MSI微衛(wèi)星不穩(wěn)定性概要課件

基本概念

Microsatellites是指分布在人類基因里的簡單重復(fù)序列，包含單核苷酸，雙核苷酸，或高位核苷酸的重復(fù)（小于10個），如（A）n或（CA）n。重復(fù)次數(shù)為10-50次。Mismatchrepair

MMR系統(tǒng)是監(jiān)督和糾正微衛(wèi)星中產(chǎn)生的錯誤，具有高度保守性。

MLH1，MSH2，MSH3，MSH6，PMS2是該系統(tǒng)中主要的蛋白，形成異二聚體相互作用。

檢測到錯配時，MSH2與MSH6或MSH3相結(jié)合，MLH1與PMS2，PMS1或MLH3相結(jié)合

基因的突變累積到DNA發(fā)生錯誤，導(dǎo)致了MSI。

可發(fā)生于各種腫瘤，結(jié)直腸癌，胃癌，子宮內(nèi)膜，卵巢癌，腦膠質(zhì)瘤，淋巴瘤。

最早發(fā)現(xiàn)于結(jié)直腸癌，MSI顯型持續(xù)呈現(xiàn)MMR缺陷的特征。觀察到MLH1，MSH2，MSH6和PMS2的突變在結(jié)直腸癌變傾向中起到一定作用，如Lynch綜合征。流行病學(xué)

MSI存在于15%的CRC，大部分是散發(fā)的和由于MLH1啟動子的超甲基化導(dǎo)致。其中20%（總體CRC的2-4%）基于Lynch綜合征

CRC的2-3%是由于錯配修復(fù)基因（MLH1，MSH2，MSH6和PMS2）中的一個胚層突變導(dǎo)致

II期CRC

MSI

20%，III期

12%，IV期低于4%

美國黑人20-45%，埃及人37%（小樣本回顧性）

MSI腫瘤的年齡分布呈U型分布，散發(fā)MSI病例一般在老年（大于70歲），而家族性的更年輕一些（小于50歲）CRC原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶的MSI

研究尚未發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)移灶有MSI-H，而原發(fā)灶沒有的。說明MSI發(fā)生在腫瘤發(fā)生的比較早期的階段MSI的檢測

PCR檢測

Bethesda標(biāo)準(zhǔn)，包括5個定位：2個單核苷酸（BAT

25,BAT26),3個雙核苷酸（D5S346，D2S123，D17S250）后來延伸至10個（BAT40，myb,TGFβRII,

IGF2R,BAX)

最敏感的BAT40，BAT26，BAT25，myb（100.94.94.88%）

如何判斷MSI

MSI-H：2個或更多的位點(diǎn)不穩(wěn)定性（大于30%的大標(biāo)準(zhǔn)）

MSI-L:

1個位點(diǎn)不穩(wěn)定性（10-30%的大標(biāo)準(zhǔn)）

MSS：沒有位點(diǎn)不穩(wěn)定（小于10%）

MMR蛋白的免疫組化MLH1占90%

檢測方法比較IHC：

MMR-deficient(dMMR)MMR-proficient(pMMR)PCR：MSI-H(微衛(wèi)星高度不穩(wěn)定)MSI-L(微衛(wèi)星低度不穩(wěn)定)MSS(微衛(wèi)星穩(wěn)定)

MMR與MSI一致率>90%dMMR=MSI-HpMMR=MSI-L/MSSMSI-H

樣病理特征MSI-H結(jié)腸癌具有相類似的臨床病理特征腫瘤內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤（每個高倍視野超過3

個淋巴細(xì)胞）瘤周Crohn樣淋巴細(xì)胞浸潤（腫瘤邊緣淋巴組織/濾泡形成）粘液腺癌/

印戒細(xì)胞癌分化（高級別組織學(xué)分化）髓樣生長方式（預(yù)后好）右側(cè)結(jié)腸多見癌細(xì)胞分化差（高級別）是預(yù)后不良的特征，但在MSI-H

特性腫瘤中需除外，

在依據(jù)組織學(xué)分化的高危因素來判斷Ⅱ期結(jié)腸癌是否需要輔助化療時，應(yīng)除外MSI-H

群體。MSI與預(yù)后的相關(guān)性n=607MSI-H17%OSGryfeetal.多中心，<50歲2000年2005年HR=0.42P<0.0132個

研究meta不能從輔助5-Fu中獲益PopatSBenattin=7642

16.71%

HR=0.652005年

3個中心n=1263

20.27%HR=0.40獲5-Fu不

益II期

21%PETACC-3HR=0.27P=0.0094HR=0.59P=0.0162009年ASCO86/409n=1321EORTC40993SAKK60-00RothIII期

11%104/9125-RFSP=0.03II期

P=0.01Merok2012年n=80514%MSI與5-FU化療的相關(guān)性研究方案n％（Ⅱ期）30%%(dMMR)14%784852INT

0035874651GIVIOFFCDNCIC5FU/LEV5FU/LEV5FU/LV5FU/LV5FU/LV5FU/LV1172156650%18%19%12%183154292102752%16%66%19%61%15%Total52%16%SargentDJ,etal.2008ASCO,oralpresentationDFS:dMMRvs.pMMRTreated

