浮游菌測定操作規(guī)程

目的：對(duì)不同潔凈區(qū)環(huán)境浮游菌進(jìn)行監(jiān)測并規(guī)范管理以確保生產(chǎn)環(huán)境符合GMP的要求，依據(jù)《中國藥典》2020年版及《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》等法規(guī)，制定本規(guī)程。適用范圍：適用于生產(chǎn)車間、檢驗(yàn)部潔凈室（區(qū)）的浮游菌監(jiān)測和潔凈度等級(jí)的確認(rèn)。依據(jù)：《中國藥典》2020年版四部通則9205《藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則》《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010年修訂）《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010年修訂）附錄GB/T16293—2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法》責(zé)任：質(zhì)量部（檢驗(yàn)）檢驗(yàn)員負(fù)責(zé)監(jiān)測；質(zhì)量部（質(zhì)監(jiān)）質(zhì)監(jiān)員負(fù)責(zé)監(jiān)督；內(nèi)容：所用的儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基：浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、生化培養(yǎng)箱。培養(yǎng)皿制備：2.1培養(yǎng)皿的處理：將培養(yǎng)皿置于121°C濕熱法滅菌20分鐘或180°C干熱滅菌至少2小時(shí)（或取一次性培養(yǎng)皿）。2.2胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)皿的制備：根據(jù)監(jiān)測點(diǎn)的個(gè)數(shù)，領(lǐng)用所需培養(yǎng)基的量，將培養(yǎng)基置于100C水浴加熱至熔化（注意：時(shí)刻觀察水浴鍋的水量，防止水燒干，導(dǎo)致玻璃炸裂，發(fā)生意外），冷卻至45C（不能急速冷卻，將水浴鍋設(shè)置45C左右，使其自然冷卻，以免發(fā)生意外）。在微生物檢查室內(nèi)，用剪刀將培養(yǎng)基瓶口打開，將瓶口放在點(diǎn)燃的酒精燈外焰，旋轉(zhuǎn)360°，目的使瓶口周圍處于無菌狀態(tài)，將培養(yǎng)皿蓋打開1/3后，將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿中，每皿約15ml?20ml，（注意：培養(yǎng)基應(yīng)均勻鋪開，不得有氣泡）。倒好后馬上蓋上培養(yǎng)皿蓋，使其自然凝固，以備用。2.3胰胳大豆胨瓊脂培養(yǎng)皿的預(yù)培養(yǎng)：將制備好的培養(yǎng)皿，倒置于30C?35C的生化培養(yǎng)箱內(nèi)，預(yù)培養(yǎng)2天，若培養(yǎng)基平皿上無菌落生長，即可供使用。2.4培養(yǎng)皿的盛裝、存放：預(yù)培養(yǎng)結(jié)束后，用不銹鋼桶在培養(yǎng)箱內(nèi)，將培養(yǎng)皿裝好（11?14個(gè)/桶），并保證桶上的小孔保持關(guān)閉，將平皿置冰箱內(nèi)，2-8°C保存，并在七日內(nèi)用畢（使用前檢查有無干裂等情況）。測試狀態(tài)及說明：3.1有空態(tài)測試、動(dòng)態(tài)測試和靜態(tài)測試，空態(tài)：潔凈室（區(qū)）在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已安裝完畢且功能完備的情況下，但是沒有生產(chǎn)工藝設(shè)備、原材料或人員的狀態(tài)；靜態(tài)A：潔凈室（區(qū)）在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已安裝完畢且功能完備的情況下，生產(chǎn)工藝設(shè)備已安裝，潔凈室（區(qū)）內(nèi)沒有生產(chǎn)人員的狀態(tài)；靜態(tài)B：潔凈室（區(qū)）在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20min自凈后。動(dòng)態(tài)：指潔凈室（區(qū)）處于正常生產(chǎn)狀態(tài)，設(shè)備在指定的方式下進(jìn)行，并且有指定的人員按照規(guī)范操作。在空態(tài)或靜態(tài)A測試時(shí)，對(duì)單向流潔凈室（區(qū)）而言，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于10min后開始；對(duì)非單向流潔凈室（區(qū)），測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于30min后開始；在靜態(tài)B測試時(shí)，對(duì)單向流潔凈室（區(qū)），測試宜在生產(chǎn)人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10min自凈后開始；對(duì)非單向流潔凈室（區(qū)），測試宜在生產(chǎn)人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20min自凈后開始；3.2采樣點(diǎn)數(shù)目：面積（m2）潔凈度級(jí)別A級(jí)C級(jí)D級(jí)<102?322N10?