實驗室病原微生物危害評估報告(同名3479)

綜合實驗室質(zhì)量管理體系文件實驗室病原微生物危害評估報告第1版生效日期：2016年08月02日XX市疾病預(yù)防控制中心綜合實驗室目錄第一章綜合實驗室實驗活動生物危害評估報告 （2）冰箱、冷凍柜、水浴和離心機(jī)應(yīng)該定期清洗和消毒（時間由實驗室主任來決定），在發(fā)生嚴(yán)重污染后應(yīng)立即進(jìn)行清洗和消毒。進(jìn)行清洗、消毒時要戴上手套，穿上工作服或其它合適的防護(hù)服。（3）外衣：外衣（實驗服、工作服、和圍裙）應(yīng)懸掛在遠(yuǎn)離散熱器、蒸汽管道、供暖裝置、以及有明火的地方，不要掛在壓縮氣瓶或滅火器上，也不要掛在門的玻璃隔板上，妨礙視線。“清潔”的和“非清潔”的個人防護(hù)服要分開存放。（4）垃圾處理：每天至少清理垃圾一次。（5）裝飾：不得在電燈、燈座或儀器上進(jìn)行裝飾，更不要使用電子裝飾物、蠟燭、圣誕樹等有引起火災(zāi)危險的裝飾品。（6）為便于清潔消毒，實驗室內(nèi)不應(yīng)有織物裝飾的用具或椅子。（7）個人物品：實驗工作區(qū)不得存放個人物品，如錢包、外套、皮靴、咖啡杯、運(yùn)動服、預(yù)包裝的食品和藥品等。（8）實驗室內(nèi)應(yīng)配備應(yīng)急設(shè)備，如應(yīng)急洗眼裝置，酒精等消毒用品。（9）實驗室應(yīng)安裝非手觸式洗手裝置。（10）實驗室內(nèi)應(yīng)安裝防蚊蠅裝置，應(yīng)定期投撒滅蟑螂、老鼠的藥物。（11）用后的廢棄物品：實驗工作區(qū)內(nèi)的用后廢棄物品存量不要太大。具危險性的液體如酸或堿性液體應(yīng)放在視平線以下。較大的廢棄物容器應(yīng)靠近地面存放。（12）出口通路：實驗室的出口和通道必須保持暢通無阻，不準(zhǔn)堆放物品、垃圾、裝置、或設(shè)備。安全門必須保持暢通，不得堵塞。注意：無論任何時間、何種原因都不得阻塞通往滅火器、火警箱、防火毯、安全淋浴或出口的道路。14.使用玻璃器具的危害評估及防護(hù)操作玻璃器具時應(yīng)遵循下述安全規(guī)則：（1）不使用破裂或有缺口的玻璃器具。（2）不要用猛力取下玻璃試管上的塞子，粘緊的試管可用刀切開分離。（3）接觸過傳染性物的玻璃器具，清洗之前，應(yīng)先行消毒。（4）破裂的玻璃器具和玻璃碎片應(yīng)丟棄在有專門標(biāo)記的、單獨的、不易刺破的容器里。（5）高熱操作玻璃器具時應(yīng)戴隔熱手套。（6）在不影響實驗質(zhì)量的前提下，應(yīng)盡量減少使用玻璃器具。15.使用離心機(jī)的危害評估及防護(hù)感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）極少經(jīng)血（蟲媒介）極少（1）氣溶膠：離心過程中應(yīng)控制氣溶膠的產(chǎn)生在最低水平。（2）操作：離心機(jī)只有在蓋好蓋板后，才能啟動。（3）傳染性物品：所有能夠產(chǎn)生氣溶膠進(jìn)行播散的生物制品或標(biāo)本，都應(yīng)使用密封的離心管，并在蓋緊的離心頭或轉(zhuǎn)頭中進(jìn)行。（4）為防止氣溶膠飛溢，應(yīng)在離心停止30分鐘后打開離心物。（5）清洗：按照消毒隔離制度要求清洗離心機(jī)。（6）平衡：離心時應(yīng)保持合適的平衡，以保證離心的順利進(jìn)行。16．采集血樣的危害評估及防護(hù)感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）極少呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲媒介）極少盜竊可能化學(xué)腐蝕極少放射無（1）每天早晨用500mg/L的”84”消毒液擦拭抽血臺面及其它物表，并開紫外燈消毒至少30分鐘，并做好記錄。（2）工人每天早晨更換消毒液，包括浸泡銳器、止血帶的消毒液和手消毒液。（3）工作人員必須穿工作服，戴好口罩、帽子、和手套。（4）使用合格的一次性用品。嚴(yán)禁使用包裝破損，超過有效期的一次性用品。（5）嚴(yán)格執(zhí)行無菌技術(shù)操作規(guī)程、靜脈采血必須一人一針一管一巾一帶。微量采血應(yīng)做到一人一針一管一片，對每位病人操作前洗手或手消毒。（6）無菌物品如棉球需每天更換，開啟后使用不得超過24小時。（7）工作人員需對銳器如采血針采取高度預(yù)防措施，用過的采血針需浸泡在含有消毒液的厚壁容器中。17.標(biāo)本(血清、血漿、全血、尿)上檢驗分析儀檢測過程的危害評估及防護(hù)感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚極少粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）極少經(jīng)血（針刺傷、切割傷）極少經(jīng)血（蟲媒介）極少盜竊可能化學(xué)腐蝕無放射無（1）為了避免液滴和氣溶膠和擴(kuò)散，實驗室儀器加樣、加液，清洗等過程應(yīng)在封閉罩內(nèi)進(jìn)行的。（2）實驗中使后的比色盤，反應(yīng)杯等廢棄物應(yīng)當(dāng)收集在封閉的容器內(nèi)，集中處置。（3）在每一步完成后應(yīng)根據(jù)操作指南對對儀器進(jìn)行消毒。血液、體液污染物表時，應(yīng)立即消毒。（4）工作人員要戴手套進(jìn)行操作。18.標(biāo)本(血清、血漿、全血、尿、糞)手工檢測過程的危害評估及防護(hù)感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚可能粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）可能經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲媒介）極少盜竊可能化學(xué)腐蝕可能放射無（1）每天早晨做好實驗室的清潔消毒工作。（2）工作人員要戴口罩、手套進(jìn)行操作。（3）實驗中使用的竹簽用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（4）廢棄的標(biāo)本連同試管、蓋帽要用1000mg/L“84”消毒液浸泡，由工人統(tǒng)一清潔后進(jìn)行無害化處理。（5）實驗中使用的吸頭、一次性塑料杯用后要用1000mg/L“84”消毒液浸泡。（6）標(biāo)本污染物表時，應(yīng)立即消毒。（7）離心時，發(fā)生試管破裂或標(biāo)本濺出，由操作者負(fù)責(zé)用有效消毒劑對離心機(jī)內(nèi)部進(jìn)行及時消毒處置。19．微生物分離鑒定藥敏試驗及基因擴(kuò)增試驗活動的危害評估及防護(hù)感染途徑危害評估感染途徑危害評估感染途徑危害評估皮膚可能粘膜（眼結(jié)膜）可能呼吸道可能消化道（經(jīng)手-口）可能經(jīng)血（針刺傷、切割傷）可能經(jīng)血（蟲媒介）可能盜竊可能化學(xué)腐蝕極少放射無（1）每天早晨開紫外燈消毒空氣至少30分鐘，同時做好各物表、儀器的清潔消毒工作。（2）實驗人員要戴手套、帽子進(jìn)行操作。當(dāng)估計會出現(xiàn)微生物和危險物濺出時要戴好眼罩或面罩。（3）操作中使用的接種環(huán)、鑷子等金屬物品要在酒精燈火焰上燒灼滅菌。（4）可能產(chǎn)生致病性微生物氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作如涂片、接種時，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)操作，并使用個體防護(hù)設(shè)備。（5）實驗室內(nèi)的各種標(biāo)本、菌種、培養(yǎng)基和其它廢棄物在運(yùn)出實驗室前必須滅活（高壓、浸泡），需運(yùn)出實驗室滅活的物品必須放在專用的密閉容器中。（6）操作過程中發(fā)生菌種污染物表時，應(yīng)馬上采取措施進(jìn)行物表消毒。（7）當(dāng)發(fā)生致病性微生物氣溶膠污染時，應(yīng)馬上進(jìn)行人員疏散，通知負(fù)責(zé)人到現(xiàn)場進(jìn)行指導(dǎo)消毒。（8）對菌種的保存應(yīng)嚴(yán)格遵守菌種保存制度，嚴(yán)禁擅自保存各種國家法定傳染病菌株或毒株。（9）實驗人員離開實驗室前要去除手套，確認(rèn)無污染或污染已排除，后方可洗手離去。（10）微生物、PCR實驗室要設(shè)置紗窗、擋鼠板。三、特定實驗活動危害評估見以下章節(jié)之各種病原體的危害評估四、工作人員素質(zhì)本實驗室共有技術(shù)人員10名，其中申請進(jìn)入BSL-2實驗室10名。碩士學(xué)位3名，5名曾經(jīng)從事微生物學(xué)實驗，5名曾經(jīng)從事無菌實驗室活動經(jīng)歷，10名技術(shù)人員學(xué)習(xí)過生物安全手冊并通過定期培訓(xùn)及考核成績合格，經(jīng)體檢無現(xiàn)患嚴(yán)重疾病，本實驗室無其他患傳染性疾病的技術(shù)人員，健康狀態(tài)良好。五、評估結(jié)論本次評估本實驗室共14項可能潛在危險的實驗活動，在實驗操作實驗施過程中在無控制措施情況下可能產(chǎn)生的高危害度2項，中度12項，低度0項；對危害發(fā)生的可能性分析，實驗危害較大可能發(fā)生的有0項，可能發(fā)生2項，較少可能發(fā)生12項；這些危害造成高度嚴(yán)重后果的2項，后果嚴(yán)重性中度的12項，后果嚴(yán)重性低度的0項。