作業(yè)指導(dǎo)書醫(yī)療器械無菌檢測操作指引,直接接種法,薄膜過濾法

制定XXX確認:日期制定XXX確認:日期:2-Mar-19修定版次:2XXXXXX文件編號XXX1of8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引適用范圍ScopeBI的無菌檢測及評估.參考文件NormativereferenceISO11737-2,Sterilizationofmedicaldevices—Microbiologicalmethods—Part2:Testsofsterilityperformedinthedefinition,validationandmaintenanceofasterilizationprocessISO13485Medicaldevices—Qualitymanagementsystems—Requirementsforregulatorypurposes2023XIH無菌檢查法COP09定義Definitions無菌sterile:無存活的微生物.開發(fā),確認或重確認的一部份,確定產(chǎn)品上是否存在活微生物的技術(shù)操作.生物指示劑biologicalindicator(BI):對特定滅菌過程具有確定抗力的染菌測試系統(tǒng).樣品份額sampleitemportion(SIP):從產(chǎn)品上取的用于測試的規(guī)定局部.職責(zé)Responsibility試驗員:具備微生物方面學(xué)問,生疏測試操作,負責(zé)產(chǎn)品的測試及報告.試驗工程師:生疏測試,指導(dǎo)試驗員測試,檢查測試報告.質(zhì)量主管/經(jīng)理:負責(zé)審批測試報告.檢測程序Testprocedure測試預(yù)備檢測設(shè)備干凈工作臺超聲清洗機細菌過濾器生化培育箱高壓蒸汽滅菌鍋XXXXXX文件編號XXX2of8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引檢測用品,沖洗液:0.1%蛋白胨水溶液,0.9%NaCl,PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液;養(yǎng)分肉湯或胰蛋白胨大豆肉湯,胰蛋白胨大豆瓊脂培育基;剪刀,鑷子,微孔濾膜(0.45m);酒精燈,75%酒精,培育皿,培育缸/管,試管;依據(jù)檢測需要,按規(guī)定要求配制好培育基,稀釋液和沖洗液;將配制好的培育基,稀釋液和沖洗液分裝到三角瓶中密封并用白紙包住封口,微孔濾膜用水潤濕放入培育皿中,剪刀,鑷子,培育皿,培育缸/管,試管,細菌過濾器不銹鋼杯用分別用白紙包好,12130min;超聲清洗機和細菌過濾器用75%酒精擦洗干凈;試驗前兩小時翻開干凈工作臺,無菌室,30min,在開啟紫外燈時人員必需遠離,以免灼傷眼睛和皮膚造成人身損害;全部檢測用品,樣品由傳遞窗遞入無菌室.測試樣品份額(SIP)的選擇:假設(shè)驗證生物負載在產(chǎn)品上是均勻分布的,SIP可以是該產(chǎn)品的任何部份,否則樣品應(yīng)包含能代表所制產(chǎn)品的每種相應(yīng)材質(zhì)而隨機選取的產(chǎn)品部位.假設(shè)生物負載分布,可以從認為對滅菌工藝最有挑戰(zhàn)性的產(chǎn)品部份選取SIP.可在長度,質(zhì)量,SIP:SIPSIP的類型質(zhì)量產(chǎn)品類型植入類(無滲透吸取型)粉塵類衣服類植入類(可滲透吸取型)管道類(管徑全都)液體類樣品測試前包裝應(yīng)完整,應(yīng)先用75%酒精對包裝外表進展清潔再傳入傳遞窗;在無菌測試前,應(yīng)先驗證測試方法的適用性,以證明所承受的方法適合于樣品的無菌檢測,檢測方法參照《抑細菌抑真菌試驗》;方法驗證試驗可與樣品的無菌檢測同時進展,或外發(fā)至具有微生物檢驗資質(zhì)的試驗室進展;陽性比照:應(yīng)依據(jù)樣品的特性選擇陽性比照菌:XXXXXX文件編號XXX3of8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的樣品,以金黃色葡萄球菌為比照菌;抗革蘭陰性菌為主的樣品,以大腸埃希菌為比照菌;抗壓氧菌的樣品,以生孢梭菌為比照菌;抗真菌的樣品,以白色念珠菌為比照菌;陽性比照試驗的菌液制備方法同《抑細菌抑真菌試驗》;加菌量小于100cfu,樣品用量同樣品的無菌測試每份培育基接種的樣品量;48～72小時應(yīng)生長良好.陰性比照:樣品的無菌測試時,應(yīng)取相應(yīng)培育基,稀釋液,沖洗液同法操作,作為陰性比照.陰性比照不得有菌生長.無菌測試有以下兩種方法:直接接種法:將樣品直接接種到培育基中或?qū)⒖缮L培育基參與到樣品里進展培育,觀看是否有菌生長;薄膜過濾法:將微生物從樣品上移除分別后,再接種到培育基中進展培育,觀看是否有菌生長;直接接種法醫(yī)療器械的無菌檢測方法應(yīng)首選直接接種法;SIP接種于含有足以浸沒樣品的適量培育基的無菌容器中直接培育;培育基的用量應(yīng)能浸沒整個樣品或SIP;假設(shè)樣品無法直接放入容器中,可在滅菌前對產(chǎn)品進展拆分單獨包裝,或在測試培育前進展拆分;樣品放入培育基后可適當(dāng)?shù)臄嚢?假設(shè)樣品具有抑菌作用,可參與適量的無菌中和劑或外表活性劑,或加大每個容器的培育基用量.薄膜過濾法由于某些醫(yī)療器械的特性如具有抑細菌抑真菌的作用,而不能選用直接接種法時,可選擇薄膜過濾法;在選用薄膜過濾法時應(yīng)留意洗提技術(shù),洗提力氣和操作過程中的污染對測試結(jié)果的影響;無菌測試樣品的洗提技術(shù)應(yīng)與該樣品的生物負載測試技術(shù)全都,檢測方法可參照《產(chǎn)品生物負載檢測》;XXXXXX文件編號XXX4of8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引操作步驟:將樣品包裝去除,用無菌鑷子將樣品放入超聲清洗機中,如樣品過大而無法放入可將樣品進展適當(dāng)拆分;將樣品浸入含有適量洗脫液的超聲清洗機中,參與適量的稀釋液和外表活性劑,以洗脫液浸沒樣品外表為準;翻開超聲清洗機,5min,超聲清洗頻率不應(yīng)過高,以免造成微生物死亡;清洗完畢后將樣品取出,洗脫液在細菌過濾器上進展過濾,應(yīng)留意濾膜在使用前后的完整性;洗脫液經(jīng)薄膜過濾后,PH7.0氣化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜,每張濾膜每100ml;過濾完成取出濾膜,2等份,置于含培育基的容器中,其中一份作陽性比照用.培育及觀看:將上述含培育基的容器按規(guī)定溫度培育,培育期間應(yīng)逐日觀看并記錄是否有菌生長;

