細(xì)菌性陰道病聯(lián)合檢測技術(shù)的推廣應(yīng)用課件

細(xì)菌性陰道病及其實(shí)驗(yàn)室檢測湖南省人民醫(yī)院曹友德內(nèi)容提綱

細(xì)菌性陰道病的概念細(xì)菌性陰道病與微生態(tài)平衡細(xì)菌性陰道病的影響細(xì)菌性陰道病實(shí)驗(yàn)室檢查細(xì)菌性陰道病聯(lián)合檢測技術(shù)細(xì)菌性陰道病的治療

細(xì)菌性陰道病的概念

細(xì)菌性陰道?。╞acterialvaginosisBV）是婦科常見病、多發(fā)病。細(xì)菌性陰道病以往曾有過許多名稱，如嗜血桿菌性陰道炎、棒狀桿菌性陰道炎、加德納菌性陰道炎及非特異性陰道炎等。直到1984年在瑞典的專題國際會(huì)議上才正式命名為細(xì)菌性陰道病。細(xì)菌性陰道病名稱的界定細(xì)菌性：陰道內(nèi)存在大量細(xì)菌生長繁殖，但無法確定引起B(yǎng)V的特異性細(xì)菌。陰道病：陰道粘膜無炎癥性表現(xiàn)，故稱“陰道病”，而不稱“陰道炎”。

BV的發(fā)病率高，在陰道感染性疾病中，細(xì)菌性陰道病約占50%~60%，念珠藥陰道炎占20%~30%，滴蟲性陰道炎占5%~10%，因此，細(xì)菌性陰道病是婦科臨床最常見的陰道感染。

細(xì)菌性陰道病與微生態(tài)平衡微生態(tài)學(xué)的基本概念微生態(tài)學(xué)與微生物學(xué)均研究微生物前者研究非致病的微生物，而后者研究致病的微生物微生態(tài)學(xué)是研究人體正常微生物（MMT）群，或稱生理性微生物的結(jié)構(gòu)功能及其與宿主相互關(guān)系健康婦女陰道微生物群中常住菌除乳酸桿菌外，還有葡萄球菌、大腸桿菌、棒狀桿菌、B族鏈球菌、糞鏈球菌、支原體、消化球菌及類桿菌等。正常菌群中厭氧菌與需氧菌之比為5：1。

正常的陰道菌群及微生態(tài)平衡正常陰道內(nèi)的微生物群主要有細(xì)菌、真菌、原蟲及病毒等。菌群的組成菌中兼性厭氧乳桿菌是正常陰道的優(yōu)勢菌。陰道正常菌群在陰道壁的粘附陰道粘膜上皮細(xì)胞乳桿菌過路菌條件致病菌婦女陰道主要正常菌群乳桿菌類桿菌表皮葡球菌糞鏈球菌大腸桿菌梭狀桿菌白色念珠菌棒狀桿菌原籍菌其它菌群：共生、拮抗消化球菌婦女陰道常見過路微生物金葡菌腸桿菌丙酸桿菌消化鏈球菌韋榮球菌加德納菌滴蟲乳酸桿菌是陰道的原籍菌在陰道的正常菌群中其數(shù)量可達(dá)8×107個(gè)/ml，從正常婦女陰道內(nèi)可分離出16種左右乳桿菌，其中有幾種能產(chǎn)生H2O2的乳桿菌（如卷曲乳桿菌、詹森乳桿菌以及發(fā)酵乳桿菌等），在乳桿菌中占絕對優(yōu)勢，而其他不產(chǎn)H2O2的乳桿菌只占10%左右。乳桿菌——陰道原籍菌在正常菌群中數(shù)量最多,可達(dá)8x107/ml,功能最重要

陰道內(nèi)各種微生物群之間,相互作用、相互制約、相互依賴，保持微生態(tài)平衡。一旦打破這種平衡，就會(huì)導(dǎo)致疾病的發(fā)生。BV時(shí)的陰道微生態(tài)改變