根據(jù)擬采取的預(yù)防控制措施后依然存在的殘留風(fēng)險為高度0項，中度0項，低度危害12項。評估：XX市疾病預(yù)防控制中心綜合實驗室評估人：審核：XX市疾病預(yù)防控制中心生物安全管理委員會審核人：2016年8月02日第二章結(jié)核分枝桿菌的生物危害評估報告結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌（偶爾可由牛型或非洲型分枝桿菌）引起的一種細(xì)菌性疾病。結(jié)核病可累及全身各個器官，但以肺結(jié)核最為常見。該病具有傳染性強(qiáng)，散播面廣，不分地域均可發(fā)生。結(jié)核病可由呼吸道、消化道、皮膚等途徑感染，但其主要傳播途徑是以空氣為傳播因子的呼吸道傳染，而排菌的肺結(jié)核病人傳染性更大，是傳播感染的主要傳染源。1.傳播途徑呼吸道感染（respiratortractinfection）是肺結(jié)核的主要傳染途徑（routesofinfection），飛沬傳染（dropletinfection）為最常見的方式。傳染源主要是排菌的肺結(jié)核患者（尤其是痰涂片陽性未經(jīng)治療者）。飛沬核（dropletnuclei）＜10μm時可被吸人呼吸道，健康人可因吸入患者咳嗽、打噴嚏時噴出的帶菌飛沫而受感染。2.危害程度分級微生物按其是否致病、致病力強(qiáng)弱、危害人體的嚴(yán)重性、傳染性的大小、臨近人群的抵抗力、有無免疫制劑和特效治療藥物等綜合評價，可分為四個不同的危害等級。結(jié)核分枝桿菌屬于3級危險。3級危險（對個體具有極大危害，對群體具有較大的危害性）：指有特殊危險的致病菌。感染后癥狀較重，并可能危及生命，或者缺乏有效的預(yù)防方法、發(fā)病后不易治療的微生物。3.實驗室感染的原因及預(yù)防（一）技術(shù)操作可能導(dǎo)致的感染及其預(yù)防措施。1.接種：應(yīng)使用無彈力的鉑絲接種環(huán)，結(jié)核菌接種后接種環(huán)火焰滅菌易崩散，酒精燈燒灼時要特別注意。2.混勻：吸管吸吹菌液時不要產(chǎn)生氣泡，應(yīng)沿容器壁排出。3.研磨：最好使用組織研磨器，乳缽易產(chǎn)生氣溶膠。4.移液：吸管上端的棉花松緊要適度，吸液時要從管底吸取，吹出時要輕緩，不要全部吹凈，以免產(chǎn)生氣泡，形成氣溶膠。5.開封：要避免壓力和氣流的急劇變化。6.離心：離心管套底墊要完好，使用匹配的管、套、離心頭，加蓋。7.注射：做好個人防護(hù)，正確使用注射器。8.搬運(yùn)：室內(nèi)移動要避免滑落，移出室外要有堅實密閉的外包裝。（二）技術(shù)保障1.雙人原則，不允許單人操作1、2類病原。2.入口處應(yīng)有危險警示標(biāo)識，并標(biāo)明所操作的微生物的種類。3.培訓(xùn)考核上崗，掌握相關(guān)技術(shù)操作要領(lǐng)，熟悉規(guī)章制度，適應(yīng)工作環(huán)境。4.完備的管理措施，技術(shù)操作規(guī)范。5.良好的工作行為可降低生物危害風(fēng)險。4.實驗室中的分枝桿菌及分枝桿菌氣溶膠結(jié)核病實驗室工作人員，在分枝桿菌檢驗過程中，會接觸到各種潛在感染源標(biāo)本和各種危險物，特別是許多操作易產(chǎn)生分枝桿菌氣溶膠。含有結(jié)核分枝桿菌的微滴核（1-5微米）通過呼吸進(jìn)入人體肺泡，可以黏附在肺泡內(nèi)生長繁殖。因此，首先要對實驗室中生物危險物產(chǎn)生的途徑和存在的地點有充分的認(rèn)識，以便明確生物安全防護(hù)的環(huán)節(jié)。(一)分枝桿菌存在的地點1、各種臨床標(biāo)本，通常是痰，胃或支氣管灌洗液、腦脊液、尿液等。2、被污染的操作臺、器械、儀器、試劑等。3、收集的結(jié)核分枝桿菌、非結(jié)核分枝桿菌菌株等。4、細(xì)菌學(xué)實驗室的部分區(qū)域。(二)產(chǎn)生分枝桿菌氣溶膠1、實驗室內(nèi)可疑肺結(jié)核患者痰標(biāo)本的采集。2、樣本的制備和涂片的火焰固定。3、分離培養(yǎng)或接種培養(yǎng)物。4、用火焰燒灼接種環(huán)。5、使用移液器混合培養(yǎng)物。6、培養(yǎng)管或培養(yǎng)瓶中含有培養(yǎng)物的滴落物。7、溢出的分枝桿菌懸浮液。8、高速混合含有分枝桿菌的液體。9、轉(zhuǎn)移液態(tài)培養(yǎng)物和上清液，或培養(yǎng)液、上清液的傾倒。10、離心過程中離心管的破碎。11、用做原代培養(yǎng)所需的組織勻漿。5.安全防護(hù)(一)嚴(yán)格遵守實驗室安全操作規(guī)程，任何時侯都要警惕分枝桿菌氣溶膠的產(chǎn)生。實驗室的技術(shù)人員必須經(jīng)過生物安全培訓(xùn)后方可上崗。(二)實驗室應(yīng)嚴(yán)格限制非實驗人員進(jìn)入，減少實驗室內(nèi)外交叉生物污染。完成實驗工作離開實驗室，要關(guān)好門窗。(三)進(jìn)入實驗室應(yīng)避免攜帶非必需物品。(四)進(jìn)入實驗室，工作人員應(yīng)穿著工作服，操作時應(yīng)穿戴防護(hù)隔離衣、口罩、帽子和手套，長發(fā)者應(yīng)將頭發(fā)裝束在帽子內(nèi)。(五)實驗過程中絕對禁止吸煙、飲食等，不要以手撫頭面部等。(六)試驗前須開啟紫外線燈對實驗室和操作區(qū)域進(jìn)行照射消毒1小時以上；試驗結(jié)束后，立即開啟紫外燈進(jìn)行照射消毒2小時以上。(七)任何試驗的開始和結(jié)束后，操作人員要用70%酒精浸泡雙手或仔細(xì)擦后，用清潔劑或清水洗凈。(八)每次試驗結(jié)束后，必須清理好實驗臺，并用70%酒精液或3-5%石炭酸擦洗實驗臺面。(九)實驗室中的生物危險品要根據(jù)檢查項目和性質(zhì)不同，局限在相應(yīng)的試驗區(qū)間，不得隨意將其帶到其它的實驗室。(十)實驗室內(nèi)任何微生物的樣本，廢棄物都必須經(jīng)高溫高壓滅菌后，方可按一般垃圾處理。6.安全保障(一)首先各級實驗室應(yīng)按等級要求完善實驗設(shè)施，如簡易安全柜內(nèi)的抽氣排風(fēng)功能、紫外燈消毒功能，生物安全柜維護(hù)與除菌濾膜定期更換等。(二)實驗室采集病人痰標(biāo)本時應(yīng)在戶外進(jìn)行，避免因病人咳漱造成室內(nèi)氣溶膠污染。(三)普通實驗室應(yīng)注意氣流方向，實驗過程中盡量避免強(qiáng)氣流變化而產(chǎn)生氣溶膠（如﹕涂片、染色過程中）。(四)細(xì)菌的分離培養(yǎng)、菌種開封、轉(zhuǎn)種、研磨、稀釋等操作，各級實驗室均應(yīng)在簡易安全柜或生物安全柜中進(jìn)行。(五)使用接種環(huán)進(jìn)行操作時，接種環(huán)應(yīng)在工作燈的內(nèi)焰中燃燒，以避免菌液或菌塊飛濺。(六)稀釋菌液時，吸管、針管要緩慢插入試管或燒瓶底部，小心操作避免產(chǎn)生氣泡或氣溶膠。(七)使用注射器加樣時，用過的針頭切勿再重新入套或拔開注射器與針頭，應(yīng)直接放入銳器收集器，以免劃破皮膚造成接種感染。(八)菌株庫要設(shè)專人管理，并按照國家微生物菌毒種管理辦法執(zhí)行。(九)進(jìn)行毒菌操作過程中，不要穿戴巳經(jīng)污染的防護(hù)性手套觸摸門柄、儀器或毒菌區(qū)以外區(qū)域，避免由于粗心擴(kuò)大污染范圍。(十)試驗結(jié)束后，操作過程中所有可能與生物危險物接觸或被污染的試驗器械和物品，能夠高壓消毒的必須高壓消毒，不能進(jìn)行高壓消毒的設(shè)備、儀器，應(yīng)使用有效的消毒劑擦洗后再以紫外燈近距離長時間消毒。(十一)實驗中發(fā)生意外污染情況，應(yīng)立即通知主管人員并做好處理污染物和相應(yīng)區(qū)域的準(zhǔn)備，不得擅自采用其它禁止的方法進(jìn)行消毒處理。(十二)實驗室主任應(yīng)制定規(guī)章和程序，只有告知潛在風(fēng)險并符合進(jìn)入實驗室特殊要求(如，經(jīng)過免疫接種)的人，才能進(jìn)入實驗室。(十三)操作致病性微生物時，實驗室入口處應(yīng)貼有生物危險標(biāo)志，并顯示以下信息：有關(guān)病原、生物安全級別、免疫接種要求、研究人員姓名、電話號碼、在實驗室中必須佩帶的個人防護(hù)設(shè)施、出實驗室所要求的程序。(十四)實驗室主任為實驗室人員特別制定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序或生物安全手冊中，應(yīng)包括生物安全程序。對于有特殊風(fēng)險的人員，要求閱讀并在工作及程序上遵照執(zhí)行。(十五)實驗室主任保證實驗及其輔助人員接受適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)，包括和工作有關(guān)的可能存在的風(fēng)險、防止暴露的必要措施和暴露評估程序。(十六)實驗室所用任何個人防護(hù)裝備應(yīng)符合國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。實驗室應(yīng)確保具備足夠的有適當(dāng)防護(hù)水平的清潔防護(hù)服供使用。還應(yīng)穿戴其它的個人防護(hù)裝備，如手套、防護(hù)鏡、面具、頭部面部保護(hù)罩等。(十七)處理樣本的過程中易產(chǎn)生高危害氣溶膠時，要求同時使用適當(dāng)?shù)膫€人防護(hù)裝備、生物安全柜和/或其它物理防護(hù)設(shè)備。