培育基養(yǎng)分肉湯/養(yǎng)分肉湯/

培育溫度30～35℃30～35℃

培育時間14天7天如在參與樣品后或在培育過程中,培育基消滅渾濁,714天后,不能從外觀上推斷有無微生物生長,可取該培育液適量轉(zhuǎn)種至同各穎培育基中,細菌培育2天,3天,觀看接種的同種穎培育基是否再消滅渾濁,或取培育液涂片,染色,鏡檢,推斷是否有菌.結(jié)果推斷陽性比照管應(yīng)生長良好,陰性比照管不得有菌生長,否則試驗無效;假設(shè)樣品管均澄清,或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長,判樣品符合規(guī)定;假設(shè)樣品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長,判樣品不符合規(guī)定,除非能充分證明試驗結(jié)果無效,即生長的微生物非樣品所含;當(dāng)符合以下至少一個條件時,方可判試驗結(jié)果無效:無菌測試所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌測試的要求;回憶無菌測試過程,覺察有可能引起微生物污染的因素;XXXXXX文件編號XXX5of8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引樣品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后,確證是因無菌測試中所使用的物品或無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的.測試假設(shè)經(jīng)確認無效,應(yīng)重試.重試時,重取同量樣品,依法檢查,假設(shè)無菌生長,判樣品符合規(guī)定;假設(shè)有菌生長,判樣品不符合規(guī)定.檢測報告編號規(guī)章:SterilityTestingReportForSterileProductsTL-YY-XXYY:年份XX:流水號BiologicalIndicatorSterilitytestReportBI_S_YY-XXXYY:年份XXX:滅菌批流水號文件保存期限:10年.附錄SterilityTestingReportForSterileProductsBiologicalIndicatorSterilitytestReport制定:XXX確認:日期制定:XXX確認:日期2-Mar-19修定版次:2XXXXXX文件編號XXX6of8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引7.1SterilityTestingReportForSterileProductsXXXXXX文件編號XXX7of8工作指引名稱:無菌檢測方法操作指引附錄7.2BiologicalIndicatorSterilitytestReportXXXXXX文件編號XXX8of8工作指