染色體核型分析

染色體標本制備及核型分析染色體核型分析質量保障部Faye當前第1頁\共有36頁\編于星期四\18點一、名詞解釋二、染色體標本制備三、染色體核型分析實驗耗材前期處理實驗步驟玻片標本質量評價計數(shù)標準、合格指標染色體核型排列核型檢測的可重復性當前第2頁\共有36頁\編于星期四\18點一、名詞解釋核型分裂相一個體細胞中的全部染色體，按其大小、形態(tài)特征順序排列所構成的圖像。小鼠：♂40，XY、♀40，XX人類：♂46，XY

、♀

46，XX細胞分裂過程中每個時期的細胞形態(tài)特征，包括細胞的總體形狀和遺傳物質的變化。當前第3頁\共有36頁\編于星期四\18點一、名詞解釋數(shù)量變異（性染色體丟失/增加、近端著絲粒染色體三體）（中期）分裂相

核型結構變異（缺失、重復、倒位、易位）當前第4頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備實驗耗材儀器設備：超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、離心機、光學顯微鏡、刻度離心管、乳頭吸管、棕色試劑瓶、載玻片、吹風機、玻片架、染色缸主要試劑：秋水仙素、低滲液、卡諾氏固定液、吉姆薩染液、胰酶、1NHCl、1NNaOH、MEF培養(yǎng)基、PBS當前第5頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備前期處理

