細胞免疫療法

機體內(nèi)具有殺傷作用的淋巴細胞有自然殺傷細胞、殺傷細胞殺傷性 T細胞等，它們本身就能夠?qū)鼓[瘤細胞的產(chǎn)生。根據(jù)實驗觀察，一個腫瘤細胞需要上百個淋巴細胞對付它。而一立方厘米大小的瘤塊中約有 10億個瘤細胞。因此，如果有大量的淋巴細胞，就能夠有效的消滅腫瘤細胞，對抗腫瘤細胞的生成，這就是細胞免疫療法的基本理念。[1]簡介機體內(nèi)具有殺傷作用的淋巴細胞有自然殺傷細胞、殺傷細胞殺傷性 T細胞等，它們本身就能夠?qū)鼓[瘤細胞的產(chǎn)生。根據(jù)實驗觀察，一個腫瘤細胞需要上百個淋巴細胞對付它。而一立方厘米大小的瘤塊中約有 10億個瘤細胞。因此，如果有大量的淋巴細胞，就能夠有效的消滅腫瘤細胞，對抗腫瘤細胞的生成，這就是細胞免疫療法的基本理念。當前，以細胞免疫療法為首的細胞生物治療己經(jīng)初露鋒芒，成為腫瘤生物治療中重要的發(fā)展方向。細胞免疫療法，其全稱為過繼性免疫細胞療法， (adoptivecellularimmunotherapy,ACI或AIT)，是指向腫瘤患者轉(zhuǎn)輸具有抗腫瘤活性的免疫細胞 (特異性和非特異性的)，直接殺傷腫瘤或激發(fā)機體的免疫應(yīng)答殺傷腫瘤細胞。臨床上是指將體外激活的自體或異體免疫效應(yīng)細胞輸注給患者，以殺傷患者體內(nèi)的腫瘤細胞的一種治療方式。近年來，細胞免疫療法一直是腫瘤生物治療中最活躍的領(lǐng)域。細胞免疫療法對細胞免疫功能低下的患者，如大劑量化療、放療后、骨髓移植后、病毒感染損傷免疫細胞數(shù)量及功能的患者，尤其是血液/免疫系統(tǒng)腫瘤的患者更為適合。發(fā)展細胞免疫治療可選擇性地抑制/殺傷腫瘤細胞，而且不依賴于荷瘤者的免疫功能，并可與放、化療合用，自上世紀80年代以來已進行了大量研究。該療法歷經(jīng)LAK、TIL、CD3AK、CIK、DC-CIK、EAAL等發(fā)展階段，其療效、特異性、整體有效率、副作用反應(yīng)等方面的情況逐步改善。分類LAK細胞免疫治療LAK細胞即淋巴因子激活的殺傷細胞。將外周血淋巴細胞在體外經(jīng)淋巴因子白介素-2(IL-2)激活3?5天而擴增為具有廣譜抗瘤作用的殺傷細胞。實驗證實，把 LAK輸給帶瘤小鼠，不但使原瘤消退，還可以使已確立的轉(zhuǎn)移瘤消失。LAK有廣譜抗瘤作用，LAK與IL-2合用比單用IL-2效果好，因為經(jīng)IL-2激活的LAK在輸入人體后仍需IL-2才能維持其殺傷活性。嚴格來說，LAK細胞并非是一個獨立的淋巴群或亞群，而是 NK細胞或T細胞體外培養(yǎng)時，在高劑量IL-2等細胞因子誘導下成為能夠殺傷 NK不敏感腫瘤細胞的殺傷

細胞，稱為淋巴因子激活的殺傷細胞（lymphokineactivatedkillercells,LAK）。1982年Grimm等首先報道外周血單個核細胞（PBMC）中加入IL-2體外培養(yǎng)4-6天，能誘導出一種非特異性的殺傷細胞，這類細胞可以殺傷多種對 CTL、NK不敏感的腫瘤細胞。目前尚未發(fā)現(xiàn)LAK細胞特有的表面標志，許多實驗表明，LAK細胞的前體細胞是NK細胞和T細胞。由于IL-2用量大，在治療過程中可出現(xiàn)毒副反應(yīng)，最常見和最嚴重的毒副作用是出現(xiàn)毛細血管滲漏綜合征（capillaryleaksyndrome,CLS），主要表現(xiàn)為全身性水腫和多器官功能失調(diào)，可引起胸腹腔積液、肺間質(zhì)水腫和充血性心力衰竭。引起 CLS的機理可能與內(nèi)皮細胞損傷和產(chǎn)生血管活性物質(zhì)有關(guān)。TIL細胞免疫治療TIL細胞是一種淋巴細胞，稱為腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL），它是一種新型的抗腫瘤效應(yīng)細胞，具有高效、特異、副作用小等優(yōu)點。