抗原抗體及其結(jié)合反應

抗原抗體及其結(jié)合反應第一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六

教學目的掌握：抗原抗體結(jié)合力、抗原抗體結(jié)合反應特點熟悉：影響抗原抗體結(jié)合反應的因素第二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六第一節(jié)抗原一、抗原的特性免疫原性、免疫反應性特異性二、用于免疫測定的抗原分類天然、合成多肽、基因重組第三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六第二節(jié)抗體一、抗體的特性特異性、多樣性、免疫原性二、用于免疫測定的抗體分類多克隆、單克隆、基因工程三、抗體產(chǎn)生的規(guī)律初次應答、再次應答第四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六第三節(jié)抗原抗體結(jié)合反應的原理抗原抗體反應:指抗原與相應抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應?？乖砦慌c抗體高變區(qū)間的結(jié)構(gòu)互補抗原表位與抗體高變區(qū)的緊密接觸抗原抗體之間的結(jié)合力親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體物質(zhì)基礎第五頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六一、抗原抗體結(jié)合力靜電引力范德華引力氫鍵疏水作用力抗原抗體結(jié)合力示意圖第六頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六１.靜電引力（electrostaticforces）抗原和抗體分子帶有相反電荷的氨基和羧基基團之間相互吸引的力。又稱為庫倫引力第七頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六2.范德華引力（VonderWaalsforces）

抗原和抗體相互接近時，由于分子的極化作用而出現(xiàn)的引力。

范德華引力<靜電引力第八頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六3.氫鍵結(jié)合力供氫體上的氫原子與受氫體原子間的引力供氫體：羧基、氨基和羥基受氫體：羧基氧、羧基碳和肽鍵氫鍵具有高度的方向性第九頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六4.疏水作用力（疏水鍵）

兩個疏水基團在水溶液中相接觸時，由于對水分子排斥而趨向聚集力。第十頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六二、抗原抗體的親和力和親合力抗原抗體親和力示意圖第十一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六抗原抗體親合力示意圖第十二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六三、液相中抗原抗體的結(jié)合反應抗原抗體復合物

(疏水膠體)可見反應電解質(zhì)

抗原

(親水膠體)抗體﹢第十三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六四、固相表面抗原抗體的結(jié)合反應1.抗原抗體結(jié)合反應時間2.反應體積3.解離速度4.固相化抗原或抗體的構(gòu)象第十四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六第四節(jié)抗原抗體結(jié)合反應的特點特異性可逆性比例性階段性第十五頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六

親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體示意圖親水膠體疏水膠體可見反應第十六頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六一、特異性抗原抗體反應特異性示意圖第十七頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六特異性示意圖第十八頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六交叉反應（crossreactions）抗原抗體交叉反應示意圖第十九頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六二、可逆性可逆性：抗原與相應抗體結(jié)合成復合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性影響因素：抗體對相應抗原的親合力環(huán)境因素對復合物的影響第二十頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六

【Ag】+【Ab】【Ag-Ab】

解離后抗原抗體仍保持原有特性。一定條件：低pH、高濃度鹽等。Ab1第二十一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應需遵循一定的量比關系最適比：沉淀物最多時的抗原抗體的濃度比或量比等價帶:

抗原與抗體分子比例合適范圍前帶：

抗體過量后帶：

抗原過量三、比例性第二十二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六

抗原抗體反應比例性示意圖第二十三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六四、階段性第一階段：特異性結(jié)合階段第二階段：反應可見階段第二十四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六第五節(jié)影響抗原抗體結(jié)合反應的因素抗原抗體本身因素反應基質(zhì)因素實驗環(huán)境因素第二十五頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六一、抗原抗體本身因素抗原:理化性狀、表位種類和數(shù)目抗體:來源、特異性、親和性、效價第二十六頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六來源R型Ab：等價帶寬，易出現(xiàn)可見反應。H型Ab：等價帶窄，易出現(xiàn)前帶或后帶McAb:不宜用于凝集和沉淀反應。濃度：是相對Ag而言，比例要合適，故實驗前

需滴定，以求最適Ag與Ab比例。

特異性與親和力：關鍵因素，選擇特異性與親和力高的Ab。第二十七頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六二、反應基質(zhì)因素非特異性因素，如蛋白、鹽、藥物等第二十八頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六三、實驗環(huán)境因素電解質(zhì):0.85%生理鹽水或緩沖液酸堿度:pH6~8溫度:37℃最適第二十九頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六(一）電解質(zhì)作用：中和膠體表面電荷，破壞水化層，使Ag-Ab聚集。常用：0.85%NaCl溶液，緩沖液、Ca2+、Mg2+等。第三十頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六（二）酸堿度

抗原抗體反應中一般以pH6-8為宜，有補體參與的反應最適pH為7.2-7.4酸凝集：當pH為3左右時，接近細菌Ag的等電點，可出現(xiàn)非特異性凝集。第三十一頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六（三）溫度

最適溫度為37℃或室溫18-25℃為宜。若溫度高于56℃，可導致已結(jié)合了的抗原抗體復合物解離，甚至分子變性。第三十二頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六抗原抗體反應類型反應類型實驗技術(shù)結(jié)果判斷凝集反應直接凝集試驗觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗同上抗球蛋白試驗同上沉淀反應液相沉淀試驗觀察沉淀，檢測濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補體參與的反應補體溶血試驗觀察測定溶血現(xiàn)象補體結(jié)合試驗同上第三十三頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六反應類型實驗技術(shù)結(jié)果判斷中和反應病毒中和試驗檢測病毒感染性毒素中和試驗檢測外毒素毒性標記免疫反應熒光免疫技術(shù)檢測熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測放射性強度酶免疫技術(shù)檢測酶底物顯色發(fā)光免疫技術(shù)檢測發(fā)光強度金免疫技術(shù)檢測金顆粒沉淀第三十四頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六標記免疫技術(shù)用熒光物質(zhì)、放射性核素、酶或化學發(fā)光物質(zhì)等標記抗原或抗體，進行抗原抗體反應后，通過檢測標記物對抗原或抗體進行定性、定位或定量分析第三十五頁，共三十七頁，編輯于2023年，星期六思考題1．抗原抗體結(jié)合反應的原理？2．抗原抗體的結(jié)合力有哪些？3．抗原抗體結(jié)合反應的特點？