動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體的制備演示文稿

動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體的制備演示文稿當(dāng)前第1頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體的制備當(dāng)前第2頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)

2002年12月30日，

兩場(chǎng)籌備了10年的“太空婚禮”首次在神舟四號(hào)飛船上舉行，植物細(xì)胞“新人”—黃花煙草和革新一號(hào)煙草葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體，動(dòng)物細(xì)胞“新人”是小鼠B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞，兩批新人同時(shí)在“產(chǎn)房”—電融合儀內(nèi)孕育新生命?！疤栈槎Y”這兩場(chǎng)“太空婚禮”實(shí)質(zhì)是哪兩項(xiàng)細(xì)胞工程技術(shù)？植物體細(xì)胞雜交技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)當(dāng)前第3頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物體細(xì)胞雜交過程示意圖當(dāng)前第4頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)材料1:1970年，有兩位科學(xué)家做了一個(gè)人—鼠細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)，以證明細(xì)胞膜的流動(dòng)性。那么，如何實(shí)現(xiàn)人—鼠細(xì)胞的融合，動(dòng)物細(xì)胞融合后還有什么用途呢？人-鼠(想像圖)當(dāng)前第5頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)A細(xì)胞B細(xì)胞人工誘導(dǎo)1.1動(dòng)物細(xì)胞融合的概念雜交細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜交）：是指兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞融合形成一個(gè)單核細(xì)胞的過程。一、動(dòng)物細(xì)胞融合當(dāng)前第6頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)閱讀課本P52及識(shí)圖2-23，并完成學(xué)案第1頁【學(xué)習(xí)過程】當(dāng)前第7頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)細(xì)胞膜的流動(dòng)性滅活病毒、PEG、電激等融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，形成完整的雜交細(xì)胞誘導(dǎo)的手段？融合后細(xì)胞的類型？AB雜種細(xì)胞遺傳物質(zhì)有什么特點(diǎn)？三種AA、AB、BB（A、B）含兩種生物的遺傳物質(zhì)1.2動(dòng)物細(xì)胞融合過程原理？當(dāng)前第8頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)1.2動(dòng)物細(xì)胞融合過程為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑？滅活喪失感染性保留融合活性當(dāng)前第9頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)1.3動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用當(dāng)前第10頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)比較項(xiàng)目細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)手段用途植物體細(xì)胞雜交細(xì)胞膜的流動(dòng)性纖維素酶、果膠酶去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離心、電刺激、振動(dòng)、聚乙二醇克服遠(yuǎn)源雜交不親和，獲得雜種植株動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞膜的流動(dòng)性用胰蛋白酶使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手段外，還有滅活病毒獲得雜種細(xì)胞、制備單克隆抗體1.4比較動(dòng)、植物細(xì)胞雜交技術(shù)當(dāng)前第11頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)學(xué)習(xí)·探究區(qū)本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第12頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)學(xué)習(xí)·探究區(qū)本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第13頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)學(xué)習(xí)·探究區(qū)本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第14頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)學(xué)習(xí)·探究區(qū)本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第15頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)強(qiáng)調(diào)：效應(yīng)B淋巴細(xì)胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞，下文將其簡(jiǎn)稱為B淋巴細(xì)胞抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是漿細(xì)胞（即效應(yīng)B細(xì)胞）。溫故知新二、單克隆抗體B淋巴細(xì)胞效應(yīng)B淋巴細(xì)胞記憶B淋巴細(xì)胞分化當(dāng)前第16頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原反復(fù)注射動(dòng)物從動(dòng)物的血清中分離抗體該法制備抗體的缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。如何解決這個(gè)問題呢？單克隆抗體！當(dāng)前第17頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念

人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每個(gè)B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。2.1單克隆抗體的概念單克隆抗體：?jiǎn)蝹€(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體當(dāng)前第18頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)提示1：對(duì)B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請(qǐng)嘗試設(shè)計(jì)一個(gè)方案。2.2單克隆抗體的制備