樣品要求：對數(shù)期生長，狀態(tài)良好，緊密度高，折光性好，細胞量≥T25/60mm平皿差速貼壁法去除MEF（KSR培養(yǎng)體系除外）終止培養(yǎng)前1~2小時，加入秋水仙素（100ug/ml），最終濃度為0.1~0.2ug/ml。作用：破壞紡錘體防護：有劇毒、無揮發(fā)性因素：時間、濃度當前第6頁\共有36頁\編于星期四\18點當前第7頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備固定細胞收獲制片預固定低滲處理實驗步驟當前第8頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備細胞收獲制片固定預固定低滲處理消化并收集細胞至離心管，吹打成單細胞懸液，250g，5min離心，棄上清實驗步驟當前第9頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備細胞收獲制片固定預固定低滲處理加入37℃預熱的低滲液（0.075mol/L）5ml，吹打至均勻，37℃水浴15-20min。實驗步驟當前第10頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備細胞收獲制片固定預固定低滲處理加入37℃預熱的低滲液（0.075mol/L）5ml，吹打至均勻，37℃水浴15-20min。實驗步驟配制：0.075mol/LKCl溶液作用：低滲作用因素：時間、溫度、濃度當前第11頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備細胞收獲制片固定預固定低滲處理實驗步驟離心棄上清，將細胞沉淀震蕩懸浮或氣泡吹打法輕柔地重懸細胞。沿管壁緩慢加入固定液0.5-1.0mL，邊滴加邊震蕩均勻，靜置5min后離心棄上清。當前第12頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備細胞收獲制片固定預固定低滲處理實驗步驟離心棄上清，將細胞沉淀震蕩懸浮或氣泡吹打法輕柔地重懸細胞。沿管壁緩慢加入固定液0.5-1.0mL，邊滴加邊震蕩均勻，靜置5min后離心棄上清。配制：甲醇：冰乙酸=3：1，現(xiàn)用現(xiàn)配。作用：固定并維持染色體結構的完整性防護：甲醇→毒性，冰乙酸→刺激性和腐蝕性當前第13頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備細胞收獲制片固定預固定低滲處理實驗步驟（1）加入3ml固定液，靜置30min，離心棄上清；（2）再次加入3ml固定液，吹打均勻并靜置30min當前第14頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備細胞收獲制片固定預固定低滲處理實驗步驟離心棄上清液，根據(jù)細胞數(shù)量情況，加入1~2mL固定液，吹打細胞制成懸液，懸液呈微白色時為最佳。當前第15頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備細胞收獲制片固定預固定低滲處理實驗內容用滴管吸取細胞懸液，高空滴在冰凍玻片上，立即在酒精燈的火焰下過火幾次，置80℃烤箱中烤片2h。當前第16頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備細胞收獲制片固定預固定低滲處理實驗步驟用滴管吸取細胞懸液，高空滴在冰凍玻片上，立即在酒精燈的火焰下過火幾次，置80℃烤箱中烤片2h。要求：潔凈、冰凍處理：逐片清洗（洗潔精→超聲波→自來水→純水），95%乙醇浸泡24h，純水逐片刷洗，放置于裝有純水的器皿中，4℃保存。當前第17頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備細胞收獲制片固定預固定低滲處理實驗步驟預熱胰蛋白酶消化25-30s，Giemsa染色10min。清水沖洗染液，用吹風機吹干。當前第18頁\共有36頁\編于星期四\18點二、染色體標本制備細胞收獲制片固定預固定低滲處理實驗步驟預熱胰蛋白酶消化25-30s，Giemsa染色10min。清水沖洗染液，用吹風機吹干。要求：0.25%，pH6.8～7.2作用：去除染色體上的蛋白質，便于染色。配制：Giemsa原液：磷酸緩沖液（pH7.4）=1：9，現(xiàn)用現(xiàn)配。當前第19頁\共有36頁\編于星期四\18點三、染色體核型分析玻片標本質量評價玻片顏色藍紫色玫紅色著色淺√解決方案配制新的染液；適當提高胰酶消化玻片的時間。當前第20頁\共有36頁\編于星期四\18點三、染色體核型分析玻片標本質量評價細胞密度過密適中過稀√解決方案制備玻片時，對每一個樣品都先進行試片，并在鏡下觀察細胞密度，從而調整懸液密度。當前第21頁\共有36頁\編于星期四\18點三、染色體核型分析玻片標本質量評價分裂相密度足夠稀少√解決方案適當提高固定液中冰醋酸比例；制備較多的玻片當前第22頁\共有36頁\編于星期四\18點三、染色體核型分析玻片標本質量評價分裂相形態(tài)-緊密度過密適中過散解決方案過密：適當提高固定液中冰醋酸比例；過散：適當降低固定液中冰醋酸比例?！坍斍暗?3頁\共有36頁\編于星期四\18點三、染色體核型分析玻片標本質量評價分裂相形態(tài)過密適中過散解決方案過密：適當提高固定液中冰醋酸比例，增加滴片高度；過散：適當降低固定液中冰醋酸比例，減小滴片高度。√當前第24頁\共有36頁\編于星期四\18點三、染色體核型分析玻片標本質量評價分裂相形態(tài)解決方案盡量將細胞吹打成單細胞懸液；滴片時勿重復滴加同一區(qū)域。重疊當前第25頁\共有36頁\編于星期四\18點三、染色體核型分析玻片標本質量評價染色體形態(tài)適中短小過長扭曲交聯(lián)消化過度√當前第26頁\共有36頁\編于星期四\18點三、染色體核型分析計數(shù)標準合格指標分裂相需完整獨立，染色體不過于松散，周圍無其他距離很近的分裂相。染色體形態(tài)適中，不過度短小或纖長，染色體彼此間無交聯(lián)纏繞或者交聯(lián)的染色體能明確的區(qū)分。染色體G顯帶普遍較清晰，質檢人員能夠精確的判斷核型位置。計數(shù)30個分裂相，正常比例≥50%→數(shù)量是否異常暫不涉及核型排列→結構是否異常當前第27頁\共有36頁\編于星期四\18點三、染色體核型分析染色體核型排列當前第28頁\共有36頁\編于星期四\18點三、染色體核型分析染色體核型排列當前第29頁\共有36頁\編于星期四\18點三、染色體核型分析染色體核型排列當前第30頁\共有36頁\編于星期四\18點三、染色體核型分析染色體核型排列當前第31頁\共有36頁\編于星期四\18點正常：46，X