病理室常用試劑配制方法

關(guān)于病理室常用試劑配制方法第1頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月病理常用試劑及染液的配制1.蘇木素配制方法2.伊紅配制方法3.脫鈣液配制方法4.鹽酸酒精配制方法5.福爾馬林配制方法第2頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月蘇木精染色液的配制石蠟切片蘇木精伊紅（HE）染色技術(shù)是病理、解剖學(xué)、組織胚胎學(xué)、法醫(yī)學(xué)和生物學(xué)等領(lǐng)域最基本的技術(shù)操作。對于蘇木精，應(yīng)該有一個全面的了解，才能對常規(guī)的HE染色靈活掌握。蘇木精，又稱蘇木素。蘇木精若存放過久或接觸空氣，顏色可慢慢加深，用其染液就不理想；它易溶于乙醇、乙二醇和甘油，微溶于水；它本身不是一種染料，沒有染色性能，需要經(jīng)過氧化和媒染后，才成為一種很好的細(xì)胞核染料。第3頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月

人工氧化：是指在配制蘇木精染液時加入一定量的氧化劑如氧化汞、碘酸鈉等可立即使蘇木精氧化成蘇木紅。但要注意加入氧化劑的量不能太多，不要使蘇木精分子全部氧化變成蘇木紅，否則，蘇木精染液的染色力減弱甚至失效。蘇木精染色液的配制第4頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月

蘇木精氧化劑中首選碘酸鈉。其優(yōu)點是在室溫下易溶于水，不需煮沸就能放氧。氧化后，產(chǎn)生的碘化鈉是無害的，染液的穩(wěn)定性好。而氧化汞需要在蘇木精染液煮沸時加入才能放氧，當(dāng)開始放氧時又要立即把染液置入冷水中終止放氧。隨后蘇木精染液每天都會在液面形成一層金屬膜，需要把染液過濾后才能用以染色，而汞鹽也是一種毒性物質(zhì)。蘇木精染色液的配制第5頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月

蘇木精的氧化與下列因素有關(guān)：蘇木精染液PH值。染液偏堿性氧化快，中性時稍慢，酸性時很慢，所以加酸時的蘇木精染液可延緩氧化。氧化劑的量。加入人工氧化劑后蘇木精可立即被氧化成熟可用。自然氧化和供氧量有關(guān)。如靠近陽光、染液通風(fēng)、經(jīng)常搖動等可加速氧化。氧化時蘇木精液的溫度。用碘酸鈉等作氧化劑時，在常溫下加入即可，而用氧化汞作氧化劑時，需把蘇木精液煮沸時加入才能放氧。蘇木精染色液的配制第6頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月

蘇木精的媒染：蘇木精被氧化成蘇木紅，為弱酸性，染色淺淡。但當(dāng)加入二價或三價的金屬鹽如鋁、鐵鹽后，染料分子就能與這些金屬鹽的離子結(jié)合形成色淀。這種色淀具有陽電荷，和帶負(fù)電荷的DNA極性吸著而完成染色。這些二價或三價的金屬鹽就稱為媒染劑。蘇木精染色液的配制第7頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月配制蘇木精染液所需試劑的作用：氧化汞、碘酸鈉：作為蘇木精的氧化劑，使無染色力的蘇木精氧化后轉(zhuǎn)變成有染色力的蘇木紅。硫酸鋁鉀、硫酸鋁銨和硫酸鋁：作為媒染劑，其三價鋁離子與蘇木紅結(jié)合形成藍(lán)紫色的色淀與細(xì)胞核內(nèi)核酸的磷酸基牢固結(jié)合。

無水乙醇：較快溶解蘇木精，并可抑制霉菌生長。蘇木精染色液的配制第8頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月配制蘇木精染液所需試劑的作用：甘油：作為穩(wěn)定劑，延緩蘇木精染液蒸發(fā)，防止蘇木精過度氧化，延長蘇木精液的使用期。冰醋酸：可抵銷氧化劑的氧化，使蘇木精和蘇木紅保持均衡。同時又可增加胞核的選擇性染色，使胞核染色質(zhì)顯示得清晰細(xì)致。蘇木精染色液的配制第9頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月改良Lillie-Mayen蘇木素染液的配制：