如可產(chǎn)生含生物因子的氣溶膠，應(yīng)在適當(dāng)?shù)纳锇踩裰胁僮鳌?十八)實驗用鞋應(yīng)舒適，鞋底防滑。應(yīng)用皮制或合成材料的不滲液體的鞋類。在從事可能出現(xiàn)漏出的工作時可穿一次性防水鞋套。在實驗室的特殊區(qū)域（例如有防靜電要求的區(qū)域）或BSL-3和BSL-4實驗室要求使用專用鞋（例如一次性或橡膠靴子）。7.結(jié)核病實驗室廢物處理一、實驗室廢棄物處理的目的：(一)將操作、收集、運(yùn)輸、處理及處置廢棄物的危險減至最??；(二)將實驗室廢棄物對環(huán)境的有害作用減至最小。二、實驗室污物處理及消毒(一)實驗室含有生物危險物的臨床標(biāo)本及被污染的一次性用品，試驗完成后，應(yīng)在操作臺或?qū)嶒瀰^(qū)域內(nèi)以紫外燈近距離照射消毒2小時以上，再經(jīng)高壓消毒后方可丟棄或焚燒。(二)可重復(fù)使用的實驗用品及器材，完成實驗后，應(yīng)在操作臺或?qū)嶒瀰^(qū)域內(nèi)經(jīng)紫外燈近距離照射消毒2小時以上后，再交有關(guān)人員進(jìn)行高壓消毒和煮沸洗刷。(三)實驗用的試管、吸管、注射器，須裝在加蓋不漏的容器內(nèi)，經(jīng)高壓滅菌后取出。(四)培養(yǎng)物或?qū)嶒炇依?，在丟棄前必須經(jīng)高壓消毒和紫外燈近距離長時間照射處理。不允許積存垃圾和實驗室廢棄物。已裝滿的容器應(yīng)定期運(yùn)走。在去污染或最終處置之前，應(yīng)存放在指定的安全地方，通常在實驗室區(qū)內(nèi)。(五)實驗室廢棄物應(yīng)置于適當(dāng)?shù)拿芊馇曳缆┤萜髦邪踩\(yùn)出實驗室。有害氣體、氣溶膠、污水、廢液應(yīng)經(jīng)適當(dāng)?shù)臒o害化處理后排放，應(yīng)符合國家相關(guān)的要求。(六)實驗過程中，如標(biāo)本或含標(biāo)本的前消化處理液被打翻污染了操作臺或地面，應(yīng)以吸滿70%酒精的衛(wèi)生紙覆蓋污染區(qū)，15分鐘以后衛(wèi)生紙方可移去。(七)實驗室內(nèi)未經(jīng)消毒的污水，禁止直接排入公共排水系統(tǒng)，更不允許混入居民生活垃圾。8.意外事故的處理(一)如果發(fā)生意外，必須立即通知實驗室主管人員，并在有關(guān)人員的指導(dǎo)監(jiān)督下對出事現(xiàn)場進(jìn)行處理，絕對禁止未經(jīng)報告而私自對出事現(xiàn)場給予非規(guī)范的處理。(二)實驗過程中，如污染物濺落到身體表面，或有割傷、刺傷、燒傷、燙傷等情況發(fā)生，應(yīng)立即停止實驗工作進(jìn)行緊急處理，更換被污染的實驗服，皮膚表面用消毒液清洗，傷口以碘酒或酒精消毒，眼睛用無菌生理鹽水沖洗。(三)如果發(fā)生菌液溢出，含菌種的培養(yǎng)管破碎等，造成中、小面積污染，可用比污染面積大25%以上的紗布覆蓋污染區(qū)域，邊緣用脫脂棉圍住，向紗布傾倒5%苯酚溶液或70%的酒精，浸泡2小時以上（其間適量加溶液防止干燥），再經(jīng)紫外燈近距離（1米內(nèi)）照射2小時以上；被污染的器械、容器等立即浸泡于70%酒精中2小時以上，實驗完成后再進(jìn)行高壓消毒處理。(四)如果發(fā)生氣溶膠污染或大面積污染，應(yīng)立即停止實驗并關(guān)閉實驗室，對污染區(qū)域進(jìn)行紫外燈照射消毒過夜；第二天對污染區(qū)進(jìn)行24小時封閉空氣熏蒸消毒（乙醛消毒法﹕5ml乙醛＋2g高錳酸鉀/m3空間）。(五)絕對禁止使用的事故處理方法﹕1.任何有可能造成污染面積擴(kuò)大的去污方法，如使用70%乙醇或甲酚皂液擦洗被污染的區(qū)域。2.直接用火焰對未經(jīng)任何處理的污染地面、操作臺、器械等進(jìn)行燒灼處理。3.使用消毒效果未經(jīng)證實的消毒劑進(jìn)行消毒。4.使用低濃度的消毒劑和紫外燈進(jìn)行短時間、長距離的照射。第三章金黃色葡萄球菌的生物危害評估報告1.生物學(xué)特性金黃色葡萄球菌是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬，可引起多種嚴(yán)重感染。金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37°C，最適生長pH7.4。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑1-2mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10-15%NaCl肉湯中生長?？煞纸馄咸烟?、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性，VP反應(yīng)弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。2.危害程度分類根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部制定《人間傳染的病原微生物名錄》該菌危害程度為第三類。3.致病性和感染劑量金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。金黃色葡萄球菌的致病力強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶，有報道目前出現(xiàn)越來越多的耐藥菌株，MRSA即耐甲氧西林金黃色葡萄球，菌致病性也隨著變強(qiáng)。4.暴露的潛在后果暴露后可能引起感染，菌量大時可使實驗人員出現(xiàn)皮膚軟組織感染、全身性感染、呼吸道感染、中毒、腸炎等。被感染后，成為傳染源，可能對周圍及環(huán)境造成污染，應(yīng)及時得到治療和控制。5.感染途徑通過污染食品和水源經(jīng)口傳播，也可通過呼吸道和接觸傳播。6.微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性葡萄球菌是無芽胞菌中抵抗力最強(qiáng)者，而干燥可達(dá)數(shù)月，加熱80℃7.濃度和濃縮標(biāo)本的容量一般樣本檢測。8.自然和易感人群宿主金黃色葡萄球菌常存在于鼻咽喉、下消化道、毛發(fā)和皮膚上，在人類和普通的動物都有存在。致病性依照宿主狀狀，衛(wèi)生情況，皮膚和黏膜有否創(chuàng)傷而異。當(dāng)宿主免疫力下降，皮膚黏膜有創(chuàng)傷或衛(wèi)生情況不好是易感染，特別是老人和嬰兒。9.實驗操作活動巳有文獻(xiàn)證明，金黃色葡萄球菌可造成實驗人員化膿性和呼吸道感染，人類不是該菌在唯一傳染源，在許多動物身上都存在該菌。這種病原體可以存在于受感染的人或動物的膿液，血液等多種體液中。通過污染食品和水源經(jīng)口傳播，和通過呼吸道和接觸傳播是該菌的主要傳播方式，該菌也是引起院內(nèi)感染的主要細(xì)菌之一。暴露在氣溶膠中也可能引起感染。按照國家標(biāo)準(zhǔn)方法對樣本（糞便、食品、水樣）進(jìn)行分離，培養(yǎng)，鑒定。建議采用BSL-2級水平的操作技術(shù)，防擴(kuò)散設(shè)備和設(shè)施。一旦發(fā)生意外，按照本實驗室的《意外事故應(yīng)對方案和應(yīng)急程序》進(jìn)行處理。10.預(yù)防和治療金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。目前疫苗還不可用于人類。該菌能對人體多部位的感染，所以跟據(jù)所致疾病的不同也應(yīng)采取不同的治療方案，主要是對癥處理和針對病原治療，大體用藥可選用紅霉素、新型青霉素、慶大霉素、萬古霉素或先鋒霉素Ⅵ治療。預(yù)防金黃色葡萄球菌感染，首先是要做好個人衛(wèi)生，和加強(qiáng)餐飲和食品衛(wèi)生的管理，及時發(fā)現(xiàn)帶菌者，做好各種動物的管理工作，把能傳播該菌的途徑有效的控制好。11.工作人員素質(zhì)衛(wèi)生技術(shù)專業(yè)人員，并經(jīng)過生物安全培訓(xùn)后獲得上崗證書。12.評估結(jié)論該菌生物性狀較穩(wěn)定，但抗生素有濫用，也出現(xiàn)了不少的耐藥株。該菌主通過污染食品和水源經(jīng)口傳播，也可通過呼吸道和接觸傳播，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。預(yù)防手段主要預(yù)防金黃色葡萄球菌感染，首先是要做好個人衛(wèi)生，和加強(qiáng)餐飲和食品衛(wèi)生的管理，及時發(fā)現(xiàn)帶菌者，做好各種動物的管理工作，把能傳播該菌的途徑有效的控制好。試驗過程建儀采用BSL-2級水平的操作技術(shù)、防擴(kuò)散設(shè)備和設(shè)施。實驗室中應(yīng)穿著工作服或罩衫等防護(hù)服。離開實驗室時，防護(hù)服必須脫下并留在實驗室內(nèi)。不得穿著外出，更不能攜帶回家。用過的工作服應(yīng)先在實驗室中消毒，然后統(tǒng)一洗滌或丟棄。當(dāng)手可能接觸感染材料、污染的表面或設(shè)備時應(yīng)戴手套。如可能發(fā)生感染性材料的溢出或濺出，宜戴兩副手套。不得戴著手套離開實驗室。工作完全結(jié)束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。操作臺面用70%酒精或含氯消毒劑擦拭，廢棄物處理按本實驗室廢棄物處理制度進(jìn)行。第四章副溶血性弧菌的生物危害評估報告副溶血性弧菌（VibrioParahemolyticus,VP）是一種嗜鹽性細(xì)菌。