發(fā)酵工業(yè)原料及其處理

發(fā)酵工業(yè)原料及其處理第一頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五培養(yǎng)基培養(yǎng)基是指人工配制的供微生物或動植物細胞生長、繁殖、代謝和合成各種產(chǎn)物的營養(yǎng)物質(zhì)和原料。同時，培養(yǎng)基也為微生物等提供除營養(yǎng)外的其它生長所必須的環(huán)境條件。培養(yǎng)基的組成和配比對菌體的生長、產(chǎn)物的合成、提取工藝的選擇、產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量都有重要影響。第二頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五發(fā)酵工業(yè)原料的種類和成分淀粉水解糖的制備培養(yǎng)基的設(shè)計和優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌第三頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五第一節(jié)發(fā)酵工業(yè)原料的種類和成分培養(yǎng)基的類型和用途發(fā)酵培養(yǎng)基中各種成分的定量工業(yè)上常用作碳源的淀粉質(zhì)原料工業(yè)上常用作氮源的蛋白質(zhì)類原料發(fā)酵培養(yǎng)基中的無機鹽和生長因子前體物質(zhì)和促進劑、抑制劑第四頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五一、培養(yǎng)基的類型和用途按來源分按培養(yǎng)基外觀的物理狀態(tài)分按功能分見p45第五頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五1.按來源分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基第六頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五2.按培養(yǎng)基外觀的物理狀態(tài)分固體培養(yǎng)基適用于菌種分離、保藏、鑒定、雜菌檢驗等，也廣泛應(yīng)用于真菌的生產(chǎn)，如霉菌、香菇、白木耳等。常用組分：麩皮、大米、小米、木屑、瓊脂等。半固體培養(yǎng)基即在液體培養(yǎng)基中加入0.2～0.8%的瓊脂。主要用于觀察微生物的運動特征，噬菌體效價等。液體培養(yǎng)基適用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及基礎(chǔ)理論的實驗室研究工作。第七頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五3、按功能分孢子培養(yǎng)基：供菌種繁殖孢子的固體培養(yǎng)基。使菌體生長迅速，產(chǎn)生較多優(yōu)質(zhì)的孢子，并不易引起菌種變異。種子培養(yǎng)基：供孢子發(fā)芽、菌體繁殖的培養(yǎng)基。增加細胞數(shù)量，并培養(yǎng)出強壯、活力強的細胞。發(fā)酵培養(yǎng)基：供菌種生長繁殖和合成產(chǎn)物的培養(yǎng)基。既能使菌體生長迅速，又能使菌體能迅速合成大量產(chǎn)物。見p46和p50第八頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五（1）孢子培養(yǎng)基常用的有麩皮培養(yǎng)基、小米培養(yǎng)基、大米培養(yǎng)基、玉米培養(yǎng)基和肉湯培養(yǎng)基等。碳源、氮源含量不要太豐富，特別是有機氮源。含有生長素和微量元素，有利于孢子大量形成。注意培養(yǎng)基的pH值和濕度。第九頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五（2）種子培養(yǎng)基營養(yǎng)相對豐富、完全，氮源和維生素含量要高些。要能維持穩(wěn)定的pH。最后一級種子培養(yǎng)基的成分應(yīng)該能接近發(fā)酵培養(yǎng)基。第十頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五二、發(fā)酵培養(yǎng)基中各種成分的定量組成應(yīng)豐富、完全。要考慮適當(dāng)?shù)奶嫉?，加緩沖劑穩(wěn)定pH值。除有菌體生長所需的元素和化合物外，還要有產(chǎn)物合成所需的元素、前體和促進劑等?？梢钥紤]采用分批補料方式。第十一頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五1.碳源功能提供合成細胞結(jié)構(gòu)物質(zhì)所需碳元素。提供目的產(chǎn)物中的碳。合成產(chǎn)物的能源。常用碳源淀粉（starch）、淀粉水解糖（starch

