【知識解析】血細胞計數(shù)板的使用

講解1血細胞計數(shù)板的結(jié)構(gòu)血細胞計數(shù)板的使用血細胞計數(shù)板（如圖1所示）由一塊厚的玻璃片特制而成。一塊血細胞計數(shù)板有兩個計數(shù)室，每個計數(shù)室（大方格）的面積為1mm2，加蓋玻片后，計數(shù)室與蓋玻片的距離是0.1mm，即計數(shù)室深度為0.1mm，所以每個大方格的容積為0.1mm3。計數(shù)室通常有兩種規(guī)格（如圖2所示）：一種是將一個計數(shù)室（大方格）分為25個中格，每個中格又分為16個小格；另一種是將一個計數(shù)室（大方格）分為16個中格，每個中格又分為25個小格。不管何種規(guī)格的計數(shù)室，都包含400個小格。講解1血細胞計數(shù)板的結(jié)構(gòu)血細胞計數(shù)板的使用圖1血細胞計數(shù)板的結(jié)構(gòu)講解1血細胞計數(shù)板的結(jié)構(gòu)血細胞計數(shù)板的使用圖2兩種規(guī)格血細胞計數(shù)板的計數(shù)室講解2利用血細胞計數(shù)板計數(shù)的具體操作步驟血細胞計數(shù)板的使用（1）取血細胞計數(shù)板，并將蓋玻片放在其計數(shù)室上方。（2）將培養(yǎng)液輕輕振蕩幾次，使微生物分布均勻后，用吸管吸取少量培養(yǎng)液滴在蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入計數(shù)室。多余的培養(yǎng)液用濾紙吸去。（3）靜置片刻，待微生物全部沉降至計數(shù)室底部，再利用顯微鏡觀察并計數(shù)。講解3計數(shù)規(guī)則（以計數(shù)酵母菌為例）血細胞計數(shù)板的使用（1）如圖2所示，25中格×16小格的計數(shù)板，需要對四個頂角及中央5個中格中的酵母菌進行計數(shù)；16中格×25小格的計數(shù)板，則只需對四個頂角中格中的酵母菌進行計數(shù)。隨后估算出每個小方格中的酵母菌數(shù)。（2）對于壓在中方格邊線上的酵母菌，只計數(shù)相鄰兩邊（記上不記下、記左不記右）及其夾角上的個體。講解3計數(shù)規(guī)則（以計數(shù)酵母菌為例）血細胞計數(shù)板的使用（3）若一個小方格中酵母菌數(shù)量過多，可先對樣品進行適當(dāng)稀釋后，再重新制片，觀察計數(shù)。（4）出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。（5）每個樣品應(yīng)計數(shù)三次，取平均值。講解4計算公式（以計數(shù)酵母菌為例）血細胞計數(shù)板的使用1mL培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)小方格中酵母菌平均數(shù)×4000.1mm3（大方格）中菌體數(shù)1mm3中菌體數(shù)1mL中菌體數(shù)（稀釋后）＝×10×1000×稀釋倍數(shù)例題①培養(yǎng)酵母菌時，必須去除培養(yǎng)液中的溶解氧。②將適量干酵母放入裝有一定濃度葡萄糖培養(yǎng)液的錐形瓶中，在適宜條件下培養(yǎng)。③培養(yǎng)早期不需取樣，培養(yǎng)后期每天同一時間取樣一次進行計數(shù)。某研究性學(xué)習(xí)小組為探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化，進行如下相關(guān)操作：血細胞計數(shù)板的使用例題④取樣前，將培養(yǎng)液振蕩搖勻后，用吸管從錐形瓶中吸取一定量的培養(yǎng)液。⑤在血細胞計數(shù)板中央滴一滴培養(yǎng)液，蓋上蓋玻片，并用濾紙吸去邊緣多余培養(yǎng)液。血細胞計數(shù)板的使用⑥待酵母菌全部沉降到計數(shù)室底部，將計數(shù)板放在載物臺中央，在顯微鏡下觀察、計數(shù)。⑦計數(shù)時，壓在中方格界線上的酵母菌應(yīng)計數(shù)相鄰兩邊及其夾角上的菌體。例題請回答以下問題：（1）該興趣小組的操作過程有幾處錯誤，請指出并更正。（2）有同學(xué)質(zhì)疑該興趣小組沒有設(shè)置對照組。這種質(zhì)疑是否正確，為什么？血細胞計數(shù)板的使用例題請回答以下問題：（3）若使用的血細胞計數(shù)板（規(guī)格為1mm×1mm×0.1mm）每個計數(shù)室分為25個中方格，每個中方格又分為16個小方格，將樣液稀釋100倍后計數(shù)，發(fā)現(xiàn)計數(shù)室四個角及中央共5個中方格內(nèi)的酵母菌總數(shù)為20個，則培養(yǎng)液中酵母菌的密度為________個/mL。血細胞計數(shù)板的使用解析（1）酵母菌是兼性厭氧菌，無需去除培養(yǎng)液中的溶解氧，①錯誤；干酵母置于葡萄糖培養(yǎng)液中可活化，②正確；實驗自開始后應(yīng)連續(xù)7天同一時間對培養(yǎng)液進行抽樣檢測和計數(shù)，以研究酵母菌種群數(shù)量的變化規(guī)律，③錯誤；搖勻后取樣可減少實驗誤差，④正確：血細胞計數(shù)板在使用過程中應(yīng)先蓋蓋玻片，再在蓋玻片邊緣滴入培養(yǎng)液，讓培養(yǎng)液自行滲入計數(shù)室，⑤錯誤：酵母菌沉降到計數(shù)室底部后計數(shù)可使計數(shù)更準(zhǔn)確，⑥正確：壓線菌體應(yīng)計數(shù)相鄰兩邊及其夾角上的個體，⑦正確。血細胞計數(shù)板的使用解析（2）該實驗不需要額外設(shè)置對照組，不同天數(shù)的取樣與計數(shù)結(jié)果可以形成相互對照。（3）利用公式1mL培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)＝小方格中酵母菌平均數(shù)×400×10×1000×稀釋倍數(shù)＝20/80×400×10×1000×100＝1×108（個）。血細胞計數(shù)板的使用答案（1）①無需去除溶解氧，③培養(yǎng)時每天都需要進行取樣計數(shù)，⑤利用血細胞計數(shù)板計數(shù)應(yīng)先