副溶血性弧菌食物中毒，是進(jìn)食含有該菌的食物所致，主要來自海產(chǎn)品，如墨魚、海魚、海蝦、海蟹、海蜇，以及含鹽分較高的腌制食品，如咸菜、腌肉等。本菌存活能力強(qiáng)，在抹布和砧板上能生存1個月以上，海水中可存活47天。臨床上以急性起病、腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀。本病多在夏秋季發(fā)生于沿海地區(qū)，常造成集體發(fā)病。由于海鮮空運(yùn)，內(nèi)地城市病例也漸增多。此菌對酸敏感，在普通食醋中5分鐘即可殺死；對熱的抵抗力也較弱。副溶血性弧菌食物中毒多發(fā)生在6~10月，海產(chǎn)品大量上市時。中毒食品主要是海產(chǎn)品，其次為咸菜、熟肉類、禽肉、禽蛋類，約有半數(shù)中毒者為食用了腌制品后。中毒原因主要是烹調(diào)時未燒熟煮透或熟制品被污染。。1.PCR檢測用于檢測V．p的PCR方法主要有任意引物PCR(abritrarilyprimedPCR，Ap-PCR)、針對副溶血性弧菌任意引物PCR、多重PCR(muhiplex-PCR)、實時PCR(Real-timePCR)。實時PCR常規(guī)PCR檢測，需要從反應(yīng)體系中吸取產(chǎn)物做電泳或Southern雜交等試驗進(jìn)行鑒定，轉(zhuǎn)移過程中易污染，造成假陽性，而且耗費(fèi)時間。1996年，Tyagi開創(chuàng)了一種實時PCR(Real-timePCP,)。實時PCR是在，PCR反應(yīng)體系中加入標(biāo)記有報告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)的線性Taqman。探針或莖環(huán)型熒光分子信標(biāo)探針，在墓因擴(kuò)增過程中，與產(chǎn)物雜交，此時，報告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分開，根據(jù)能量共振轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，報告基團(tuán)發(fā)出熒光而被檢測。這種方法操作簡單，閉管檢測，減少污染，靈敏度高，并且可以在PCR結(jié)束或PCR過程進(jìn)行同步定性或定量檢測，面且可以進(jìn)行臨床大規(guī)模快速檢測。2.流行病學(xué)傳染源傳染源為病人，集體發(fā)病時往往僅少數(shù)病情嚴(yán)重者住院，而多數(shù)未住院者可能成為傳染源，但由于病人僅在疾病初期排菌較多，其后排菌迅速減少，故不至因病人散布病菌而造成廣泛流行。傳播途徑本病經(jīng)食物傳播，主要的食物是海產(chǎn)品或鹽腌漬品，常見者為蟹類、烏賊、海蜇、魚、黃泥螺等，其次為蛋品、肉類或蔬菜。進(jìn)食肉類或蔬菜而致病者，多因食物容器或砧板污染所引起。地區(qū)分布特點：日本及我國沿海地區(qū)為副溶血性孤菌食物中毒發(fā)病率的高發(fā)區(qū)。據(jù)調(diào)查，我國沿海水域、海產(chǎn)品中副溶血性弧菌檢出率較高，尤其是氣溫較高的夏秋季節(jié)。但近年來隨著海產(chǎn)食品的市場流通，內(nèi)地也有副溶血性弧菌食物中毒的散在發(fā)生。季節(jié)性特點及易感性：7～9月常是副溶血性弧菌食物中毒的高發(fā)季節(jié)。男女老幼均可患病，但以青壯年為多，病后免疫力不強(qiáng)，可重復(fù)感染。食物的種類：主要是海產(chǎn)品，其中以墨魚、帶魚、蝦、蟹最為多見，如墨魚的帶菌率達(dá)93%，其次為鹽漬食品。食品中副溶血性弧菌的來源：人群帶菌者對各種食品的直接污染。沿海地區(qū)飲食從業(yè)人員、健康人群及漁民副溶血性弧菌帶菌率為11.7%左右，有腸道病史者帶菌率可達(dá)31.6～88.8%。間接污染，沿海地區(qū)炊具的副溶血性弧菌帶菌率為61.9%，被副溶血性弧菌污染的食物，在較高溫度下存放，食用錢加熱不徹底或者生吃，或熟制品受到帶菌者、帶菌的生食品、帶菌容器及工具等的污染。3.治療措施支持及對癥治療脫水者需輸入生理鹽水及葡萄鹽水，或口服補(bǔ)液鹽，以糾正失水。血壓下降者，除被動補(bǔ)充血容量，糾正酸中毒等外，可酌用血管活性藥?？咕幬镙p度患者可不用抗菌藥物，較重者可給復(fù)方新諾明或慶大霉素、阿米卡星和諾氟沙星等喹諾酮類抗菌藥物【上述抗生素類可能使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，使用須謹(jǐn)慎】。發(fā)生中毒后要立即停止食用可疑中毒食品，并到醫(yī)院醫(yī)治。副溶血性弧菌對氯霉素敏感。嘔吐、腹瀉嚴(yán)重者要補(bǔ)充水和鹽。4.中毒預(yù)防加工海產(chǎn)品的案板上副溶血弧菌的檢出率為87.9%。因此，對加工海產(chǎn)品的器具必須嚴(yán)格清洗、消毒。海產(chǎn)品一定要燒熟煮透，加工過程中生熟用具要分開。烹調(diào)和調(diào)制海產(chǎn)品拼盤時可加適量食醋。食品燒熟至食用的放置時間不要超過4個小時。主要病理變化為空腸及回腸有輕度糜爛，胃粘膜炎、內(nèi)臟（肝、脾、肺）淤血等。第五章致瀉大腸埃希菌的生物危害評估報告1.生物學(xué)特性大腸埃希氏菌更習(xí)慣稱為大腸桿菌，分類于腸桿菌科，歸屬于埃希氏菌屬，統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌，一般包括五種：即腸毒素性大腸桿菌（ETEC）、致病性大腸桿菌（EPEC）、出血性大腸桿菌（EHEC）、侵襲性大腸桿菌（EIEC）和粘附性大腸桿菌（EAEC）。大腸埃希氏菌為兩端鈍圓的短小桿菌，一般大小約0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生長條件不同，個別菌體可呈近似球狀或長絲狀。此菌多單獨存在或成雙，但不呈長鏈狀排列。約有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能運(yùn)動，但多數(shù)菌體只有1-4根，一般不超過10根，故菌體動力弱；多數(shù)菌株生長有比鞭毛細(xì)、短、直且數(shù)量多的菌毛，有的菌株具有莢膜或微莢膜；不形成芽胞，對普通堿性染料著色良好，革蘭氏染色陰性。此菌合成代謝能力強(qiáng)，在含無機(jī)鹽、胺鹽、葡萄糖的普通培養(yǎng)基上生長良好。最適生長溫度為37℃，在42-44℃條件下仍能生長，生長溫度范圍為15大腸埃希氏菌生華物性是，發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣，分解蔗糖因菌株而異，錄素酶試驗陰性，IMVi試驗++--，有些菌株如堿性異型菌群，微產(chǎn)堿，不產(chǎn)氣，無動力，易與志賀菌混淆。大腸埃希氏菌的抗原構(gòu)造主要由菌體抗原(O)，鞭毛抗原(H)和莢膜抗原(K)三部分組成?，F(xiàn)巳知有171個O抗原、99個K抗原和56個H抗原。2.危害程度分類根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部制定《人間傳染的病原微生物名錄》該菌危害程度為第三類。3.致病性和感染劑量致瀉大腸埃希氏菌在人和動物的大便中大量存在，引起人體以腹瀉癥狀為主的全球性疾病，其中尤以EPEC、ETEC所占比例為大。其中有少數(shù)幾種引起人類食物中毒，部分埃希氏菌株與嬰兒腹瀉有關(guān)，並可引起成人腹瀉或食物中毒的暴發(fā)，感染劑量約為107～108。盡管目前報道各地主要腹瀉病是由志賀氏菌或輪狀病毒引起的，但是，多年來，致瀉性大腸桿菌引起的腹瀉病例始終位于第二位，可見大腸桿菌腸道傳染的廣泛性。還有，致瀉性大腸桿菌亦可常年引發(fā)人體腹瀉，以夏秋季為高峰，在患者感染住院率中，嬰幼兒占60%以上4.暴露的潛在后果攝入是主要的實驗室危害，可引起實驗人員感染。暴露在氣溶膠中能否造成危害尚不清楚。5.感染途徑通過污染食品和水源經(jīng)口傳播。6.微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性此菌對理化因素的抵抗力，在無芽胞菌中是最強(qiáng)的一種，在室溫可存活數(shù)周，在土壤、水中存活數(shù)月，耐寒力強(qiáng)，但是在30分鐘內(nèi)快速冷凍，將37℃降至4℃的過程，可殺死此菌。加熱60℃7.濃度和濃縮標(biāo)本的容量一般樣本檢測。8.自然和易感人群宿主致瀉大腸埃希氏菌的宿主主要為牛、豬、羊、雞等家禽家畜，許多被該微生物污染的食物都不得可以作為傳播媒介，幼兒、老人及免疫缺陷者更為易感。9.實驗操作活動致瀉大腸埃希氏菌巳證明會對實驗人員造成危害。攝入是主要的實驗室危害，暴露在氣溶膠中能否造成危害尚不清楚。按照國家標(biāo)準(zhǔn)方法對樣本（糞便、食品、水樣）進(jìn)行分離，培養(yǎng)，鑒定。建議采用BSL-2級水平的操作技術(shù)，防擴(kuò)散設(shè)備和設(shè)施。一旦發(fā)生意外，按照本實驗室的《意外事故應(yīng)對方案和應(yīng)急程序》進(jìn)行處理。10.預(yù)防和治療致瀉大腸埃希氏菌引起人體以腹瀉癥狀為主疾病，根據(jù)菌型不同可引起如一些疾病：輕度水瀉，痢疾樣腹瀉、出血性腹瀉，也可引起食物中毒性疾病。目前尚無可用于人類的疫苗。對本病的治療，病人應(yīng)予胃腸道隔離，除一般治療外，可根據(jù)大便細(xì)菌培養(yǎng)及藥物敏感試驗選用適當(dāng)?shù)目咕幬镒鞑≡委?，如選用慶大霉素、丁胺卡那霉素等。