經(jīng)測試TIL細胞的抗腫瘤效果是LAK的50—100倍，如把TIL細胞回輸?shù)襟w內(nèi)血液及腫瘤中可以存留達二月之久，因此它有著巨大的潛在治療價值。TIL已應(yīng)用于臨床，主要治療皮膚、腎、肺、頭頸部、肝、卵巢部位的原發(fā)或繼發(fā)腫瘤。1986年Rosenberg研究組首先報道了腫瘤浸潤淋巴細胞（tumorinfiltratinglymphocyte,TIL）。TIL細胞表型具有異質(zhì)性，一般來說，TIL中絕大多數(shù)細胞CD3陽性。不同腫瘤來源的TIL細胞中，CD4+T細胞、CD8+T細胞的比例有差異，大多數(shù)情況下以CD8+T細胞為主。新鮮分離的TIL中CD25+細胞百分率較低，隨著體外加IL-2培養(yǎng)時間的延長，CD25+細胞百分率逐漸升高。NK細胞的標記（CD16，CD56）在TIL體外加IL-2培養(yǎng)過程中有先增高后降低的趨勢。用機械處理和酶消化方法，從腫瘤局部分離出腫瘤浸潤的淋巴細胞，加入高劑量IL-2體外培養(yǎng)，殘存的腫瘤細胞7-13天全部死亡。經(jīng)IL-2活化的TIL與來自PBMC的LAK細胞比較，其特點是：（1）50-100倍，因此在治療中可以減少效應(yīng)細胞和 IL-2的用量，而且對LAK治療無效的晚期腫瘤仍有一定治療效果；（2）主要由CD8陽性細胞誘導而來，在動物實驗中發(fā)現(xiàn) TIL殺傷腫瘤作用具有特異性；（3）宿主的抑制狀態(tài)有利于TIL的殺傷作用，因此治療時加用環(huán)磷酰胺（Cy）100mg/kg可明顯提高療效，可能與免疫抑制藥能消除抑制性細胞或因子，增強過繼免疫治療作用有關(guān)，因而可減少IL-2的用量，降低毒副反應(yīng)；（4） 可從手術(shù)切下腫瘤組織、腫瘤引流淋巴結(jié)、癌性胸腹水中獲得淋巴細胞，經(jīng)加IL-2培養(yǎng)后，其生長、擴增能力強于LAK細胞。已有報道應(yīng)用TIL治療14例轉(zhuǎn)移性肺癌等晚期腫患者，其中4例腫瘤縮小50%以上，副作用明顯低于IL-2/LAK療法。CD3AK細胞免疫治療CD3AK（Anti-CD3Antibodyinducedactivatedkillercells）是抗CD3單克隆抗體和IL-2共同激活的殺傷細胞，具有強體外增殖能力、高效細胞毒活性。是繼 LAK、TIL細胞后又一具有殺傷腫瘤作用的免疫活性細胞，與LAK細胞及TIL細胞相比較,CD3AK細

胞具有擴增能力強、體外存活時間較長、細胞毒活性高、分泌淋巴因子的能力強和體內(nèi)外抗腫瘤效果顯著等優(yōu)點，有報道稱其增殖能力及抗腫瘤細胞毒活性均顯著優(yōu)于LAK細胞。根據(jù)現(xiàn)有的實驗結(jié)果證實。CD3AK細胞可能通過兩種方式殺傷腫瘤細胞。直接殺傷作用：CD3AK細胞通過靶細胞受體，或不同于TCR復合體的識別機構(gòu)，識別靶細胞。并與其結(jié)合，CD3AK與靶細胞的結(jié)合。啟動細胞溶解反應(yīng)，釋放一些細胞毒顆?；蛞蜃?，從而溶解靶細胞；間接殺傷作用：CD3AK細胞除自身直接溶解靶細胞外，還能分泌IL-2，腫瘤壞死因子(TNF)，Y-干擾素(y-TFN)等多種細胞因子對腫瘤細胞產(chǎn)生間接殺傷作用，此類因子對腫瘤細胞均有直接的細胞毒活性或抑制作用。CD3AK和LAK細胞一樣具有廣譜的非MHC限制的殺傷腫瘤細胞的作用，但兩者的殺瘤譜有所不同.CD3AK細胞有比LAK細胞和TIL細胞更強的擴增及抗腫瘤能力，體外抗腫瘤能力比常規(guī)LAK高6?20倍，對NK細胞敏感和LAK細胞敏感的腫瘤細胞，如K562。YAC一1，Raji，P805等均有不同程度的殺傷效應(yīng)。CD3AK細胞能夠有選擇地直接或間接殺傷腫瘤細胞，但對自體或舁體轉(zhuǎn)化的淋巴細胞。對正常組織細胞沒有殺傷活性。因此就CD3AK細胞而言。對人體沒有毒副作用。