(N=512)Untreated

(N=515)10090807060504030100908070605040N

5

yr

DFSN

5

yr

DFS30dMMR86

70%

HR:0.79(0.49-pMMR426

67%

1.25)p=0.3020

dMMR79

80%

HR:0.51(0.29-0.89)20100pMMR

436

56%

p=0.009100012345012345YearsYearsMMR狀態(tài)是結(jié)腸癌重要的預(yù)后因素DFSindMMRpatientsStage

II

(N=102)Stage

III

(N=63)100908070605040302010010090807060504030N

5

yr

DFSN

5

yr

DFSUntreated55

87%

HR:2.80(0.98-8.97)Treated

47

72%

p=0.05Untreated

24

62%20100Treated39

67%012345012345YearsYearsII期結(jié)腸癌，dMMR患者5-FU輔助化療帶來不利影響III期結(jié)腸癌，dMMR患者5-FU輔助化療不獲益DFSinpMMRpatientsStage

II

(N=428)Stage

III

(N=434)100908070605040302010010090807060504030201005

yr

DFS5

yr

DFSUntreated

72%Treated

77%Untreated

41%Treated

58%HR:0.84(0.57-1.24)p=0.3801234012345YearsYearsII期結(jié)腸癌，pMMR患者5-FU輔助化療不獲益III期結(jié)腸癌，pMMR患者5-FU輔助化療改善5年DFSMSI與L-OHP和IRI化療的相關(guān)性目前，MSI與L-OHP和IRI化療的相關(guān)性尚無定論。由于許多研究的MSI-H的樣本量不足，而小樣本量的數(shù)據(jù)難以說明問題。關(guān)于林奇綜合征阿姆斯特丹II

“

3-2-1-0標(biāo)準(zhǔn)”，即至少3個家系成員有HNPCC相關(guān)腫瘤（結(jié)直腸癌，子宮內(nèi)膜癌，小腸癌，輸尿管癌或腎盂癌），其中1人應(yīng)為其他2人的一級親屬；至少連續(xù)2代受累；至少1人診斷年齡低于50歲；應(yīng)除外家族性腺瘤性息肉?。‵AP）

hMLH1和hMSH2突變約占檢出的種系突變的90％，hMSH6突變約占7％-10％，hPMS2突變占不到5％BethesdaGuidelines(NCI)

第一版，1996

1.有符合Amsterdam標(biāo)準(zhǔn)的家族史2.無論任何年齡，出現(xiàn)多發(fā)同時或異時林奇綜合征相關(guān)性惡性腫瘤3.診斷為結(jié)直腸癌，一級親屬在45歲之前在前診斷為林奇綜合征相關(guān)性腫瘤或40歲以前診斷為腺瘤4.45歲以前診斷為結(jié)直腸癌或子宮內(nèi)膜癌5.45歲以前診斷為病理組織為未分化的右半結(jié)腸癌6.45歲以前診斷為印戒細(xì)胞的結(jié)直腸癌7.40歲以前診斷為腺瘤

修訂版，2004

1.50歲以前診斷為結(jié)直腸癌2.無論任何年齡，出現(xiàn)多發(fā)同時或異時林奇綜合征相關(guān)性惡性腫瘤3.60歲以前診斷為MSI-H的結(jié)直腸癌4.診斷為結(jié)直腸癌，一個或多個一級親屬有林奇綜合征的腫瘤，其中1個診斷小于50歲5.無論年齡，診斷為結(jié)直腸癌，2個及以上一級或二級親屬有林奇綜合征相關(guān)的Bethesdavs.Amsterdam預(yù)測MSI的標(biāo)準(zhǔn)敏感度

特異度AmsterdamAmsterdamⅡ

46Bethesda

9027949060微衛(wèi)星不穩(wěn)定性檢測分析不需對MLH1和MSH2進(jìn)行基因檢測

對MLH1和MSH2進(jìn)行基因檢測

MLH1或MSH2檢測的敏感性80-91%，特異性90%

MSH6或PMS2的敏感性為55-77%，特異性90%

BRAF

V600E突變與MLH1啟動子甲基化有關(guān)，可以排除林奇綜合征

免疫組化的敏感性83%，特異性90%

符合阿姆斯特丹標(biāo)準(zhǔn)但MMR無突變的患者被命名為家族性結(jié)直腸癌X型JAMA,October17,2012—Vol308,No.15敏感性特異性診斷產(chǎn)出率通用腫瘤測試100%93.0%2.2%選擇性策略Bethesda95.1%87.8%85.4%95.5%97.5%96.7%2.1%2.0%1.9%耶路撒冷建議u林奇綜合征易發(fā)生多處原發(fā)腫瘤，54-61%會發(fā)生第二種原發(fā)腫瘤，15-23%會發(fā)生三種或更多的原發(fā)腫瘤。u如果林奇綜合征患者在發(fā)現(xiàn)第一處大腸癌時未進(jìn)行結(jié)腸次全切除術(shù)或全切術(shù)，那么其在10年內(nèi)發(fā)生另一處原發(fā)性大腸癌的幾率大概為25-30％篩查建議

對于診斷為林奇綜合征(MMR基因突變陽性)患者及親屬,應(yīng)更早給予更密集的結(jié)腸鏡檢查

對未發(fā)生結(jié)腸癌的基因突變攜帶者，應(yīng)從20歲～25歲起（或在家族中最早確診結(jié)腸癌者診斷年齡前10年）進(jìn)行結(jié)腸鏡檢查，每1～2年1次，