前列腺導(dǎo)管腺癌35例基底細(xì)胞變化的形態(tài)學(xué)

1、前列腺導(dǎo)管腺癌35例基底細(xì)胞變化的形態(tài)學(xué)【摘要】目的: 探討前列腺導(dǎo)管腺癌(PDA)基底細(xì)胞的病變特點(diǎn)，為前列腺癌的病理診斷提供依據(jù). 方法: 收集PDA標(biāo)本35例，應(yīng)用光鏡、免疫組化EliVisionTM Plus二步法，選擇34E12, P63, P504S, PSA, PSAP抗體檢測(cè)，觀察PDA中基底細(xì)胞的缺失情況. 結(jié)果: HE切片中35例PDA的基底細(xì)胞變化難以確定，但免疫組化顯示13例PDA多數(shù)癌巢周圍有較完整的基底細(xì)胞，3例PDA僅少數(shù)基底細(xì)胞殘存，19例PDA基底細(xì)胞完全缺失；本組病例中27例PDA邊緣少數(shù)小片狀浸潤(rùn)癌和/或小腺泡癌成分中P504S陽(yáng)性、34E12、P63均陰

2、性. 結(jié)論: 本研究發(fā)現(xiàn)35例PDA中的基底細(xì)胞盡管有明顯缺失，但殘存比率較高，提示在日益增多的前列腺穿刺標(biāo)本中，基底細(xì)胞缺失并非是PDA診斷的最重要指標(biāo)，若對(duì)基底細(xì)胞缺失期望值過(guò)高，則容易造成誤診或漏診. 【關(guān)鍵詞】 前列腺腫瘤；導(dǎo)管腺癌； 基底細(xì)胞；免疫組化Morphological changes of base cells in 35 cases of prostatic duct adenocarcinomasZHAO HongYan, YE MingFu, WANG YaLi, TANG JinLiang, CHEN RuiDepartment of Pathology, Xinq

3、iao Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400037, China【Abstract】 AIM: To investigate the clinicopathological features of basal cells in prostatic duct adenocarcinoma which can help pathological diagonosis of prostatic cancer. METHODS: Thirtyfive cases of prostatic duct adenocarcino

4、ma were studied by hematoxylin and eosin staining and immunohistochemical techniques of twostep ElivisionTM Plus method to detect the expression of 34E12, P63, P504S, PSA and PSAP. And the abscence of basal cells in prostatic duct adenocarcinoma was analysed according to the immunohistochemical stai

5、ning. RESULTS: Of the total 35 cases, nearly intact basal cells were observed by immunohistochemical staining in 13 cases;only small amounts of incomplete basal cells in 3 cases; and complete absence of base cells in 19 cases 27 cases with P504S positive, 34E12 and P63 negative staining at the edge

6、of small invasive carcinoma and/or small acinous carcinoma around the prostatic duct adenocarcinoma were also observed. CONCLUSION: Although obvious absence of basal cells is usually observed in prostate duct adenocarcinoma, some basal cells still remain in the tumor tissues, which shows that the ab

7、sence of basal cells is not the most significant index on the pathological diagnosis of prostate duct adenocarcinoma, and too much dependence on the importance of basal cell absence in diagnosis of prostate duct adenocarcinoma will lead to misdiagnosis and missed diagnosis.【Keywords】 prostatic neopl

8、asms; duct adenocarcinoma; basal cell; immunohistochemistry0 引言 前列腺導(dǎo)管腺癌（prostate duct adenocarcinoma, PDA）為前列腺腺癌的一種亞型. 隨著前列腺癌穿刺活檢的廣泛開(kāi)展, 前列腺癌診斷的復(fù)雜性日益受到病理工作者的重視. 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察35例PDA HE切片的鏡下結(jié)構(gòu)和基底細(xì)胞免疫組化的表達(dá)特點(diǎn)，探討該類前列腺癌中基底細(xì)胞的缺失比率、免疫組化表達(dá)特點(diǎn)、腫瘤生長(zhǎng)方式及導(dǎo)管腺癌周圍混合癌成分的相關(guān)性特點(diǎn)，客觀認(rèn)識(shí)基底細(xì)胞缺失在PDA診斷中的“重要性”， 為前列腺癌診斷提供依據(jù).1 材料和方法11 材料