乳桿菌不僅數(shù)量上減少，特別是產(chǎn)H2O2的乳桿菌減少加德納菌及厭氧菌增加厭氧菌可增加上千倍，厭氧菌與需氧菌之比由原來的5∶1，增加到100∶1至1000∶1。

陰道微生態(tài)失調(diào)致病菌條件致病菌陰道乳桿菌在數(shù)量上處于絕對優(yōu)勢地位，是維持陰道微生態(tài)平衡的前提和基礎(chǔ)乳桿菌乳桿菌微生態(tài)平衡微生態(tài)失調(diào)內(nèi)源性感染外源性感染產(chǎn)H2O2乳桿菌的生理作用產(chǎn)生乳酸，降低陰道PH值，抑制致病菌的生長繁殖產(chǎn)生H2O2調(diào)節(jié)陰道微生態(tài)平衡，防治外籍菌侵入引起的感染粘附抑制影響陰道微生態(tài)環(huán)境的因素影響因素很多；包括內(nèi)分泌變化（月經(jīng)、妊娠、絕經(jīng)）、性伴侶、濫用抗生素、宮內(nèi)節(jié)育器、陰道沖洗以及不潔的性生活等。細(xì)菌性陰道?。˙V）發(fā)病機(jī)理致病因素乳桿菌數(shù)量減少功能減退產(chǎn)H2O2產(chǎn)乳酸加德納菌/類桿菌等數(shù)量陰道內(nèi)源性感染BV陰道菌群失調(diào)細(xì)菌性陰道病的臨床特征陰道黏膜充血不明顯，病理特征無炎癥病變。臨床表現(xiàn)為牛奶樣白帶，檢查無滴蟲，真菌或淋菌。

細(xì)菌性陰道病的影響B(tài)V對妊娠婦女的影響妊娠期BV可導(dǎo)致絨毛膜羊膜炎、胎膜早破及早產(chǎn)，產(chǎn)褥感染也比正常人群高。

BV時(shí)，一些厭氧藥可產(chǎn)生脂酶及蛋白酶，消化胎膜上的脂質(zhì)及蛋白質(zhì)，使胎膜強(qiáng)度減弱而易發(fā)生胎膜早破。BV時(shí)某些厭氧菌，可產(chǎn)生大量磷脂酶A2，誘導(dǎo)子宮局部組織細(xì)胞膜磷脂分解，使花生四烯酸增加，從而使前列腺素合成增加，刺激子宮收縮而誘發(fā)早產(chǎn)。

BV對非孕婦女的影響發(fā)生宮頸上非典型增生的危險(xiǎn)性增加宮內(nèi)膜炎、附件炎的發(fā)生增加全子宮切除，術(shù)后陰道殘端感染增加

細(xì)菌性陰道病實(shí)驗(yàn)室檢查陰道分泌物檢查陰道分泌物是女性生殖系統(tǒng)分泌的液體,主要由陰道粘膜、宮頸腺體、前庭大腺及子宮內(nèi)膜的分泌物混合而成，俗稱“白帶”。檢查目的：用于檢查生殖系統(tǒng)病變、感染、滴蟲、念珠菌，同時(shí)還可確定陰道清潔度。

白帶常規(guī)檢查

一般性狀檢查

pH值陰道分泌物清潔度

霉菌與滴蟲

一般性狀檢查正常白帶:白帶異?？杀憩F(xiàn)為色、質(zhì)、量的改變：1.大量無色透明粘稠白帶常見于應(yīng)用雌激素藥物后及卵巢顆粒細(xì)胞瘤時(shí)。

2.膿性白帶

3.豆腐渣樣白帶

4.血性白帶5.黃色水樣白帶pH值檢查正常pH值為4.5左右。陰道內(nèi)呈弱酸性，這是陰道的自凈作用，可以防止致病菌繁殖。如果患有滴蟲性或細(xì)菌性陰道炎時(shí)，pH值上升，可大于5～6。