CIK細胞免疫治療繼淋巴因子激活殺傷細胞(LAK)、浸潤腫瘤淋巴細胞(TIL)、及CD3單抗激活的殺傷細胞(CD3AK)后，細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokineinducedkiller,CIK)的殺瘤作用日益受到重視。CIK細胞最早是1991年由美國斯坦福大學SchmidtWolf等首次報道。他們發(fā)現(xiàn)在多種細胞因子(Y-干擾素、CD3單抗、白介素-1和白介素-2)作用下，外周血淋巴細胞可以被定向誘導并大量增值成為腫瘤殺傷細胞。細胞因子誘導的殺傷(CIK)細胞是人外周血中單個核細胞在體外經(jīng)多種細胞因子刺激后獲得的一群異質(zhì)細胞。它具有增殖能力強、殺瘤活性高和殺瘤譜廣、臨床應(yīng)用不良反應(yīng)小的特點。是腫瘤過繼兔疫治療中更為有效的殺瘤效應(yīng)細胞。作為一種新型的免疫活性細胞，CIK細胞是將人外周血單個核細胞在體外用多種細胞因子共同培養(yǎng)一段時間后獲得的一群異質(zhì)細胞，具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和非主要組織相容性復合體(majorhismcompatibilitycomplex,MHC)限制性殺瘤的優(yōu)點，CD3+、CD56+、T淋巴細胞是CIK群體中主要效應(yīng)細胞，與其他過繼性免疫治療細胞相比，具有增殖速度更快、殺瘤活性更高、殺瘤譜更廣等優(yōu)點。DCCIK細胞免疫治療DC-CIK(或DC/CIK)是指與DC細胞共培養(yǎng)的CIK細胞。細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine-inducedkillers,CIK)是一類抗腫瘤抗病毒效應(yīng)細胞，能在體外被誘導并大量增殖。樹突狀細胞(dendriticcell,DC)是有效的專職抗原提呈細胞，成熟的 DC可以通過II型組織相容性抗原(MHC-II)等途徑提呈腫瘤抗原，有效抵制腫瘤細胞的免疫逃逸機制。CIK細胞和DC細胞是細胞免疫治療的2個重要組成部分，兩者聯(lián)合可確保高效的免疫反應(yīng)。將CIK細胞和同源DC細胞共培養(yǎng)后即可獲得DC-CIK細胞。它既可促進DC細胞

的成熟，更能促進ClK的增殖，并加強其抗腫瘤活性。DC細胞是機體免疫應(yīng)答的始動者，能夠誘導持久有力的特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)； CIK細胞可通過非特異性免疫殺傷作用清除腫瘤患者體內(nèi)微小殘余病灶，所以負載腫瘤抗原的DC與CIK的有機結(jié)合(即DC-CIK細胞)能產(chǎn)生特異性和非特異性的雙重抗腫瘤效應(yīng)。在 CIK細胞免疫治療的基礎(chǔ)上，進一步提高了治療的特異性和有效性。EAAL細胞免疫治療EAAL，是擴增活化的自體淋巴細胞的英文ExpandingActivatedAutologousLymphocytes的縮寫，是在傳統(tǒng)的抗CD3抗體和IL-2體外擴增活化淋巴細胞方法的基礎(chǔ)上，開發(fā)的一種新的腫瘤細胞免疫治療方法。這種方法所擴增的細胞主要為殺傷性淋巴細胞，其中主要成分為CD8+的殺傷性T淋巴細胞和NK細胞，CD8+T淋巴細胞為機體最主要的抗腫瘤淋巴細胞群體，其中含有識別腫瘤抗原的特異性殺傷性 T細胞，對腫瘤細胞進行特異性的殺傷；而NK細胞對HLA表達下調(diào)的腫瘤細胞有直接的殺傷作用。EAAL細胞技術(shù)是治療腫瘤和慢性傳染性病毒感染的細胞免疫治療方法之一。 EAAL治療效果與回輸次數(shù)、患者病情及個體差異等因素有關(guān)。日本在治療肝癌的隨機臨床試驗中，使用EAAL進行的免疫治療可提高患者的無復發(fā)存活率，與無該治療的病人相比，EAAL治療組肝癌術(shù)后復發(fā)率降低18%，復發(fā)的危險率減少了41%。日本和韓國截止到2004年為止有2134例不同系統(tǒng)的腫瘤患者參加了這項治療， 其中完全緩解的患者為5%，部分緩解的患者是17%，長期病情穩(wěn)定的患者16%?