A液：蘇木素5g充分溶于無水乙醇50ml；

B液：硫酸鋁鉀50g溶于蒸餾水650ml；稍加熱待完全溶解后把二者混合,再依次加入碘酸鈉0.5g、甘油300ml和冰乙酸20ml,蘇木素染液有效期3個月。蘇木精染色液的配制第10頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月蘇木精染色液的配制第11頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月蘇木精染液配制是否理想，可從以下幾方面檢測：將幾滴蘇木精染液滴入一小盤自來水內(nèi)，滴入的瞬間由紅色轉(zhuǎn)為紫色再轉(zhuǎn)為紫藍(lán)色慢慢擴(kuò)散，則該蘇木精液配制得好；若在擴(kuò)散中仍保持紅色，則為未足夠成熟或陳舊的蘇木精染液。取一塊濾紙滴入蘇木精染液兩滴，蘇木精在濾紙上擴(kuò)散后不久將呈一紫醬色的圓斑，在圓斑的周邊最后呈深紫色，這是好的蘇木精液。若周邊不呈深紫色，說明該染液未夠成熟或沒有配好。理想的方法還是在實際操作中染一張淋巴結(jié)組織切片，在鏡下觀察其染色效果。蘇木精染色液的配制第12頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月伊紅染色液的配制

伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷的陽離子結(jié)合使胞漿染色，細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明對比。伊紅是細(xì)胞漿的良好染料。第13頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月

先將伊紅0.5-1g溶于95%酒精100ml中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸一滴。用乙醇性伊紅液染細(xì)胞漿后，可不經(jīng)水洗直接用85%酒精脫水。伊紅染色液有效期3個月。伊紅染色液的配制第14頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月脫鈣液的配制

在病理實驗制作切片時，我們會經(jīng)常碰到一些含鈣組織，而且鈣十分堅硬。由于組織中的鈣和石蠟之間的密度不同，含鈣的組織一般不能直接制作切片。因此，脫鈣是制作骨組織切片的重要環(huán)節(jié)第15頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月

用于脫鈣的試劑很多，脫鈣劑包括有機(jī)酸、無機(jī)酸、乙二胺四乙酸（EDTA）除此之外還有電解脫鈣法。強(qiáng)有機(jī)酸，如硝酸和鹽酸可用于密皮質(zhì)骨的脫鈣，在短時間內(nèi)可除去大量的鈣。但是這些強(qiáng)酸對組織形態(tài)會產(chǎn)生不良影響，脫鈣作用強(qiáng)對組織破壞性大。脫鈣液的配制第16頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月

我們常用的脫鈣液配制方法是，先將10%福爾馬林10ml倒入80ml蒸餾水中，再加入鹽酸10ml即可。脫鈣液的有效期3個月。脫鈣液的配制第17頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月鹽酸酒精的配制1％鹽酸酒精(即由1ml37％濃鹽酸加上99ml170％酒精配制而成,其實際濃度應(yīng)該是0.37％)的分化作用,主要是依靠鹽酸在水中電離出H+,改變組織表面的電荷,使過染和吸附的蘇木素染料從組織中脫離,達(dá)到其分化目的。第18頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月

鹽酸酒精的配制方法是，用滴定管配合吸耳球轉(zhuǎn)移鹽酸1ml至99ml70%乙醇中混勻即可。

1%鹽酸酒精有效期3個月。鹽酸酒精的配制第19頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月福爾馬林的配制

固定的目的是在于盡量使組織和細(xì)胞保持與生活時相仿的成分和形態(tài)，迅速防止組織、細(xì)胞的死后變化，防止自溶與腐敗，使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等各種成分轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來。因此，固定的組織愈新鮮愈好，固定組織時，應(yīng)使用足量的固定液。第20頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月

固定液的種類很多，分為單純固定液和混合固定液。

常用單純固定液：1.甲醛(formaldehyde）；

2.乙醇(alcohol)；

3.醋酸(aceticacid)又名乙酸

福爾馬林的配制第21頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月

甲醛為非沉淀性固定劑，是一種約有40％重量溶于水的氣體，易揮發(fā)，市售的為40％的甲醛水溶液，也稱為福爾馬林原液(formalin)。此液久存自行分解，形成的白色沉淀為副醛(三聚甲醛或多聚甲醛)。福爾馬林的配制第2