì)算式中：w—樣品中葡萄糖酸的含量，%m1—從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的葡萄糖酸的含量，μgF—樣品溶液的稀釋倍數(shù)