9、 收集第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院199001/200708 185例手術(shù)切除的前列腺癌標(biāo)本，所有標(biāo)本均經(jīng)40 g/L甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋, HE 染色. 按WHO（2001）泌尿系統(tǒng)及男性生殖器官腫瘤分類中描述的組織形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)顯微鏡觀察，挑選明確診斷為PDA的病例35例作為本研究的主體病例. mAb 34E12, P63, PSA, PSAP(福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司); mAb P504S(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司). 除P504S為濃縮型外，其余抗體均為即用型.1.2 方法 每例選出具有代表性的癌細(xì)胞較豐富的蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片，片厚4 m，置于涂有多聚賴氨酸的玻片上. 用EliVis

10、ionTM Plus二步法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色. 抗原修復(fù)除染P504S的組織用EDTA煮沸修復(fù)外，其余均采用檸檬酸緩沖液煮沸抗原修復(fù)法處理. 操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，用PBS 代替一抗作陰性對(duì)照. 結(jié)果判斷: 34E12, P504S, PSA, PSAP陽(yáng)性定位于細(xì)胞質(zhì)中，偶見(jiàn)于胞膜；P63陽(yáng)性定位于胞核. 癌細(xì)胞呈黃棕色染色為陽(yáng)性,無(wú)黃棕色染色為陰性 . P504S（+）, 34E12和 P63均（-）定為基底細(xì)胞完全缺失（-）；P504S（+）, 34E12和/或P63（+），定為基底細(xì)胞存在，其中癌巢周圍大于80%的細(xì)胞34E12和/或P63表達(dá)為基底細(xì)胞基本完整（+），癌巢周圍

11、10%80%的細(xì)胞34E12和/或P63表達(dá)為基底細(xì)胞部分缺失（）.2 結(jié)果2.1 病理形態(tài)學(xué)觀察 全部病例的腫瘤區(qū)域呈大的導(dǎo)管狀腺癌結(jié)構(gòu)，包括篩狀型和實(shí)體型兩種類型. 其中篩狀型25例，癌巢中可見(jiàn)明確的篩孔狀腺樣結(jié)構(gòu)，或?qū)Ч芟侔┙M織內(nèi)散見(jiàn)一些小的腺體呈背靠背、橋狀、裂隙狀結(jié)構(gòu). 實(shí)體型10例，癌巢中腺樣結(jié)構(gòu)不明顯，癌細(xì)胞呈實(shí)片狀，可見(jiàn)少量裂隙，局部導(dǎo)管內(nèi)可見(jiàn)粉刺樣壞死物. 本組35例PDA中28例瘤細(xì)胞異型性明顯，核大，深染，核仁明顯增大，可見(jiàn)核分裂像，7例瘤細(xì)胞異型不明顯. 在光鏡下，僅發(fā)現(xiàn)其中10例癌性導(dǎo)管周圍尚可辨認(rèn)出較完整的“基底細(xì)胞”存在（圖1A），25例不能明確基底細(xì)胞是否殘存.

12、 本組病例中有1例為轉(zhuǎn)移至恥骨聯(lián)合上緣的PDA實(shí)體癌，巢團(tuán)周圍光鏡下觀察有完整的“基底細(xì)胞”存在, 基底樣細(xì)胞呈環(huán)狀包繞著癌巢周緣（圖1B）. 35例PDA的次要結(jié)構(gòu)區(qū)域可見(jiàn)一些無(wú)明確基底細(xì)胞的小腺泡和/或小片狀癌細(xì)胞浸潤(rùn).A: 篩狀型PDA尚可辨認(rèn)出部分基底細(xì)胞殘存; B: PDA基底樣細(xì)胞呈環(huán)狀包繞著癌巢周緣.圖1 PDA的HE結(jié)構(gòu)（略）2.2 免疫組化檢測(cè)結(jié)果2.2.1 PDA區(qū)的基底細(xì)胞免疫組化表達(dá) 結(jié)果顯示所有病例癌巢中央34E12, P63均為（-），基底細(xì)胞完全缺失；10例篩狀型及3例實(shí)體型邊緣部34E12或P63基本呈連續(xù)（+），表明基底細(xì)胞基本完整（圖2A）；2例篩狀型及1例