；颊叩呐R床總受益率大約為38%。EAAL治療可能控制腫瘤生長，延長患者生命，改善病人生存質(zhì)量。治療副作用很小。目前尚未見由于EAAL治療引起的明顯不良反應(yīng)或?qū)е滤劳龅牟±；剌敿毎腔颊咦陨砹馨图毎?，因此，沒有免疫排斥反應(yīng)。優(yōu)勢在各種腫瘤免疫治療方法中，細胞免疫療法因具有以下 的優(yōu)點而受到人們的重視，為近十多年腫瘤免疫治療中十分活躍的研究領(lǐng)域：免疫細胞在體外處理，可繞過體內(nèi)腫瘤免疫障礙的種種機制，從而選擇性地發(fā)揮抗腫瘤免疫反應(yīng)。如新鮮分離的腫瘤浸潤性淋巴細胞(tumorinfiltratinglymphocyte，TIL)往往缺乏抗腫瘤效應(yīng)，而在體外一定條件下培養(yǎng)一段時間后可恢復特異性抗腫瘤作用；在體外培養(yǎng)條件下，腫瘤抗原特異性耐受的免疫細胞可被逆轉(zhuǎn)。免疫細胞的活化及效應(yīng)過程往往由一些細胞因子介導， 而目前基因工程可大量克隆不同的細胞因子，也可大量克隆腫瘤抗原或多肽，這使體外活化擴增大量的抗腫瘤免疫細胞更為可行方便。免疫細胞的體外活化擴增可避免一些制劑體內(nèi)大量應(yīng)用帶來的嚴重毒副作用，如：IL-2、TNF-a、IL-4、IL-7、IL-12等具有抗腫瘤作用，抗CD3單克隆抗體(MabCD3)的體內(nèi)應(yīng)用可激活T淋巴細胞，但這些制劑由于其復雜的多種作用，在體內(nèi)大量應(yīng)用可導致嚴重的甚至致死性副作用，這也是這些因子難以被批準臨床使用的重要原因，

而在體外操作可避免這些副作用。（4）目前已能在體外大量擴增自體或異基因的抗腫瘤免疫細胞， 其數(shù)量大于腫瘤疫苗在體內(nèi)激活的效應(yīng)細胞數(shù)，一些體外培養(yǎng)的免疫細胞已進入臨床治療。實驗顯示腫瘤疫苗在體內(nèi)應(yīng)用可增加體內(nèi)的腫瘤特異性 CTL數(shù)量，但到一定時候，體內(nèi)的CTL到達平臺期而不再增加，這主要由體內(nèi)存在的特異性及非特異性免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)限制了CTL克隆的擴增。而在體外培養(yǎng)可突破此調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，大量擴增免疫效應(yīng)細胞。臨床適應(yīng)癥因DC-CIK細胞發(fā)揮識別和殺傷腫瘤細胞的功能不受MHC等因素限制，因此有廣譜抗腫瘤作用，臨床可應(yīng)用于多種腫瘤不同階段的治療。呼吸系統(tǒng)：肺癌（小細胞肺癌、鱗癌、腺癌）等；消化系統(tǒng)：肝癌、胃癌、腸癌等；泌尿系統(tǒng)：腎癌、腎上腺癌及其轉(zhuǎn)移癌等；血液系統(tǒng)：急慢性白血病、淋巴癌（除T細胞淋巴癌）及其轉(zhuǎn)移癌等；其他腫瘤：惡性黑色素瘤、鼻咽瘤、乳腺癌、前列腺癌、舌癌等；還包括腫瘤轉(zhuǎn)移，以及惡性胸水、惡性腹水等治療。適合人群針對早期腫瘤患者:早期腫瘤患者的局部腫瘤病灶需首先采用手術(shù)切除，之后應(yīng)立即采用過繼細胞免疫治療，殺死殘留微小病灶及血管夜淋巴中的癌細胞，同事提高患者自體免疫力，恢復患者機體自然的識別，殺死癌細胞的免疫力。從根本上，全面防止腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移，從而提高治愈率，過繼細胞免疫治療防復發(fā)轉(zhuǎn)移效果優(yōu)于放療、化療，且對患者無毒副作用。針對中晚期患者：中晚期患者適合不能手術(shù)的中晚期或不愿意手術(shù)的患者。 可首先采用氬氦刀微創(chuàng)靶向治療。微創(chuàng)靶向治療效果相當于姑息性手術(shù)，且創(chuàng)傷小，副作用低?？煽焖贇⑺垒^大的腫