預(yù)防致瀉大腸埃希氏菌的感染，首先是要做好個人衛(wèi)生。切實做好飲食衛(wèi)生、水源及糞便管理,消滅蒼蠅,切斷傳播途徑，防止病從口入。第六章傷寒沙門氏菌的生物危害評估報告?zhèn)抽T菌，又稱傷寒桿菌，屬沙門菌屬D組。革蘭染色陰性，呈短桿狀，周有鞭毛，能活動，不產(chǎn)生芽孢，無莢膜。在普通培養(yǎng)基上能生長，在含有膽汁的培養(yǎng)基中生長更好。傷寒桿菌在自然界中的生活力較強(qiáng)，在水中可存活2—3周，在糞便中能維持1—2個月，在牛奶中不僅能生存，且可繁殖。耐低溫，在冰凍環(huán)境中可存活數(shù)月，但對光、熱、干燥及消毒劑的抵抗能力較弱，日光直射數(shù)小時即死，加熱至60~C后30分鐘或煮沸后立即死亡，消毒飲水余氯可迅速致死。傷寒桿菌只感染人類，在自然條件下不感染動物。傷寒桿菌具有菌體(“O”)抗原、鞭毛(“H”)抗原和表面(“i'’)抗原，均能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，但這些并非保護(hù)性抗體。由于“O”和“H”抗原性較強(qiáng)，故常用于血清凝集試驗(肥達(dá)反應(yīng))以輔助臨床診斷，亦可用以制備傷寒菌苗供預(yù)防接種?！癷'’抗原見于新分離(特別是從病人血液分離)的菌株，能干擾血清中的殺菌效能和吞噬功能，是傷寒桿菌的重要毒力因子，但其抗原性不強(qiáng)，所產(chǎn)生的“i'’抗體的凝集效價一般較低且為時甚短。當(dāng)病原菌從人體中清除后，“i'’抗體滴度迅速下降，故“i'’抗體的檢出雖對本病的診斷無多大幫助，但有助于發(fā)現(xiàn)帶菌者。傷寒桿菌在菌體裂解時可釋放強(qiáng)烈的內(nèi)毒素，對本病的發(fā)生和發(fā)展起著較重要的作用。1.流行病學(xué)(一)傳染源：為病人及帶菌者。病人從潛伏期開始即可從糞便排菌，從病程第1周末開始經(jīng)尿排菌，故整個病程中均有傳染性，尤以病程的2—4周內(nèi)傳染性最大。慢性帶菌者是本病不斷傳播或流行的主要傳染源。原有慢性肝膽管疾病(如膽囊炎、膽石癥等)的傷寒病人易成為慢性帶菌者，約1％—4％患者在腸道和膽囊中隱藏傷寒桿菌達(dá)數(shù)月或數(shù)年之久。(二)傳播途徑傷寒桿菌隨病人或帶菌者的糞、尿排出后，通過污染的水或食物、日常生活接觸、蒼蠅和蟑螂等傳播。其中，水源污染是本病傳播的重要途徑，亦是暴發(fā)流行的主要原因。食物污染也可引起本病的流行，而散發(fā)病例一般以日常生活接觸傳播為多。(三)人群易感性人對傷寒普遍易感。病后可獲得持久性免疫，再次患病者極少。(四)流行特征世界各地均有本病發(fā)生，以熱帶、亞熱帶地區(qū)多見，可散發(fā)、地方性流行或暴發(fā)流行。在發(fā)展中國家主要因為水源污染而暴發(fā)流行，發(fā)達(dá)國家則以國際旅游感染為主。本病終年可見，但以夏秋季最多。其中以兒童和青壯年居多。局部地區(qū)流行的傷寒耐藥菌株有所增加，耐藥譜也在逐漸擴(kuò)大。除耐氯霉素、復(fù)方磺胺甲嗯唑、氨芐西林外，少數(shù)菌株對頭孢菌素及喹諾酮類抗菌藥物也產(chǎn)生耐藥性。2.實驗室檢查（一）常規(guī)檢查：血白細(xì)胞大多為3×109/L～4×109/L，伴中性粒細(xì)胞減少和嗜酸粒細(xì)胞消失，后者隨病情的好轉(zhuǎn)逐漸回升。極期嗜酸粒細(xì)胞＞2%，絕對計數(shù)超過4×108/L者可基本除外傷寒。高熱時可有輕度蛋白尿。糞便隱血試驗陽性。（二）細(xì)菌學(xué)檢查：①血培養(yǎng)是確診的論據(jù)，病程早期即可陽性，第7～10病日陽性率可達(dá)90%，第三周降為30%～40%，第四周時常陰性；②骨髓培養(yǎng)陽性率較血培養(yǎng)高，尤適合于已用抗菌素藥物治療，血培養(yǎng)陰性者；③糞便培養(yǎng)，從潛伏期起便可獲陽性，第3～4周可高達(dá)80%，病后6周陽性率迅速下降，3%患者排菌可超過一年；④尿培養(yǎng)：病程后期陽性率可達(dá)25%，但應(yīng)避免糞便污染；⑤玫瑰疹的刮取物或活檢切片也可獲陽性培養(yǎng)。（三）免疫學(xué)檢查1.肥達(dá)氏試驗：傷寒血清凝集試驗即肥達(dá)反應(yīng)陽性者對傷寒，副傷寒有輔助診斷價值。檢查中所用的抗原有傷寒桿菌菌體（O）抗原，鞭毛（H）抗原，副傷寒甲，乙，丙鞭毛抗原共5種，目的在于用凝集法測定病人血清中各種抗體的凝集效價。病程第1周陽性反應(yīng)不多，一般從第2周開始陽性率逐漸增高，至第4周可達(dá)90%，病愈后陽性反應(yīng)可持續(xù)數(shù)月之久。有少數(shù)病人抗體很遲才升高，甚至整個病程抗體效價很低（14.4%)或陰性（7.8%～10%），故不能據(jù)此而排除本病。Widal試驗已沿用近100年，60年代曾有人對其特異性提出異議，認(rèn)為其結(jié)果存在著混亂模糊的情況，非傷寒發(fā)熱性疾病Widal's試驗也呈陽性結(jié)果，如各種急性感染，腫瘤，結(jié)締組織病性疾病，慢性潰瘍性結(jié)腸炎，均可出現(xiàn)陽性結(jié)果。Perlnan等認(rèn)為無菌的結(jié)腸細(xì)胞和腸桿菌可能有共同的抗原，結(jié)腸粘膜損害所產(chǎn)生的抗結(jié)腸抗體與沙門菌菌體抗原起交叉反應(yīng)，因此對肥達(dá)氏反應(yīng)結(jié)果的判定宜審慎，必須密切結(jié)合臨床資料，還應(yīng)強(qiáng)調(diào)恢復(fù)期血清抗體效價的對比，有人提出應(yīng)用流行菌株抗原與國際菌株相比，陽性率可提高，建議用當(dāng)?shù)亓餍芯耆〈鷩H標(biāo)準(zhǔn)菌株，以提高流行區(qū)域傷寒診斷的陽率。2.其他免疫學(xué)檢查（1）被動血凝試驗（PHA）：用傷寒桿菌菌體抗原致敏紅細(xì)胞，使之與被檢血清反應(yīng)，根據(jù)紅細(xì)胞凝集狀況判斷有無傷寒特異性抗體存在，國內(nèi)外報道陽性率90%～98.35%，假陽性率5%左右。鮑行豪等曾報道LSP-PHA對傷寒血培養(yǎng)患者的檢出率為89.66%，早期病人90.02%，臨床確診者為82.5%，且主要檢測的是特異IgM抗體，故可用于早期診斷。（2）對流免疫電泳（CIE）：本方法可用于血清中可溶性傷寒抗原或抗體的檢測，操作簡便，便于基層推廣，特異性較高；但敏感性較低，不同作者報道為24%～92%，主要受采集血清時間的影響，發(fā)病初期最易測出，故可用于傷寒的早期診斷。（3）協(xié)同凝集試驗（COA）：利用金葡菌的葡萄球菌A蛋白（SPA）可（2）對流免疫電泳（CIE）：本方法可用于血清中可溶性傷寒抗原或抗體的檢測，操作簡便，便于基層推廣，特異性較高；但敏感性較低，不同作者報道為24%～92%，主要受采集血清時間的影響，發(fā)病初期最易測出，故可用于傷寒的早期診斷。（4）免疫熒光試驗（IFT）：Doshi等用傷寒桿菌菌體Vi懸液作抗原進(jìn)行間接免疫熒光抗體檢測，140例血培養(yǎng)陽性的傷寒患者134例（95.7%）陽性；394例對照者僅4例（1%）假陽性，目前有關(guān)本法的報道尚少，傷寒疫預(yù)防接種和其它沙門氏菌感染是否會影響本試驗特異性，尚需進(jìn)一步研究。（5）酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：ELISA的基本原理是用酶促反應(yīng)的放大作用來顯示初級免疫學(xué)反應(yīng)，既可檢測抗原，又可檢測抗體，用ELISA法檢測傷寒患者Vi抗原，靈敏性達(dá)1ng/ml，高于CoA法9100ng/ml，并可檢測到1∶1024稀釋后尿液中的Vi抗原。國內(nèi)、外用ELISA檢測過臨床標(biāo)本中的Vi抗原，V9抗原，LPS，H抗原等，敏感性在62.5%～93.1%，因檢測抗原的不同而異，多數(shù)在80%以上。杭州鮑行豪等應(yīng)用ELISA同時檢測IgM和IgG抗體，LPS-IgM-ELISA的敏感性為91.38%，特異性為99.02%，LPS-IgG-ELISA分別為93.1%和98.02%，在傷寒的血清免疫學(xué)診斷方法中，ELISA方法簡便，快速，敏感，特異性高，是公認(rèn)較好的一種診斷方法。（四）分子生物學(xué)診斷方法1.DNA探針（DNAProbe）DNA探針是用DNA制備的診斷試劑，用于檢測或鑒定特定的細(xì)菌，方法是用一段已標(biāo)記的特定的DNA片段（探針）與標(biāo)本中已變性的細(xì)菌DNA雜交，通過測定是否發(fā)生雜交反應(yīng)來達(dá)到檢測目的，由于此探針是以細(xì)菌專有的特異性基因片斷制備，故特異性很高。用DNA探針對培養(yǎng)所得的傷寒桿菌進(jìn)行檢測，敏感性需標(biāo)本中達(dá)1000個細(xì)菌才能檢出。DNAProbe的特異性高而敏感性低，一般用于菌種鑒定及分離。2.聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）PCR方法是80年代中后期發(fā)展起來的一種分子生物學(xué)方法，它能在數(shù)小時內(nèi)在體外將目標(biāo)基因或DNA片段擴(kuò)增到數(shù)百萬倍，檢出率較DNA探針高100～10000倍，國外JaeHS等用PCR方法擴(kuò)增傷寒的鞭毛抗原編碼基因，敏感度能檢出10個傷寒菌，特異性為100%，PCR方法因其高度敏感，易出現(xiàn)產(chǎn)物污染，所以控制PCR方法的假陽性及假陰性，是提高準(zhǔn)確度的關(guān)鍵。3.