sugar）、糖蜜（molasses）、有機酸（organic

acid）、低碳醇、脂質(zhì)、烴類等。第十二頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五2.氮源功能提供合成細胞結(jié)構(gòu)物質(zhì)所需氮元素。提供目的產(chǎn)物中的氮。常用碳源有機氮源：黃豆餅粉、花生餅粉、棉籽餅粉、玉米漿、蛋白胨、酵母粉、魚粉、蠶蛹粉、發(fā)酵菌絲體、酒糟等。無機氮源：氨水、液氨、尿素、硝酸鹽、銨鹽等。第十三頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五3.無機鹽對菌體生長和產(chǎn)物合成都十分重要。不同發(fā)酵對不同種類無機鹽的需求不同。第十四頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五4.生長因子發(fā)酵培養(yǎng)基中必不可少，但在某些發(fā)酵中生長因子的量要控制適當(dāng)。第十五頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五5.前體某些化合物加入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，能直接在生物合成過程中結(jié)合到產(chǎn)物分子中去，而自身的結(jié)構(gòu)并未發(fā)生太大變化，卻能提高產(chǎn)物的產(chǎn)量，這類小分子物質(zhì)稱為前體。來源：有的是菌體本身能夠合成的，如青霉素前體纈氨酸和半胱氨酸；有的菌體不能合成或合成很少，需要從外界加入，如青霉素V前體苯氧乙酸。前體使用的濃度要適當(dāng)，一般采取流加方式。第十六頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五6.促進劑既不是營養(yǎng)物質(zhì)，又不是前體，但這類物質(zhì)的加入能提高產(chǎn)物產(chǎn)量，這類物質(zhì)稱為促進劑。功能：影響微生物的正常代謝；促進中間代謝產(chǎn)物的積累；提高次級代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量。促進劑專一性很強，用量極微，效果顯著。需要通過試驗選擇品種，確定用量。第十七頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五7.抑制劑發(fā)酵培養(yǎng)基中加入抑制劑，可以抑制某些代謝途徑的進行，同時刺激另一代謝途徑，以致改變微生物的代謝途徑，從而獲得人們所需的某種產(chǎn)物或使正常代謝的某一代謝中間物積累。抑制劑專一性很強，用量極微，效果顯著。需要通過試驗選擇品種，確定用量。第十八頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五三、工業(yè)上常用作碳源的淀粉質(zhì)原料淀粉淀粉質(zhì)原料第十九頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五1.淀粉來源于各種植物組織。直鏈淀粉：葡萄糖經(jīng)α-1,4糖苷鍵脫水縮聚而成螺旋形不分支長鏈，聚合度100~6000，相對分子量1×105。熱水溶解：形成黏度較低的不穩(wěn)定膠體溶液。與碘反應(yīng)：呈藍色。支鏈淀粉：直鏈部分的葡萄糖以α-1,4糖苷鍵連接，分支點上的葡萄糖以α-1,6糖苷鍵連接，聚合度1000~30000，相對分子量6×106。熱水溶解：形成糊狀物。與碘反應(yīng)：呈紅到紫紅色。第二十頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五2.淀粉質(zhì)原料工業(yè)淀粉：以谷類、薯類等農(nóng)產(chǎn)品為原料加工而成，白色或微帶淺黃色陰影的粉末。常用的有玉米淀粉、小麥淀粉、甘薯淀粉、馬鈴薯淀粉等。谷類：包括大米、高粱、大麥、小麥等。薯類：甘薯、馬鈴薯、木薯為主。第二十一頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五李江華，無錫輕工大學(xué)學(xué)報，2004(1.5g麩皮)第二十二頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五嗜堿芽孢桿菌(AC-2)中碳源對堿性纖維素酶分泌的影響結(jié)果：各種碳源相差不大推論：該菌種的堿性纖維素酶為組成型蘇勤，林業(yè)化學(xué)與工業(yè)，2004第二十三頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五四、工業(yè)上常用作氮源的蛋白質(zhì)類原料有機氮源無機氮源第二十四頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五1.有機氮源黃豆餅粉：廣泛用于抗生素發(fā)酵。全脂黃豆粉：油脂＞18%。低脂黃豆粉：油脂＜9%。脫脂黃豆粉：油脂＜2%。主要成分：蛋白質(zhì)：脫脂＞低脂＞全脂；油脂：脫脂＜低脂＜全脂；灰分：脫脂＞低脂＞全脂；水分：脫脂＜低脂＜全脂。第二十五頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五玉米漿是玉米淀粉生產(chǎn)中的副產(chǎn)物，是用亞硫酸浸泡玉米所得的浸泡液的濃縮物。其中固體物含量在50%以上。成分：含有豐富的氨基酸、還原糖、生物素等。較多的有機酸，如乳酸，因此其pH在4左右。硫、磷、微量元素等。第二十六頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五2.無機氮源特點：微生物對它們的吸收利用快。無機氮源的迅速利用常會引起pH的變化。使用意義：滿足菌體生長。穩(wěn)定和調(diào)節(jié)發(fā)酵過程的pH。第二十七頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五無機氮源被菌體作為氮源利用后，培養(yǎng)液中就留下了酸性或堿性物質(zhì)。(NH4)2SO4