白帶清潔度檢查

白帶涂片鏡檢，根據(jù)所見上皮細(xì)胞、白細(xì)胞（或膿細(xì)胞）陰道桿菌與雜菌的數(shù)量進(jìn)行判斷，并劃分清潔度：Ⅰ、Ⅱ度為正常，Ⅲ、Ⅳ度為不清潔。

判斷標(biāo)準(zhǔn)清潔度桿菌上皮細(xì)胞白細(xì)胞雜菌意義Ⅰ++++++++0~5-正常Ⅱ++++5~15-正常Ⅲ--15~30++提示炎癥Ⅳ--﹥30++++嚴(yán)重陰道炎霉菌和滴蟲檢查白帶經(jīng)過處理后在顯微鏡下可以發(fā)現(xiàn)有無滴蟲或霉菌，如存在滴蟲或霉菌均用“＋”來表示。這一符號只說明你已經(jīng)感染了滴蟲或霉菌，并不說明感染的嚴(yán)重程度。其他實(shí)驗(yàn)室檢查淋病奈瑟菌其他細(xì)菌檢查支原體和衣原體檢查病毒檢查：（單純皰疹病毒、人巨細(xì)胞病毒、人乳頭狀病毒）病理檢查

細(xì)菌性陰道病的診斷標(biāo)準(zhǔn)具備下列4條中3條者即可診斷為細(xì)菌性陰道病。

1.陰道分泌物為均質(zhì)稀薄的白帶。

2.陰道分泌物pH>4.5。

3.氨臭味實(shí)驗(yàn)陽性。

4.線索細(xì)胞陽性。細(xì)菌性陰道病的實(shí)驗(yàn)室檢查

陰道分泌物pH檢查陰道分泌物胺試驗(yàn)陰道分泌物找線索細(xì)胞陰道分泌物唾液酸酶試驗(yàn)陰道分泌物脯氨酸氨肽酶試驗(yàn)胺試驗(yàn)

檢查細(xì)菌性陰道病的方法:白帶加一滴10%氫氧化鉀，如發(fā)出魚腥味,即胺試驗(yàn)陽性線索細(xì)胞線索細(xì)胞：線索細(xì)胞是指細(xì)菌性陰道炎患者有許多桿菌凝聚在陰道上皮細(xì)胞邊緣，在懸滴涂片中見到陰道上皮細(xì)胞邊緣呈顆粒狀或點(diǎn)畫狀致使模糊不清者即為線索細(xì)胞，它是細(xì)菌性陰道病的最敏感最特異的體征。不同染色條件下線索細(xì)胞形態(tài)唾液酸酶試驗(yàn)唾液酸酶是引起B(yǎng)V加德納菌分泌的一種特異性胞外酶，正常婦女陰道中一般無此酶，細(xì)菌性陰道病時(shí)此酶可排泌至陰道分泌物中。BV患者唾液酸酶檢測陽性。脯氨酸氨肽酶試驗(yàn)

應(yīng)用ELISA方法檢測BV婦女分泌物中高于正常婦女的脯氨酸氨肽酶活性，檢測產(chǎn)物為β-naphthylamin

傳統(tǒng)診斷BV的Amsel’s金標(biāo)準(zhǔn)易受到顯微鏡質(zhì)量、樣本采集情況以及操作者經(jīng)驗(yàn)等諸多因素影響。

細(xì)菌性陰道病的聯(lián)合檢測術(shù)BV聯(lián)合檢測技術(shù)該項(xiàng)目技術(shù)包括過氧化（H2O2)（陰道乳酸桿菌的標(biāo)志物）、唾液酸苷酶（加德納菌、游動(dòng)彎曲桿菌等BV致病菌的標(biāo)志物）和白細(xì)胞酯酶LE（炎性細(xì)胞的標(biāo)志物）三項(xiàng)指標(biāo)。不僅能診斷BV感染，而且能反應(yīng)正常陰道菌群指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)原理（1）