細(xì)菌的生物安全防護(hù)在實驗室操作上對于有高風(fēng)險的人員，如免疫缺陷者，要嚴(yán)格限制進(jìn)入。對于針頭和銳器要有警示，要用專門存放銳器的容器盛裝。在個人防護(hù)上，要求穿隔離衣，出實驗室時應(yīng)將隔離衣脫下；在可能接觸病原時要戴一次性使用的手套，但不要戴手套接觸清潔表面（如電話等），脫去手套后要洗手；在BSC外面進(jìn)行操作時，要進(jìn)行面部保護(hù)，如套口罩、眼罩、面罩等。要有泡手消毒缸和洗眼臺，還要有高壓消毒器第七章志賀氏菌的生物危害評估報告1.生物學(xué)特性志賀氏菌屬（Shigella）的細(xì)菌（通稱痢疾桿菌），是細(xì)菌性痢疾的病原菌人類對痢疾桿菌有很高的易感性。在幼兒可引起急性中毒性菌痢，死亡率甚高。志賀氏菌和大腸桿菌都屬于腸桿菌科，根據(jù)DNA雜交研究結(jié)果表明，志賀氏菌屬的四個種和大腸桿菌屬在生化上是難以區(qū)分的，因為有產(chǎn)氣的志賀氏菌，也有乳糖陰性、不產(chǎn)氣、不運(yùn)動的大腸桿菌，有些大腸桿菌也能引起痢疾狀的腹瀉。志賀氏菌屬細(xì)菌的形態(tài)與一般腸道桿菌無明顯區(qū)別，為革蘭氏陰性桿菌，長約2-3μm,寬0.5-0.7μm。不形成芽胞，無莢膜，無鞭毛，不運(yùn)動，有菌毛。志賀氏菌需氧或兼性厭氧。營養(yǎng)要求不高，能在普通培養(yǎng)基上生長，最適溫度為37℃，最適pH為6.4-7.8。37℃培養(yǎng)18-24小時后菌落呈圓形、微凸、光滑濕潤、無色、半透明、邊緣整齊，直徑約2nm，宋內(nèi)氏菌菌落一般較大，較不透明，并常出現(xiàn)扁平的粗糙型菌落。在液體培養(yǎng)基中呈均勻渾濁生長，無菌膜形成。根據(jù)抗原構(gòu)造的不同，按最新國際分類法，將本屬細(xì)菌分為四個群、39個血清型。2.危害程度分類根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部制定《人間傳染的病原微生物名錄》該菌危害程度為第三類。3.致病性和感染劑量志賀氏菌引起的細(xì)菌性痢疾，主要通過消化道途徑傳播。根據(jù)宿主的健康狀況和年齡，只需少量病菌（至少為10～100個細(xì)胞）進(jìn)入，就有可能致病。致病因素：志賀氏菌的致病作用，主要是侵襲力、菌體內(nèi)毒素個別菌株能產(chǎn)生外毒素。志賀氏菌引起的細(xì)菌性痢疾可分為兩類一類是急性細(xì)菌性痢疾：又分急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢三型；二類是慢性細(xì)菌性痢疾：又分慢性遷延型、慢性隱伏型、慢性急性發(fā)作型三型。病后有一定的免疫力，但免疫期短，也不穩(wěn)定。4.暴露的潛在后果暴露后可能引起感染，菌量大時可使實驗人員顯性感染，菌量很少時常呈暫時的帶菌狀態(tài)。被感不染后，成為傳染源，可能對周圍及環(huán)境造成污染，應(yīng)及時得到控制。5.感染途徑通過污染食品和水源經(jīng)口傳播，無其它感染途徑。6.微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性志賀氏菌屬在外界環(huán)境中的生存力，以宋內(nèi)氏最強(qiáng)，福氏菌次之，志賀氏菌最弱。一般在潮濕土壤中能存活34天，37℃水中存活20天，在糞便內(nèi)（室溫）存活11天。日光直接照射30分鐘，56-60℃10分即被殺死，對高溫和化學(xué)消毒劑很敏感，1%石炭酸中15-30分鐘即被殺死，對氯霉素、磺胺類、鏈霉素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性。7.濃度和濃縮標(biāo)本的容量一般樣本檢測。8.自然和易感人群宿主人和靈長類是志賀氏菌的適宜宿主，營養(yǎng)不良的幼兒、老人及免疫缺陷者更為易感。9.實驗操作活動巳有文獻(xiàn)證明，志賀氏菌可造成實驗人員感染細(xì)菌性痢疾，僅在美國和英國就有數(shù)十例報告。盡管在捕獲的非靈長類動物中曾有過暴發(fā)，但人類是惟一重要的傳染源。然而，實驗室感染的豚鼠、其他嚙齒類動物和非人靈長類動物也是被證實的傳染源。這種病原體可以存在于受感染的人或動物的糞便中，極少存在于血液中。攝入及胃腸道外接種該病原體是主要的實驗危害。人類經(jīng)口感染福氏志賀菌的ID25～50大約是200個細(xì)菌。暴露在氣溶膠中能否引起感染目前還不清楚。按照國家標(biāo)準(zhǔn)方法對樣本（糞便、食品、水樣）進(jìn)行分離，培養(yǎng)，鑒定。建議采用BSL-2級水平的操作技術(shù)，防擴(kuò)散設(shè)備和設(shè)施。一旦發(fā)生意外，按照本實驗室的《意外事故應(yīng)對方案和應(yīng)急程序》進(jìn)行處理。10.預(yù)防和治療志賀氏蓖可引起細(xì)菌性痢疾。細(xì)菌性痢疾又可分為兩類，一類是急性細(xì)菌性痢疾：又分急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢三型；二類是慢性細(xì)菌性痢疾：又分慢性遷延型、慢性隱伏型、慢性急性發(fā)作型三型。目前疫苗還不可用于人類。對本病的治療，病人應(yīng)予胃腸道隔離，除一般治療外，可根據(jù)大便細(xì)菌培養(yǎng)及藥物敏感試驗選用適當(dāng)?shù)目咕幬镒鞑≡委?。如?fù)方磺胺甲基異唑、氯霉素、慶大霉素及卡那霉素等。亦可應(yīng)用氨芐青霉素或氧哌嗪青霉素等治療。中毒性痢疾應(yīng)予相應(yīng)的搶救措施，如抗休克、冬眠藥物和脫水藥的應(yīng)用等。慢性菌痢可采用保留灌腸的方法治療。。預(yù)防沙門氏菌感染，首先是要消滅傳染源是預(yù)防措施之一，除治愈患者外，必須對托幼、飲食業(yè)及自來水廠工作人員定期檢查，及時發(fā)現(xiàn)帶菌者，調(diào)離工作崗位并予以治療。切實做好飲食衛(wèi)生、水源及糞便管理,消滅蒼蠅,切斷傳播途徑，防止病從口入。第八章蠟樣芽胞桿菌的生物危害評估報告1.細(xì)菌的傳播與致病蠟樣芽胞桿菌在自然界分布廣泛，常存在于土壤、灰塵和污水中，植物和許多生熟食品中常見。已從多種食品中分離出該菌，包括肉、乳制品、蔬菜、魚、土豆、糊、醬油、布丁、炒米飯以及各種甜點等。在美國，炒米飯是引發(fā)蠟樣芽胞桿菌嘔吐型食物中毒的主要原因；在歐洲大都由甜點、肉餅、色拉和奶、肉類食品引起；在我國則主要與受污染的米飯或淀粉類制品有關(guān)。1950年Hauge在對挪威奧斯陸某醫(yī)院職工和病員進(jìn)食甜食后引起的食物中毒研究中，首次明確指出蠟樣芽胞桿菌的致病作用。蠟樣芽胞桿菌作為一種食源性疾病的報導(dǎo)較多，在各種食品中的檢出率也較高，如1982年犬飼等對日本名古屋所采1641份食品樣品中，有193份檢出了該菌、陽性率為11.8%；1984年我國有關(guān)單位對南京市所采211份食品樣品中，有81份檢出了該菌，陽性率為38.4%。蠟樣芽胞桿菌食物中毒通常以夏秋季（6-10月）最高。引起中毒的食品常于食前由于保存溫度不當(dāng)，放置時間較長或食品經(jīng)加熱而殘存的芽胞以生長繁殖的條件，因而導(dǎo)致中毒。中毒的發(fā)病率較高，一般為60-100%。但也有在可疑食品中找不到蠟樣芽胞桿菌而引起食物中毒的情況，一般認(rèn)為是由于蠟桿芽胞桿菌產(chǎn)生的熱穩(wěn)定毒素所致。當(dāng)攝入的食品其蠟樣芽胞桿菌數(shù)量達(dá)>106/克時?？蓪?dǎo)致食物中毒。蠟樣芽胞桿菌食物中毒在臨床上可分為嘔吐型和腹瀉型兩類。嘔吐型的潛伏期為0.5-6小時，中毒癥狀以惡心、嘔吐為主，偶而有腹痙攣或腹瀉等癥狀，病程不超過24小時，這種類型的癥狀類似于由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒。腹瀉型的潛伏期為6-15小時，癥狀以水瀉、腹痙攣、腹痛為主，有時會有惡心等癥狀，病程約24小時，這種類型的癥狀類似于產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的食物中毒。嚴(yán)重者還可導(dǎo)致敗血癥。蠟樣芽胞桿菌引起食物中毒是由于該菌可產(chǎn)生腸毒素。它產(chǎn)生兩種性質(zhì)不同的代謝物，引起腹瀉型綜合癥的是一種大分子量蛋白；而引起嘔吐型綜合癥的被認(rèn)為是一種小分子量、熱穩(wěn)定的多肽。致嘔吐型綜合癥的腸毒素至今尚未提純，致腹瀉型綜合癥的腸毒素已提純，其純化的腸毒素分子量為55-6.0×103。致腹瀉的腸毒素能使小白鼠致死。2.細(xì)菌的生物學(xué)特性蠟樣芽胞桿菌分類為芽胞桿菌屬的第I群，該群有22個種。根據(jù)營養(yǎng)型菌細(xì)胞的寬度分為兩類，蠟樣芽胞桿菌、蕈狀芽胞桿菌、蘇云金芽胞桿菌、炭疽芽胞桿菌和巨大芽胞桿菌屬“大細(xì)胞菌種”。蠟樣芽胞桿菌為革蘭氏陽性大桿菌，大小為1-1.3×3-5μm，需氧或兼性需氧，生長6h即可形成原形芽胞，芽胞位于菌體的中心或次末端不突出菌體，菌體兩端較平整，多數(shù)呈鏈狀排列，與炭疽桿菌相似。引起食物中毒的菌株多為周鞭毛，有動力無莢膜。它的生長溫度為25-37℃，最佳溫度30-35℃。在肉湯中生長混濁有菌膜或壁環(huán)，振搖易乳化。在普通瓊脂上生成的菌落較大，直徑3-10mm，灰白色、不透明，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣常呈擴(kuò)展?fàn)罟识妹?。偶有產(chǎn)生黃綠色色素，在血瓊脂平板上呈草綠色溶血。在甘露醇、卵黃多粘菌素（MYP）平板上，呈伊紅粉色菌落。