<20422N20?<40822N40?<1001642N100?<20040103N200?<40080206N400?<10001604013N1000?<200040010032200080020063注：表中的面積，對(duì)于單向流潔凈工作臺(tái)，是指送風(fēng)面口表面積。對(duì)于非單向流潔凈室是指房間的面積。3.3采樣點(diǎn)的位置：采樣點(diǎn)一般在離地面0.8m?1.5m左右布置（略高于工作面）;送風(fēng)口測點(diǎn)位置離開送風(fēng)面30cm左右。在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍內(nèi)可增加測點(diǎn)。3.4采樣量設(shè)置：潔凈度級(jí)別采樣量L/次A級(jí)1000C級(jí)500D級(jí)100監(jiān)測程序：4.1檢測人員進(jìn)入潔凈區(qū)檢測（人員與物料可通過“人員、物料的緩沖間”進(jìn)入潔凈區(qū)）應(yīng)用消毒劑消毒采樣器外表面。4.2監(jiān)測順序宜由高級(jí)別區(qū)域到低級(jí)別區(qū)域進(jìn)行，進(jìn)出入相同級(jí)別區(qū)域無特殊規(guī)定。4.3測試時(shí)房間門（區(qū)域）應(yīng)封閉，空態(tài)或靜態(tài)測試時(shí)，室內(nèi)測試人員不得多于2人。動(dòng)態(tài)測試時(shí)，除檢測人員外，禁止其余人員在測試點(diǎn)1E范圍內(nèi)活動(dòng)，防止采樣過程的污染。采樣：5.1用蘸有濃度為75%乙醇的棉球擦拭采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及轉(zhuǎn)盤周邊，以消毒，開啟采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5分鐘，然后快速放入除去外蓋的平皿，蓋上頂蓋，設(shè)置采樣量，再將采樣器置于采樣點(diǎn)，開始采樣（對(duì)于單向流或送風(fēng)口，使采樣管口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向，離開送風(fēng)面30cm左右；對(duì)于非單向流，安裝好三角架，調(diào)節(jié)高度至少0.8m?1.5m裝采樣器，調(diào)節(jié)傾斜度，使采樣口向上），采樣后打開采樣器頂蓋，立即蓋上平皿玻璃外蓋密閉同時(shí)注明標(biāo)記。5.2采樣結(jié)束后返回。培養(yǎng)：6.1全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。6.2在30°C?35°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，逐日觀察結(jié)果，時(shí)間不少于2天6.3每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染?？擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。同時(shí)每次檢測均取1個(gè)平皿做陰性對(duì)照試驗(yàn).菌落計(jì)數(shù)及濃度計(jì)算：7.1菌落計(jì)數(shù)方法：7.1.1用肉眼直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5?10倍放大鏡檢查，有否遺漏。7.1.2若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。7.2浮游菌濃度計(jì)算：7.2.1用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。7.2.2每個(gè)測點(diǎn)的浮游菌平均濃度的計(jì)算：見式（1）平均濃度（個(gè)/m3）=菌落數(shù)：采樣量 式（1）例1.某測點(diǎn)采樣時(shí)為400L，菌落數(shù)為1,則：平均濃度=1：0.4=2.5個(gè)/m3例2.某測點(diǎn)采樣量為2m3，菌落數(shù)為3，則平均濃度=3：2=1.5個(gè)/m3結(jié)果判定與處理：8.1每個(gè)采樣點(diǎn)的單個(gè)菌落和平均菌落濃度必須低于所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)中的界限。8.2在靜態(tài)測試時(shí)，若某采樣點(diǎn)的平均菌落濃度超過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果均合格才能判為合格。8.3監(jiān)測報(bào)告于檢驗(yàn)完成（或培養(yǎng)到期）當(dāng)日發(fā)至質(zhì)量管理部（檢驗(yàn)），超過警戒限度或糾偏限度應(yīng)在備注欄中說明并注明檢測位置。米樣注意事項(xiàng)：9.1應(yīng)使用檢定合格，且在使用有效期內(nèi)的