13、實(shí)體型邊緣部34E12或P63斷續(xù)（+）（圖2B），提示基底細(xì)胞部分缺失；19例(篩狀型13例，實(shí)體型6例)邊緣部34E12和P63均（-），基底細(xì)胞完全缺失. 其中1例轉(zhuǎn)移至恥骨聯(lián)合上緣的PDA實(shí)體癌癌巢周圍呈環(huán)狀的基底樣細(xì)胞34E12和P63（-），但PSA和PSAP均陽(yáng)性（圖3A）. 本實(shí)驗(yàn)中，基底細(xì)胞的34E12、P63兩種標(biāo)記物均陽(yáng)性13例，均陰性19例，相符率91.2%，P63陽(yáng)性而34E12陰性3例，不符率8.8%；未發(fā)現(xiàn)34E12陽(yáng)性而P63陰性的病例.A: PDA導(dǎo)管周圍34E12顯示基底細(xì)胞部分缺失; B: 篩狀型PDA的P63顯示基底細(xì)胞較完整存在.圖2 癌巢周圍基底細(xì)胞

14、的免疫組化表達(dá)情況（略）A: 一例轉(zhuǎn)移性PDA瘤細(xì)胞PSAP陽(yáng)性，基底樣細(xì)胞呈環(huán)狀強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá); B: 篩狀型PDA瘤細(xì)胞P504S陽(yáng)性.圖3 腫瘤細(xì)胞的免疫組化表達(dá)情況（略）2.2.2 PDA區(qū)的腫瘤細(xì)胞免疫組化表達(dá) 本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)30例（篩狀型21例，實(shí)體型9例） PDA中巢團(tuán)狀腫瘤區(qū)域的瘤細(xì)胞P504S（）（圖3B）；5例（篩狀型癌4例，實(shí)體型癌1例）癌細(xì)胞（-）. 所有病例的癌細(xì)胞PSA和PSAP均陽(yáng)性（+）或強(qiáng)陽(yáng)性（）表達(dá).2.2.3 PDA癌周浸潤(rùn)癌組織免疫組化表達(dá) 結(jié)果顯示，PDA周圍可見(jiàn)少量異形癌性腺泡和/或散在小片狀癌浸潤(rùn)，免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)這些病灶中，28例癌細(xì)胞P504S（+），

15、且34E12、P63均無(wú)表達(dá)（-），提示基底細(xì)胞完全缺失；7例導(dǎo)管腺癌周圍浸潤(rùn)的異型小腺泡，上皮細(xì)胞P504S（+），腺管邊緣34E12或P63顯斷續(xù)（+）表達(dá)，提示基底細(xì)胞部分缺失(表1).表1 PDA的34E12, P63, P504S, PSA, PSAP的表達(dá)和基底細(xì)胞的缺失情況（略）：1-25為篩狀型癌，26-35為實(shí)體型癌.3 討論 前列腺的基底細(xì)胞核呈條狀與基底膜平行，深染，胞質(zhì)缺少或缺乏. 電鏡觀察此類細(xì)胞體積小，細(xì)胞器較少，細(xì)胞間可見(jiàn)橋?；虬霕蛄＝Y(jié)構(gòu)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)未見(jiàn)到成熟的肌絲，并且其34E12陽(yáng)性和S100、SMA陰性，表明該細(xì)胞屬于基底細(xì)胞而不是肌上皮細(xì)胞. 在HE切片中，