→2NH3+2H2SO4

NaNO3+4H2→NH3+2H2O+NaOH生理酸性物質(zhì)：經(jīng)微生物生理作用（代謝）后能形成酸性物質(zhì)的無機氮源叫生理酸性物質(zhì)，如硫酸銨。生理堿性物質(zhì)：若菌體代謝后能產(chǎn)生堿性物質(zhì)的則此種無機氮源稱為生理堿性物質(zhì)，如硝酸鈉。第二十八頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五氨水作用：易利用的氮源。調(diào)節(jié)pH值。使用方法：使用前應(yīng)進行過濾除菌。使用時要加強攪拌，防止局部過堿，并少量多次加入。第二十九頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五例：無機氮源對毛霉產(chǎn)蛋白酶的影響效果：硫酸銨>硝酸銨>硝酸鈉>尿素陳濤，中國釀造，2004第三十頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五五、發(fā)酵培養(yǎng)基中的無機鹽和生長因子1.磷酸鹽功能：磷是某些蛋白質(zhì)和核酸的組成成分；ADP、ATP是重要的能量傳遞物質(zhì)，參與一系列的代謝反應(yīng)；磷酸鹽有緩沖作用。微生物對磷的需要量一般為0.005~0.01mol/L。第三十一頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五黑曲霉NRRL-330生產(chǎn)α-淀粉酶，P對酶活的影響

pH酶活不加4.25120min加K2HPO4

5.4530min加KH2PO4

4.6275min第三十二頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五2.硫酸鎂功能：鎂是許多重要的酶的激活劑；硫為菌體合成含硫蛋白質(zhì)提供硫源。MgSO4·7H2O是發(fā)酵工業(yè)中常用的無機鹽。第三十三頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五3.鉀鹽微生物需鉀量一般約為0.1g/L（以K2SO4計）。當(dāng)培養(yǎng)基中磷鹽配用1g/L

K3PO4·3H2O時，同時提供了鉀，鉀濃度為0.38g/L；當(dāng)培養(yǎng)基中磷鹽配用1g/L

Na2HPO4·12H2O時，應(yīng)另外配用KCl

0.3~0.6g/L，鉀濃度為0.35~0.7g/L。第三十四頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五4、生長因子（生長素）從廣義上講，凡是微生物生長不可缺少的微量的有機物質(zhì)，如氨基酸、嘌呤、嘧啶、維生素等均稱生長因子。來源：有機氮源。第三十五頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五六、前體物質(zhì)和促進劑、抑制劑1.前體有些氨基酸、抗生素和核苷酸發(fā)酵中必須添加前體。產(chǎn)物前體產(chǎn)物前體青霉素G苯乙酸等維生素B12鈷化物青霉素O烯丙基-巰基乙酸絲氨酸甘氨酸青霉素V苯氧乙酸色氨酸吲哚、氨茴酸鏈霉素肌醇，精氨酸等蛋氨酸2-羥基-4-甲基硫代丁酸金霉素氯化物異亮氨酸D-蘇氨酸紅霉素丙酸、丙醇等蘇氨酸高絲氨酸灰黃霉素氯化物第三十六頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五