能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、水楊素等，VP實驗陽性，可液化明膠，卵磷脂酶陽性，但多次傳代后，其生化特性?？筛淖?。此外蠟桿芽胞桿菌耐熱，其食物中毒菌株中的游離芽胞能耐受100℃30分鐘，而干熱滅菌需120℃60分鐘才能殺死。本菌對氯霉素、紅霉素和慶大霉素敏感，對青霉素、磺胺類和呋喃類耐藥。3.細(xì)菌的實驗室檢查及其它檢查1.標(biāo)本收集采集可疑食物或收集糞便和嘔吐物進(jìn)行直接涂片染色鏡檢和其他操作。2.活菌計數(shù)無菌操作稱取樣品50g放入滅菌攪拌缸內(nèi)。加Butterfield磷酸鹽緩沖稀釋液450mL，以高速（18.000-21.000rpm）均質(zhì)2min。用上述1:10稀釋液，連續(xù)稀釋供蠟樣芽胞桿菌計數(shù)。移取10mL均質(zhì)樣液（1:10稀釋）加到90mL空白液中，從10-2到10-6制備一系列稀釋液，充分混勻，并繼續(xù)稀釋直到10-6為止。取樣品的各個稀釋液（包括1:10）0.1mL接種2只MYP（甘露醇一卵黃多粘菌素瓊脂）平板，用滅菌玻璃棒在每只平板表面涂布均勻。將平板置30℃3.MPN技術(shù)被推薦用于食品中低于10個/g蠟樣芽胞桿菌的檢驗。某些不適合用平板計數(shù)法的脫水淀粉類食品也可用此法檢驗。在胰酪胨大豆多粘菌素肉湯中接種3管MPN系列，10-1、10-2、10-3的稀釋液各接種1mL于3管。將培養(yǎng)管置30℃培養(yǎng)48±2小時，檢查生長密集、典型的蠟樣芽胞桿菌。將陽性管培養(yǎng)物劃線接種于MYP平板，于304.分離培養(yǎng)將可疑食物置無菌乳缽中，加適量生理鹽水研磨后，劃線接種于普通瓊脂平板或血瓊脂平板，若為嘔吐物可直接劃線接種于上述平板，于37℃培養(yǎng)5.若有類似蠟樣芽胞桿菌的菌落出現(xiàn)再進(jìn)一步分離純化以及進(jìn)行生化反應(yīng)。6.蠟樣芽胞桿菌的證實試驗蠟樣芽胞桿菌的分離物應(yīng)符合下述條件：1)革蘭氏陽性產(chǎn)芽胞大桿菌，其芽胞不突出體外；2）在MYP瓊脂上產(chǎn)生卵磷脂酶而不發(fā)酵甘露醇；3）厭氧培養(yǎng)生長，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸；4）還原硝酸鹽；5）VP陽性；6）分介L-酪氨酸；7）在含0.001%溶菌酶的培養(yǎng)基中能生長。7.蠟樣芽胞桿菌群的鑒別試驗要鑒別典型蠟樣芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌群的其它種還需進(jìn)一步進(jìn)行下述試驗：1）動力試驗；2）根狀生長試驗；3）溶菌活性試驗；4）蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗：蠟樣芽胞桿菌有動力、強(qiáng)溶血、不形成根狀菌落，或不產(chǎn)生蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶。而且蠟樣芽胞桿菌在4℃8.血清學(xué)分型、噬菌體分型。4.細(xì)菌的防治蠟樣芽胞桿菌所引起的食物中毒多因食品在食用前保存溫度較高（20℃以上）和放置時間較長，故對中毒的預(yù)防包括：由于蠟樣芽胞桿菌在15℃以下不繁殖，剩飯、剩菜應(yīng)放在低溫保存。該菌污染的食品一般無腐敗變質(zhì)的異味，不易被發(fā)覺。因此，剩飯、剩菜在食用前一定要再加熱。注意食品的貯藏和個人衛(wèi)生，防止塵土、昆蟲及其他不潔物污染食品。若一旦發(fā)生了中毒，則立即停止食用可疑污染的食品，多飲水。一般不需要使用抗生素治療。腹瀉較重者可到醫(yī)院就診。5.細(xì)菌的生物安全防護(hù)根據(jù)《病原微生物生物實驗室生物安全管理條例》中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）蠟樣芽胞桿菌屬于三類，BSL-2。（1）操作要求1、實驗時，未經(jīng)實驗室主任同意，限制或禁止進(jìn)入實驗室。2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。3、所有的操作過程應(yīng)盡量細(xì)心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。4、對于污染的銳器，必須時刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。5、注射和吸取感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進(jìn)行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。6、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行消毒。7、所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實驗室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運(yùn)出實驗室。離開該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。8、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時，要立即向?qū)嶒炇抑魅螆蟾?。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評估、觀察、治療，保留書面記錄。9、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或灑出后、或受到其他傳染源污染后，實驗室設(shè)備和工作臺面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護(hù)前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運(yùn)輸。（2）安全設(shè)備1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、或物理遏制裝置。2、確定可能形成傳染性氣溶膠或濺出物的實驗過程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。3、涉及高濃度或大體積的傳染源時，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī)，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實驗室內(nèi)離心。4、當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時，需采取面部保護(hù)措施（跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或灑到面上。5、在實驗室內(nèi)，必須使用專用的防護(hù)性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實驗室區(qū)域時，防護(hù)服必須留在實驗室內(nèi)。防護(hù)服可以在實驗室內(nèi)處理，也可以在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。6、可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重復(fù)使用，不能用于接觸“潔凈”的表面（鍵盤、電話等），也不應(yīng)當(dāng)戴著到實驗室外。要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。第九章單核增生李斯特菌的危害評估報告1.細(xì)菌的傳播與致病產(chǎn)單核李斯特菌是李斯特菌屬中唯一可對人類致病的菌種，能夠引起李斯特菌病，主要表現(xiàn)為腦膜炎和敗血癥。健康的帶菌者是主要的傳染源，可以經(jīng)糞-口途徑傳播，也可以通過胎盤和產(chǎn)道由帶菌的母親感染給新生兒。如果人的眼睛或皮膚與帶菌的病畜直接接觸，也可造成局部感染。產(chǎn)單核李斯特還能引起魚類、鳥類和哺乳動物牛、羊等多種動物疾病。2.細(xì)菌的生物學(xué)特性產(chǎn)單核李斯特菌是一種革蘭陽性短小桿菌，大小約為1~2μm×0.4~0.5μm，通常成雙排列，偶爾可見雙球狀。有鞭毛，但僅在18~20℃有動力，在37℃動力緩慢。無芽胞，一般不形成莢膜，但在含有血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成粘多糖莢膜。兼性厭氧，對營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上可生長，在血平板上會形成β-溶血。最適的生長溫度是30~37℃，并可在4℃條件下進(jìn)行冷增菌。產(chǎn)單核李斯特菌與葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌等及大腸埃希菌具有共同抗原。根據(jù)菌體及鞭毛抗原的不同，可將其分為4個血清型，1、3、4型還可分為若干亞型。抗原的結(jié)構(gòu)與毒力無關(guān)，致病的物質(zhì)主要是溶血素和菌體表面成分。其中1型主要感染嚙齒動物，4型主要感染反芻動物。但各型均可對人類致病，尤以1a和1b最為多見。