16、本組無(wú)一例能明確分辨出基底細(xì)胞是否完全缺失，其中一例轉(zhuǎn)移至恥骨聯(lián)合上緣的PDA實(shí)體癌，鏡下觀察認(rèn)為腫瘤癌巢周圍“基底細(xì)胞”明確存在且較完整，但34E12和P63均陰性，可見(jiàn)在前列腺癌診斷中，尤其在HE切片中，應(yīng)當(dāng)謹(jǐn)慎應(yīng)用基底細(xì)胞缺失這一關(guān)鍵性診斷指標(biāo)，在HE切片中觀察到基底樣細(xì)胞時(shí)，應(yīng)采用免疫組化證實(shí). 34E12和P63是目前已廣泛應(yīng)用的兩種基底細(xì)胞標(biāo)記，應(yīng)用其辨認(rèn)基底細(xì)胞比肉眼光鏡觀察準(zhǔn)確得多. 34E12定位于基底細(xì)胞的胞膜和胞質(zhì). 但是，34E12 在前列腺良性增生、萎縮、腺病和不典型增生中可有假陰性1. 因此，單獨(dú)采用34E12標(biāo)記基底細(xì)胞有一定局限性，34E12只能作為前列腺癌診斷

17、中的一個(gè)重要的輔助指標(biāo)2-3. P63蛋白選擇性地表達(dá)于基底細(xì)胞胞核中,而在分泌腺細(xì)胞和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中不表達(dá). Shah等4比較基底細(xì)胞對(duì)34E12和p63的特異性,發(fā)現(xiàn)p63 比34E12靈敏度更高,在復(fù)雜病例中更有診斷優(yōu)勢(shì). 二者聯(lián)合應(yīng)用可減少假陰性,可進(jìn)一步提高檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性. 基底細(xì)胞標(biāo)記對(duì)前列腺癌來(lái)說(shuō)是一種陰性標(biāo)記抗體,有時(shí)抗體質(zhì)量、標(biāo)記技術(shù)和標(biāo)本處理等方面的問(wèn)題會(huì)造成假陰性結(jié)果. 如果能聯(lián)合使用前列腺癌的陽(yáng)性標(biāo)記抗體，則更有利于明確診斷. P504S 是目前公認(rèn)的前列腺癌的陽(yáng)性標(biāo)記抗體，它在良性前列腺上皮中低表達(dá),而在前列腺癌的上皮內(nèi)高表達(dá). 因此P504S 和34E12、p6

18、3 都已成為鑒別前列腺良惡性病變的重要工具. 如果結(jié)構(gòu)異常的腺體中出現(xiàn)大核仁,免疫標(biāo)記證實(shí)這些腺上皮細(xì)胞表達(dá)P504S，腺體周圍的基底細(xì)胞不表達(dá)34E12和p63,癌的診斷幾乎可以肯定. 本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合應(yīng)用該三種抗體，對(duì)35例前列腺導(dǎo)管腺癌進(jìn)行標(biāo)記，發(fā)現(xiàn)癌巢周圍，37.2%（13/35）的病例大于80%的基底細(xì)胞存在，8.6%（3/35）的病例10%80%的基底細(xì)胞存在. 這提示在前列腺導(dǎo)管腺癌中，基底細(xì)胞并不是完全缺失，而且殘存的比率較高,基底細(xì)胞缺失并非診斷前列腺導(dǎo)管腺癌的必備條件，應(yīng)引起在病理診斷中的注意. 本實(shí)驗(yàn)聯(lián)合應(yīng)用P504S 和34E12，p63標(biāo)記前列腺導(dǎo)管腺癌這一特殊類型癌,發(fā)現(xiàn)該類腫瘤中基底細(xì)胞殘存比率較高. 尤其是在前列腺穿刺的小組織中，如果發(fā)現(xiàn)一些可疑為癌的篩狀結(jié)構(gòu)、裂隙狀結(jié)構(gòu)、腎小球樣結(jié)構(gòu)時(shí)，應(yīng)該考慮到使用這三種抗體進(jìn)行標(biāo)記. 但是值得注意的是，在這些小標(biāo)本中，若觀察到基底細(xì)胞大部分殘存，也不應(yīng)該排除前列腺癌的診斷. 正如蔣智名等5的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有30%的前列腺癌穿刺組織中找不到核仁一樣. 另外我們發(fā)現(xiàn)