青霉素G：分子量356苯乙酸:分子量136第三十七頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五使用方法普遍采用流加方法。前體一般都有毒性。如苯乙酸，一般僅僅添加0.07%。前體相對價格較高，添加過多，容易引起揮發(fā)和氧化。流加也有利于提高前體的轉(zhuǎn)化率。第三十八頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五2.促進劑某些氨基酸、抗生素和酶制劑生產(chǎn)中添加促進劑。促進劑提高產(chǎn)量的機制還不完全清楚，其原因是多方面的：有些促進劑本身是酶的誘導(dǎo)物；有些促進劑是表面活性劑，可改善細胞的透性，增強氧的傳遞，從而促進酶的分泌與生產(chǎn)；也有人認(rèn)為表面活性劑對酶的表面失活有保護作用；有些促進劑可以沉淀或螯合有害的重金屬離子。第三十九頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五第四十頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五3.抑制劑有些抑制劑可抑制某些代謝途徑的進行，而使代謝向所需產(chǎn)物的途徑轉(zhuǎn)化，常用于抗生素和有機溶劑發(fā)酵。氯霉素、植酸、草酸等能抑制噬菌體的繁殖，可用于氨基酸發(fā)酵。第四十一頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五

RR1R2R3四環(huán)素(TC)HOHCH3H金霉素(CTC)ClOHCH3H土霉素(OTC)HOHCH3OH例：四環(huán)素生產(chǎn)中，加入溴化鈉，能抑制金霉素的形成，促進四環(huán)素的生成。第四十二頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五第二節(jié)淀粉水解糖的制備淀粉水解糖的制備方法水解糖液的質(zhì)量要求第四十三頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五一、淀粉水解糖的制備方法將淀粉水解為葡萄糖的過程稱為淀粉的糖化。所制得的糖液稱為淀粉水解糖。淀粉水解糖成分：主要是葡萄糖，少量的麥芽糖等復(fù)合二糖、低聚糖。原料中的雜質(zhì)（如蛋白質(zhì)、脂肪）及其分解產(chǎn)物即氨基酸、脂肪酸。淀粉水解糖廣泛應(yīng)用于氨基酸、抗生素、有機酸、多糖、甾體轉(zhuǎn)化等生產(chǎn)中。見P56第四十四頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五淀粉糖化的方法酸水解法（酸糖化法）：以酸（無機酸或有機酸）為催化劑，在高溫高壓下將淀粉水解為葡萄糖的方法。酶水解法（雙酶法）：利用液化酶和糖化酶將淀粉水解為葡萄糖的方法。液化：用液化酶使糊化淀粉水解為糊精及低聚糖。糖化：用糖化酶將糊精或低聚糖進一步水解為葡萄糖。酸酶結(jié)合水解法酸酶（水解）法：先以酸為催化劑將淀粉水解成糊精或低聚糖，再用糖化酶將其水解成葡萄糖。酶酸（水解）法：將淀粉乳先用α-淀粉酶液化到一定程度，再用酸水解成葡萄糖。見P56第四十五頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五不同糖化工藝所得糖液質(zhì)量比較項目酸解法酸酶法雙酶法DE值(%)909598葡萄糖(%)869397灰分(%)1.60.40.1蛋白質(zhì)(%)0.080.080.10羥甲基糠醛(%)0.300.080.03顏色(?Be’)10.00.30.2葡萄糖得率(%)較酸法高5%較酸法高10%DE：也稱葡萄糖值，是指糖化液中還原糖含量（以葡萄糖計）占干物質(zhì)的百分率。