當(dāng)前第19頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖的細(xì)胞1975年英國(guó)科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實(shí)驗(yàn)當(dāng)前第20頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)①為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白？②會(huì)有幾種融合方式？③雜交瘤細(xì)胞是如何篩選出來的？有何特點(diǎn)？④是否所有的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生專一性抗體？⑤如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？當(dāng)前第21頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細(xì)胞才能存活獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細(xì)胞（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞√體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。當(dāng)前第22頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)當(dāng)前第23頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)①細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。②人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，可是能不斷分裂增殖。你想到篩選雜交瘤細(xì)胞的方案了么？小資料：當(dāng)前第24頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖細(xì)胞！

加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖，但人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜種細(xì)胞因?yàn)榭梢岳昧馨图?xì)胞中的S途徑合成DNA而增殖。當(dāng)前第25頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)

通常采用有限稀釋克隆細(xì)胞的方法，將雜交瘤細(xì)胞多倍稀釋，接種在多孔細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)②再篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞答案2．用流程圖形式寫出單克隆抗體的制備過程當(dāng)前第26頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)單抗制備過程分哪幾步？請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？

你學(xué)會(huì)了嗎？當(dāng)前第27頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)學(xué)習(xí)·探究區(qū)本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第28頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)學(xué)習(xí)·探究區(qū)本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第29頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)學(xué)習(xí)·探究區(qū)本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第30頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)2.3單克隆抗體的應(yīng)用診斷試劑——最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。當(dāng)前第31頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭治療疾病和運(yùn)載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞。當(dāng)前第32頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)兩個(gè)過程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)本節(jié)小結(jié)重點(diǎn)當(dāng)前第33頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)學(xué)習(xí)·探究區(qū)兩個(gè)或多

一生物膜的流動(dòng)性聚乙二醇誘導(dǎo)、滅活的病毒誘導(dǎo)、電刺激有性雜交單克隆抗體B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體理化性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)、靈敏度高，并能大量制備本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第34頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)自我·檢測(cè)區(qū)本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第35頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)自我·檢測(cè)區(qū)本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第36頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)自我·檢測(cè)區(qū)D

本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第37頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)自我·檢測(cè)區(qū)B

本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第38頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)自我·檢測(cè)區(qū)本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第39頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)自我·檢測(cè)區(qū)本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第40頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)自我·檢測(cè)區(qū)本課時(shí)欄目開關(guān)知識(shí)·儲(chǔ)備區(qū)學(xué)習(xí)·探究區(qū)自我·檢測(cè)區(qū)當(dāng)前第41頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)謝謝當(dāng)前第42頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)(1)若A細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞，則B細(xì)胞是取自小鼠體內(nèi)的

細(xì)胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前，應(yīng)給小鼠注射_____________類物質(zhì)。（2）d過程是一個(gè)_____________過程，該過程的進(jìn)行常用_____________或_____________的誘導(dǎo)。(3)假設(shè)僅考慮某兩個(gè)細(xì)胞的融合，則可形成

種類型的C細(xì)胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細(xì)胞用于培養(yǎng)，D細(xì)胞的名稱是

，其特點(diǎn)是_________________________________________。效應(yīng)B

抗原

細(xì)胞融合

聚乙二醇滅活的病毒

選擇性3既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體

雜交瘤細(xì)胞當(dāng)前第43頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)(4)在培養(yǎng)時(shí)通過________分裂方式大量繁殖。D細(xì)胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5項(xiàng)）__________________________________。（5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預(yù)防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點(diǎn)是_________________。特異性強(qiáng)、靈敏度高

有絲無菌、無毒的環(huán)境；充足的營(yíng)養(yǎng)；適宜的溫度和pH；適宜的氣體環(huán)境

當(dāng)前第44頁\共有45頁\編于星期五\18點(diǎn)15、（1）單克隆抗體是指

。（2）制備單克隆抗體的步驟：①將__________注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細(xì)胞，其中至少1個(gè)淋巴細(xì)胞帶有抗該抗原的抗體。②將步驟①獲得的B淋巴細(xì)胞與步驟②培養(yǎng)的骨髓瘤細(xì)胞在___