本菌耐堿不耐酸，對熱較為敏感，加熱50℃10min即可死亡。同時該菌對多種抗生素敏感，以氨芐青霉素為首選，尚有青霉素、鏈霉素、四環(huán)素、氯霉素和紅霉素等敏感。但該菌對磺胺、桿菌肽和多粘菌素耐藥。3.細(xì)菌的實驗室檢查1、標(biāo)本采集采集來自臨床的各種標(biāo)本，如腦脊液和血液。此外還可根據(jù)癥狀采集子宮、子宮頸、陰道、鼻咽部等部位的分泌物或組織，還有新生兒臍帶殘端、羊水及胎糞、尿等送檢。2、涂片鏡檢除了血液標(biāo)本外，其余標(biāo)本都可以涂片做革蘭染色鏡檢，或用產(chǎn)單核李斯特菌1型和4型及多價熒光抗體進(jìn)行染色。3、動力檢查在18~20℃有動力，在374、分離培養(yǎng)取腦脊液離心后的沉淀物劃線接種于羊血瓊脂平板上，于10%CO2環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，35℃孵育18~24h；血液標(biāo)本5ml注入含有50ml培養(yǎng)基的血培養(yǎng)瓶中，同樣在含10%CO2環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)；咽喉拭子、組織及糞便標(biāo)本可接種于肉湯培養(yǎng)基置4℃冰箱中進(jìn)行冷增菌。結(jié)果：產(chǎn)單核李斯特菌在血瓊脂平板上能產(chǎn)生狹窄的β-溶血環(huán)，菌落呈灰白色，直徑1~5、生化鑒定本菌可發(fā)酵多種糖類如葡萄糖、果糖、覃糖、麥芽糖核水楊素，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅和V-P實驗陽性，觸酶陽性，可使石蕊牛乳緩慢產(chǎn)酸并使其脫色，能水解精氨酸產(chǎn)氨。不還原硝酸鹽、不形成吲哚、不液化明膠和凝固血清，不分解尿素。能水解七葉苷，有時還可形成硫化氫。6、血清學(xué)實驗用已知的李斯特菌1型、4型和多價抗血清玻片凝集試驗對可疑菌進(jìn)行鑒定。7、動物結(jié)膜點種試驗取幼兔或豚鼠一只，用本菌24h肉湯培養(yǎng)物1滴，滴入實驗。8、動物一側(cè)的結(jié)膜囊內(nèi)，以另一側(cè)為對照，觀察5天。一般產(chǎn)單核李斯特菌會在接種后的24~36h內(nèi)，出現(xiàn)化膿性結(jié)膜炎。4.細(xì)菌的生物安全防護(hù)根據(jù)《病原微生物生物實驗室生物安全管理條例》中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）產(chǎn)單核李斯特菌屬于三類，BSL-2。相關(guān)的防護(hù)事宜包括：（1）操作要求1、實驗時，未經(jīng)實驗室主任同意，限制或禁止進(jìn)入實驗室。2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。3、對于污染的銳器，必須時刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。4、注射和吸取感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進(jìn)行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。5、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行消毒。6、所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實驗室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運(yùn)出實驗室。離開該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。7、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或灑出后、或受到其他傳染源污染后，實驗室設(shè)備和工作臺面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護(hù)前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運(yùn)輸。（2）安全設(shè)備1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、或物理遏制裝置。2、確定可能形成傳染性氣溶膠或濺出物的實驗過程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。3、涉及高濃度或大體積的傳染源時，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī)，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實驗室內(nèi)離心。4、在實驗室內(nèi)，必須使用專用的防護(hù)性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實驗室區(qū)域時，防護(hù)服必須留在實驗室內(nèi)。防護(hù)服可以在實驗室內(nèi)處理，也可以在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。5、可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重復(fù)使用，不能用于接觸“潔凈”的表面（鍵盤、電話等），也不應(yīng)當(dāng)戴著到實驗室外。要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。第十章流感病毒的危害評估報告流感病毒屬正粘病毒科，分甲、乙、丙三型。具有“變異”特性，不斷產(chǎn)生新的亞型。可引起人或家禽的流行性感冒。這是一種急性呼吸道傳染病，它具有突然暴發(fā)、迅速蔓延、波及面廣的特點。在人群中，它的發(fā)病率高，病死率低，多發(fā)于青少年，恢復(fù)快，具有一定季節(jié)性。而禽流感發(fā)病率和病死率高，季節(jié)性不強(qiáng)，來源常不明。20世紀(jì)曾有4次流感大流行。流感流行時造成的經(jīng)濟(jì)損失名列各傳染病之首。流感是第一個實行全球監(jiān)測的傳染病。病人和病禽是主要的傳染源。傳播途徑以空氣飛沫傳播為主，也存在通過水源、密切接觸、垂直傳播、蚊蟲傳播等多種途徑。人群普遍易感，病后免疫時間短，而流感病毒變異性大，但型間無交叉免疫，所以人在一生中可多次患流感。流感病毒在外界的抵抗力弱，在56℃30分鐘條件下易被滅活，在室溫下傳染性很快喪失，100℃1分鐘即被滅活，但在0～4℃能存活數(shù)周，在-20℃真空干燥條件下可長期保存。對紫外線和化學(xué)有毒劑敏感。病毒暴露于通常使用的各種消毒劑和固定劑后，病毒即失去感染性。流感極易傳播，因此發(fā)現(xiàn)有流感病人，應(yīng)及早隔離和治療。流感流行期間盡可能避免人群集聚，注意房屋通風(fēng)，提倡在公共場所戴口罩，病人的口鼻腔分泌物及污染物應(yīng)隨時消毒。疫苗接種對預(yù)防流感有一定效果。保持環(huán)境衛(wèi)生，養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣也能起預(yù)防作用。流感是一自限性疾病，可使用抗流感病毒藥物和對癥治療來減輕癥狀。用抗菌素防止細(xì)菌繼發(fā)感染產(chǎn)生的并發(fā)癥。1.實驗?zāi)Ｊ?.1流感病毒的分離培養(yǎng)流感病毒大量存在于病人痰液、咽拭子和病禽尸解臟器中。分離流感病毒時，可用雞胚，最好用SPF雞胚，但一般只采用尿囊腔接種；也可用狗腎細(xì)胞（MDCK）。1.2流感病毒血清學(xué)診斷血凝抑制試驗（HI法）或微量中和法。必須采集雙份血清，疾病發(fā)作時頭3天立即采集（急性期血清），發(fā)病后2-3周采集（恢復(fù)期血清），在同一條件下進(jìn)行HI測定，在恢復(fù)期血清HI抗體滴度比急性期的高4倍或以上，就可加以確診。1.3流感病毒抗體檢測可用免疫熒光法和ELISA。1.4流感病毒核酸檢測逆轉(zhuǎn)錄PCR2.實驗中危害因素分析流感傳播途徑以空氣飛沫傳播為主，也存在通過水源、密切接觸、垂直傳播、蚊蟲傳播等多種途徑。操作具有高致病性的甲性H5和H7兩亞型毒株必須在P3實驗室內(nèi)進(jìn)行操作。特別是一些甲性流感毒株（H5N1，H9N2）通過何種途徑傳染人至今不清楚，因此采集標(biāo)本時，須做好一定的個人防護(hù)。流感病毒易發(fā)生基因重配，易形成新的亞型，但型間無交叉免疫。3.安全措施3.1嚴(yán)格按實驗室使用和安全操作技術(shù)規(guī)程及各個實驗項目的操作技術(shù)規(guī)程操作。3.2加強(qiáng)個人防護(hù)。采用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的口罩、防護(hù)服等個人防護(hù)用品，3.3強(qiáng)化離心、移液等環(huán)節(jié)的標(biāo)準(zhǔn)操作。3.4抗體檢測用血清標(biāo)本可先以56℃30分鐘處理。第十一章禽流感病毒的危害評估報告禽流感病毒（AIV）屬甲型流感病毒。流感病毒屬于RNA病毒的正黏病毒科，分甲、乙、丙3個型。其中甲型流感病毒多發(fā)于禽類，一些亞型也可感染豬、馬、海豹和鯨等各種哺乳動物及人類；乙型和丙型流感病毒則分別見