第四十六頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五不同糖化工藝比較項目酸解法酸酶法雙酶法淀粉糖轉(zhuǎn)化率/%909598工藝條件/耗能加壓溫高/多加壓溫高/多溫和/少副產(chǎn)物多中少生產(chǎn)周期短中長設(shè)備規(guī)模/防腐要求小/較高中/中大/一般原料適應(yīng)情況淀粉大米各種淀粉、大米是否有利于發(fā)酵和提取差中有利見P58第四十七頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五淀粉糖化工藝的比較從淀粉水解操作周期看：雙酶法＞酸酶法＞酸解法。從水解糖液的質(zhì)量及降低糖耗、提高原料利用率方面來考慮：雙酶法＞酸酶法＞酸解法。見P57第四十八頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五二、水解糖液的質(zhì)量要求項目要求酸解法雙酶法色澤淡黃色透明糊精反應(yīng)無還原糖含量18%25~38%DE值＞90%＞95%透光率＞40%＞60%pH4.6~4.8淀粉轉(zhuǎn)化率＞92%＞95%見P72第四十九頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五第三節(jié)培養(yǎng)基的設(shè)計和優(yōu)化在基本理論指導(dǎo)下，參照前人的經(jīng)驗配方，再結(jié)合菌種和產(chǎn)品的特性，初步確定可能的培養(yǎng)基組分；通過單因子試驗確定最適的培養(yǎng)基組分；通過統(tǒng)計學(xué)方法確定各組分的最適濃度；試驗各種發(fā)酵條件和培養(yǎng)基的關(guān)系。第五十頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五培養(yǎng)基組分的選擇培養(yǎng)基組分配比的確定不同規(guī)模培養(yǎng)基的優(yōu)化培養(yǎng)基設(shè)計時的注意事項第五十一頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五一、培養(yǎng)基組分的選擇做好調(diào)查研究工作。選擇一種較好的合成培養(yǎng)基做基礎(chǔ)，通過搖瓶試驗，摸索菌種對各種主要碳源、氮源的利用情況和產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的能力。觀察培養(yǎng)過程中pH的變化，確定菌種生長和產(chǎn)物合成的最適pH。確定各種無機元素的營養(yǎng)要求，即其最高、最低和最適用量。做復(fù)合培養(yǎng)基試驗。第五十二頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五做好調(diào)查研究工作。了解菌種來源、生理生化特性和一般的營養(yǎng)要求；了解菌種的培養(yǎng)條件，生物合成的代謝途徑，代謝產(chǎn)物的化學(xué)性質(zhì)、分子結(jié)構(gòu)、一般提純方法和產(chǎn)品質(zhì)量要求等。第五十三頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五二、培養(yǎng)基組分配比的確定進行細胞生長和產(chǎn)物形成的化學(xué)平衡計算實驗確定第五十四頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五1、進行細胞生長和產(chǎn)物形成的