過氧化氫濃度測定：陰道液中過氧化氫經(jīng)過氧化物酶作用，釋放出新生態(tài)氧，后者在4氨基安替吡啉存在下，使3,5-二氯-二羥基苯磺酸氧化呈紅色，在反應(yīng)系統(tǒng)中加入3,5-二氯-二羥基苯磺酸的拮抗物，當(dāng)標(biāo)本中H2O2濃度≥2μmol/L，反應(yīng)結(jié)果呈紅色，呈色深度與H2O2濃度成正比。實(shí)驗(yàn)原理（2）唾液酸苷酶活性測定：唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神經(jīng)氨酸，釋放出溴吲哚基，后者遇重氮鹽起反應(yīng)呈現(xiàn)紅色或紫色，呈色深度與唾液酸苷酶活性成正比。實(shí)驗(yàn)原理（3）白細(xì)胞酯酶測定：白細(xì)胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽，釋放出溴吲哚基，后者在氧存在的條件下呈藍(lán)色，呈色深度與白細(xì)胞酯酶活性成正比。實(shí)驗(yàn)操作

將陰道分泌物中加入400μl稀釋液,反復(fù)擠壓棉拭子,使樣本溢出。在反應(yīng)裝置中的三個(gè)孔中各加1滴陰道分泌物,之后在中間唾液酸酶反應(yīng)孔中再加1滴顯色液,置37℃恒溫反應(yīng)。15min后觀察反應(yīng)孔內(nèi)的結(jié)果。結(jié)果觀察過氧化氫濃度(過氧化物酶法):顯紅色或紫色為H2O2濃度>2μmol/L(正常),顯藍(lán)色為H2O2濃度<2μmol/L(異常)。唾液酸苷酶(5溴-4氯-3吲哚唾液酸苷鹽法):不顯色為正常,顯紅色或紫色為陽性。白細(xì)胞酯酶(5溴-4氯-3吲哚乙酸鹽法):不顯色為正常,顯藍(lán)色或綠色為陽性。

性能指標(biāo)

重復(fù)性：批內(nèi)重復(fù)性：≥90%、批間重復(fù)性：≥90%。低檢出量(靈敏度):過氧化氫≥2μmol/L、唾液酸苷酶≥7單位/ml、白細(xì)胞酯酶≥9單位/ml，檢出符合率≥90%。準(zhǔn)確性：陰性參考品符合率≥90%、陽性參考品符合率≥90%。試劑保存：2～8℃密封避光保存有效期在一年以上。項(xiàng)目推廣需要條件

一名或數(shù)名具有臨床檢驗(yàn)或醫(yī)學(xué)背景的初級以上技術(shù)人員。有一間相對固定的實(shí)驗(yàn)場地。無需特殊的儀器設(shè)備條件細(xì)菌性陰道病（ＢＶ）的聯(lián)合檢測技術(shù)與傳統(tǒng)的常規(guī)檢測等多種方法相結(jié)，極大地提高了細(xì)菌性陰道病的檢出率和準(zhǔn)確性?？蓪ε陨车牢⑸鷳B(tài)環(huán)境、分泌物清潔度和細(xì)菌性陰道病致病菌狀況、早期宮頸炎進(jìn)行全面診斷。具體操作：臨床實(shí)踐操作實(shí)習(xí)BV的治療常選用抗厭氧菌的藥物，如甲硝唑類藥物及克林霉素等

近來由于BV的發(fā)生與陰道微生態(tài)失衡有關(guān)，而提出采用微生態(tài)制劑來進(jìn)行治療，如乳桿菌活菌制劑全身用藥以下藥物可供選用

克林霉素300mg，每日兩次，共7天；甲硝唑400mg每日兩次，共7日替硝唑500mg每日兩次，共6日奧硝唑500mg每日兩次，共6日（替硝唑?yàn)榧紫踹虻牡诙a(chǎn)品，臭硝唑?yàn)榧紫踹虻牡谌?/p>