化學(xué)平衡計算初級代謝產(chǎn)物代謝途徑比較清楚，可以根據(jù)物料平衡進行計算。次級代謝產(chǎn)物代謝途徑了解有限，因此要用化學(xué)計量關(guān)系計算得率比較困難。有些產(chǎn)物可以根據(jù)物料及能量平衡進行計算，但目前還難以作出精密分析。第五十五頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五第五十六頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五第五十七頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五第五十八頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五2、實驗確定培養(yǎng)基組分的配比最終都是通過實驗確定。合理的實驗設(shè)計方法單因子試驗多因子試驗第五十九頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五（1）單因子試驗對實驗中要考察的因子逐個進行試驗，尋找每個因子的最佳條件。優(yōu)點：一次可以進行多種條件的實驗，可以在較快時間內(nèi)得到結(jié)果。缺點：如果考察的條件多，實驗時間會比較長。各因子之間可能會產(chǎn)生交互作用，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。第六十頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五（2）多因子試驗運用統(tǒng)計學(xué)方法設(shè)計實驗和分析實驗結(jié)果，得到最佳的實驗條件。正交設(shè)計、均勻設(shè)計、響應(yīng)面設(shè)計等；利用統(tǒng)計學(xué)軟件，如SAS、SPSS、Matlab等。優(yōu)點：同時進行多個因子的試驗。用少量的實驗得到單因子實驗同樣的結(jié)果，甚至更準(zhǔn)確，大大提高了實驗效率。缺點：一次分析的因素和水平不能太多；必須有較為精確的參數(shù)作為參比標(biāo)準(zhǔn)。第六十一頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五①正交設(shè)計是根據(jù)正交性從全面試驗中挑選出部分有代表性的點進行試驗，這些有代表性的點具備了“均勻分散，齊整可比”的特點，正交試驗設(shè)計是分式析因設(shè)計的主要方法。優(yōu)點：可以通過較少的實驗次數(shù)得到滿意的結(jié)果。可通過方差分析，確定哪個因素影響較大?？梢钥疾旄饕蛩亻g存在的交互作用。第六十二頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五操作步驟確定因素數(shù)：選擇處理因素與不可忽略的交互作用。確定水平數(shù)二水平：有和無，可作因素篩選用。三水平：可觀察變化趨勢，選擇最佳搭配。多水平：一次滿足試驗要求。第六十三頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五操作步驟選定正交表：Ln(tc)L：正交表代號；n：行數(shù)，表示需要做的試驗次數(shù)；t：因素水平數(shù)，表示此表可以安排的水平數(shù)；c：列數(shù)，表示最多可以安排的因素個數(shù)。第六十四頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五實驗號因素A因素B因素C因素D因素E1111112122223133334144445212346221437234128243219313421032431113312412342131341423144231415432411644132L16(45)第六十五頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五操作步驟表頭安排應(yīng)優(yōu)先考慮交互作用不可忽略的處理因素，按照不可混雜的原則，將它們及交互作用首先在表頭排妥，而后再將剩余各因素任意安排在各列上。組織實施方案根據(jù)選定正交表中各因素占有列的水平數(shù)列，構(gòu)成實施方案表，按實驗號依次進行，共作n次實驗，每次實驗按表中橫行的各水平組合進行。第六十六頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五②均勻設(shè)計只考慮試驗點在試驗范圍內(nèi)“均勻分散”，而不考慮“整齊可比”。特別適合于多因素多水平的試驗和系統(tǒng)模型完全未知的情況。優(yōu)點：實驗次數(shù)更少；自動將各試驗因素分類為重要與次要，并將因素按重要性排序。第六十七頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五當(dāng)試驗中有m個因素，每個因素有n個水平時：全面試驗：共有nm種組合；正交設(shè)計：挑選出n2個試驗；均勻設(shè)計：選取n個點試驗。第六十八頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五操作步驟選擇試驗因素。確定因素水平。選擇均勻設(shè)計表。明確試驗方案，進行試驗操作。試驗結(jié)果分析：回歸分析法、直接觀察法。優(yōu)化條件的試驗驗證。縮小試驗范圍進行更精確的試驗，尋找更好的試驗條件，直至達到試驗?zāi)康臑橹埂５诹彭?，共一百一十九頁，編輯?023年，星期五③響應(yīng)面設(shè)計是將體系的響應(yīng)（試驗指標(biāo)）作為一個或多個因素的函數(shù)，運用圖形技術(shù)將這種函數(shù)關(guān)系顯示出來，以供我們憑借直覺的觀察來選擇試驗設(shè)計中的最優(yōu)化條件。第七十頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五操作步驟通過大量的試驗數(shù)據(jù)建立一個合適的數(shù)學(xué)模型。最常用的是多元線性回歸法。用數(shù)學(xué)模型作圖。一個因素：響應(yīng)面是二維空間中的一條曲線；二個因素：響應(yīng)面是三維空間中的曲面；二因素以上：要在三維以上的抽象空間才能表示。一般先進行主成分分析進行降維后，再在三維或二維空間中加以描述。第七十一頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五類胡蘿卜素高產(chǎn)菌Y11的培養(yǎng)基的優(yōu)化郭秒,食品與發(fā)酵工業(yè)，2004類胡蘿卜素的用途：色素、營養(yǎng)保健第七十二頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五類胡蘿卜素高產(chǎn)菌Y11的

培養(yǎng)基的優(yōu)化類胡蘿卜素的用途：色素、營養(yǎng)保健實驗內(nèi)容初步確定可能的培養(yǎng)基組分單因子試驗確定最適的培養(yǎng)基組分正交實驗確定最適培養(yǎng)基組分配比優(yōu)化培養(yǎng)基的發(fā)酵結(jié)果郭秒,食品與工業(yè)發(fā)酵，2004第七十三頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五初始培養(yǎng)基第七十四頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五1、初步確定可能的培養(yǎng)基組分第七十五頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五2、單因子試驗確定最適的碳源考慮到成本：乙酸鈉是較為合適的碳源第七十六頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五乙酸鈉的濃度0.2%比較好第七十七頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五確定最適的培養(yǎng)基組分碳源：乙酸鈉。氮源：氯化銨，酵母膏。第七十八頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五3、正交實驗確定最適培養(yǎng)基組分配比第七十九頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五由表看出，因素A和因素C對實驗結(jié)果影響特別顯著。對因素A，最大數(shù)是K1；對因素C，最大數(shù)是K3，因此選擇A1C3。對于因素B和D選擇最大數(shù)K2和K1。第八十頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五優(yōu)化后培養(yǎng)基配方：優(yōu)化前培養(yǎng)基配方：第八十一頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五改進后培養(yǎng)基原培養(yǎng)基4、優(yōu)化培養(yǎng)基的發(fā)酵結(jié)果第八十二頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五三、不同規(guī)模培養(yǎng)基的優(yōu)化搖瓶小型發(fā)酵罐中試發(fā)酵罐生產(chǎn)發(fā)酵罐第八十三頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五pH控制搖床：反應(yīng)器水平上的搖瓶研究第八十四頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五青霉素發(fā)酵發(fā)酵搖瓶：玉米漿4%，乳糖10%，(NH4)SO40.8%，輕質(zhì)碳酸鈣1%。發(fā)酵罐：葡萄糖流加控制總量10~15%，玉米漿總量4~8%，補加硫酸、前體等第八十五頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五四、培養(yǎng)基設(shè)計時的注意事項注意各成分之間的配比合適。注意控制合適的pH。避免產(chǎn)生微生物不能利用的物質(zhì)或形成沉淀。注意代謝調(diào)節(jié)物的影響。注意金屬離子的影響。原料的預(yù)處理和質(zhì)量滅菌如前體物質(zhì)、誘導(dǎo)劑、阻遏物、抑制劑等。第八十六頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五葡萄糖與銨鹽或氨基酸的氨基在滅菌高溫下作用形成深褐色物質(zhì)，不能被微生物利用，因此二者需分開滅菌。硫酸銨中的SO42-與鈣鹽易形成難溶的硫酸鈣，因此二者也不宜直接配成培養(yǎng)基。第八十七頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五鐵、錳和鋅離子都能明顯影響檸檬酸產(chǎn)量；鈣離子對細菌淀粉酶的生產(chǎn)有促進作用；鈷離子對葡萄糖異構(gòu)酶的發(fā)酵是必需的。第八十八頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五第四節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌常用滅菌方法培養(yǎng)基和設(shè)備的滅菌發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌工藝第八十九頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五一、常用滅菌方法干熱滅菌濕熱滅菌輻射滅菌化學(xué)藥劑滅菌過濾除菌見P73第九十頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五二、培養(yǎng)基和設(shè)備的滅菌培養(yǎng)基濕熱滅菌原理滅菌溫度與時間的選擇影響培養(yǎng)基滅菌效果的因素第九十一頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五（一）培養(yǎng)基濕熱滅菌原理微生物的熱阻微生物的熱死定律——對數(shù)殘留定律反應(yīng)速率常數(shù)第九十二頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五1、微生物的熱阻致死溫度：殺死微生物的極限溫度稱為致死溫度。致死時間：在致死溫度下，殺死全部微生物所需要的時間稱為致死時間。致死溫度和致死時間是衡量熱滅菌的指標(biāo)。熱阻：是指微生物在某一特定條件（主要是溫度和加熱方式）下的致死時間。相對熱阻：是指微生物在某一特定條件下的致死時間與另一微生物在相同條件下的致死時間的比值。見P77第九十三頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五某些微生物的相對熱阻

及其對一些滅菌劑的相對抵抗力滅菌方式大腸桿菌霉菌孢子細菌芽孢病毒干熱12～1010001濕熱12～103×1061～5苯酚11～21×10930甲醛12～102502紫外光15～1002～55～10第九十四頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五2、微生物的熱死定律——對數(shù)殘留定律滅菌過程中，微生物熱死速率與任一瞬間殘存的活菌數(shù)成正比。若Nt＝0，則t為∞。工程上，滅菌設(shè)計時認(rèn)為Nt＝0.001，即1000次滅菌中允許有1次失敗。第九十五頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五以微生物殘留活菌數(shù)（Nt/N0）的對數(shù)與滅菌時間（t）作圖，即得殘留曲線，其斜率為-k（反應(yīng)速率常數(shù)）。第九十六頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五3、反應(yīng)速率常數(shù)反應(yīng)速率常數(shù)k是微生物耐熱性的一種特征，隨微生物種類和滅菌溫度而異。相同溫度下，k值愈小，微生物愈耐熱。同一種微生物，滅菌溫度不同，k值不同，滅菌溫度愈低（愈高），k值愈?。ù螅?。第九十七頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五121℃某些細菌芽孢的k值細菌名稱k值/min-1枯草芽孢桿菌FS52303.8~2.6硬質(zhì)嗜熱芽孢桿菌FS15180.77硬質(zhì)嗜熱芽孢桿菌FS6172.9產(chǎn)氣梭狀芽孢桿菌PA36791.8第九十八頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五（二）滅菌溫度與時間的選擇溫度（℃）時間（min）100120011015011551121151256.41302.4大多數(shù)細菌芽孢的殺滅溫度和時間第九十九頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五培養(yǎng)基滅菌過程中微生物死亡培養(yǎng)基成分破壞第一百頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五溫度升高：死亡速率的增加＞培養(yǎng)基成分破壞速率的增加高溫短時滅菌效果好第一百零一頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五（三）影響培養(yǎng)基滅菌效果的因素滅菌溫度和時間培養(yǎng)基成分脂肪、糖分、蛋白質(zhì)含量高，微生物的耐熱性增加；高濃度的鹽類、色素等，削弱微生物的耐熱性；高濃度的有機物，影響熱的傳入。培養(yǎng)基的物理狀態(tài)固體培養(yǎng)基比液體培養(yǎng)基的滅菌時間長；含有少量大顆粒及粗纖維的培養(yǎng)基，滅菌溫度應(yīng)適當(dāng)提高。第一百零二頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五培養(yǎng)基的pH培養(yǎng)基pH值愈低，滅菌所需時間愈短。pH6.0～8.0時，微生物最耐熱。pH＜6.0，微生物容易死亡。培養(yǎng)基中的微生物數(shù)量培養(yǎng)基中微生物數(shù)量越多，滅菌所需時間越長。微生物細胞中水含量微生物細胞含水越多，越容易死亡。微生物細胞的菌齡年輕細胞比年老細胞容易死亡。微生物的耐熱性細菌營養(yǎng)體、酵母細胞、霉菌的菌絲體對熱較敏感；放線菌、酵母、霉菌孢子抗熱性稍好；細菌芽孢抗熱性更強。第一百零三頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五空氣排除情況如果罐內(nèi)空氣排除不完全，罐內(nèi)的實際溫度就低于壓力表顯示壓力所對應(yīng)的溫度。攪拌必須保證培養(yǎng)基在罐內(nèi)始終均勻地充分翻動，從而防止培養(yǎng)物質(zhì)過多破壞或局部溫度過低而殺菌不透。泡沫泡沫影響熱量傳遞，不易達到微生物的致死溫度。培養(yǎng)基體積體積越大，滅菌所需時間越長。第一百零四頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五三、發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌工藝間歇滅菌連續(xù)滅菌第一百零五頁，共一百一十九頁，編輯于2023年，星期五1、空罐滅菌空罐滅菌也稱空消。當(dāng)培養(yǎng)基（或物料）尚未進罐前對罐