細(xì)胞因子與粘附因子檢測(cè)

細(xì)胞因子與粘附因子檢測(cè)第一頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一復(fù)習(xí)1.T細(xì)胞增殖試驗(yàn)的原理、刺激物？2.T細(xì)胞增殖試驗(yàn)的主要方法？3.T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)主要方法？第二頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一掌握：細(xì)胞因子、粘附分子概念；臨床常用的測(cè)定方法熟悉：細(xì)胞因子的特性與功能；了解：其他第三頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一第一節(jié)概述第二節(jié)臨床常用的測(cè)定方法第三節(jié)細(xì)胞因子與黏附分子測(cè)定的臨床應(yīng)用第四頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一第一節(jié)

概述細(xì)胞因子(cytokine)

是由免疫細(xì)胞及組織細(xì)胞表達(dá)并分泌，通過(guò)結(jié)合細(xì)胞表面的相應(yīng)受體，在細(xì)胞間發(fā)揮相互調(diào)控作用的一類(lèi)小分子蛋白質(zhì)或多肽。掌握第五頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一1.細(xì)胞因子的種類(lèi)

白細(xì)胞介素（IL）干擾素（IFN）集落刺激因子（CSF）腫瘤壞死因子（TNF）生長(zhǎng)因子（GF）趨化因子一、細(xì)胞因子及其受體的特性與功能熟悉第六頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一自分泌內(nèi)分泌血液循環(huán)遠(yuǎn)距離作用旁分泌作用于比鄰細(xì)胞細(xì)胞因子發(fā)揮作用的三種方式作用于分泌細(xì)胞自身2.細(xì)胞因子的共同特性與生物學(xué)功能熟悉第七頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一高效性、多效性、重疊性、網(wǎng)絡(luò)性、協(xié)同性、拮抗性迅速高效性非特異性

2.細(xì)胞因子的共同特性熟悉第八頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一肥大細(xì)胞胸腺細(xì)胞BIL-4活化、增殖、分化增殖

增殖

多效性第九頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一IL-2、IL-4、IL-5IL-4+IL-5IL-4IFN-拮抗性重疊性協(xié)同性均有刺激B細(xì)胞增殖的功能更有效地誘導(dǎo)IgE類(lèi)別轉(zhuǎn)換IL-4阻斷IFN-誘導(dǎo)類(lèi)別轉(zhuǎn)化的作用BBB第十頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一2.細(xì)胞因子的生物學(xué)功能參與調(diào)控免疫細(xì)胞的發(fā)育、分化和功能參與調(diào)控免疫應(yīng)答抗感染抗腫瘤誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡了解第十一頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一3、細(xì)胞因子受體的共同特性細(xì)胞因子發(fā)揮作用：

細(xì)胞因子與靶細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合細(xì)胞因子受體結(jié)構(gòu)：胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)組成細(xì)胞因子家族：Ⅰ型細(xì)胞因子受體家族、Ⅱ型細(xì)胞因子受體家族、腫瘤壞死因子受體超家族、免疫球蛋白受體超家族、趨化因子受體家族。了解第十二頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一第十三頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一二、

黏附分子的特性與功能黏附分子（AM）是介導(dǎo)細(xì)胞間或細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間相互結(jié)合的分子。掌握第十四頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一1.黏附分子的特性

黏附分子均為跨膜糖蛋白，由胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)三部分組成，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)可分為免疫球蛋白超家族、整合素家族、選擇素家族和鈣黏蛋白家族。了解第十五頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一2.黏附分子的主要生物學(xué)功能參與細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與活化、細(xì)胞分化及發(fā)育參與免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)、淋巴細(xì)胞歸巢、傷口愈合與血栓形成、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡等功能了解第十六頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一B細(xì)胞與Th細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞粘附分子第十七頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一第二節(jié)臨床常用的測(cè)定方法一、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法二、化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗(yàn)三、流式細(xì)胞分析法四、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)五、免疫學(xué)測(cè)定方法學(xué)評(píng)價(jià)第十八頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一

基因水平：PCR技術(shù)。檢測(cè)水平生物活性測(cè)定

蛋白水平

免疫學(xué)測(cè)定

第二節(jié)臨床常用的測(cè)定方法掌握第十九頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一

生物活性測(cè)定：測(cè)活性。靈敏性高,特異性低蛋白水平ELISA

免疫學(xué)測(cè)定化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗(yàn)

（含量）流式細(xì)胞術(shù)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)

第二節(jié)臨床常用的測(cè)定方法掌握第二十頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一一、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（一）基本方法1.直接法---雙抗體夾心法

（測(cè)CK最常用方法）2.間接法3.抗原競(jìng)爭(zhēng)法熟悉第二十一頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一敏感性偏低不能區(qū)分細(xì)胞因子的生物學(xué)活性（二）方法學(xué)評(píng)價(jià)特異、簡(jiǎn)便成本低、易于推廣和標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)可同時(shí)檢測(cè)大量標(biāo)本且試驗(yàn)廢棄物便于處理細(xì)胞因子測(cè)定的首選方法缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)了解第二十二頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一二、化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗(yàn)是以發(fā)光劑作為酶免疫測(cè)定的底物，通過(guò)發(fā)光反應(yīng)增強(qiáng)測(cè)定的靈敏度。（一）基本方法雙抗體夾心法（二）方法學(xué)評(píng)價(jià)特異性好、靈敏度高、線(xiàn)性范圍寬、試劑穩(wěn)定、可自動(dòng)化檢測(cè)了解第二十三頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一三、流式細(xì)胞術(shù)（flowcytometry,FCM)分離和培養(yǎng)待檢細(xì)胞細(xì)胞破膜與固定封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)染色與分析基本方法了解第二十四頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一方法學(xué)評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)：特異、高效、靈敏.應(yīng)用:對(duì)單個(gè)細(xì)胞水平CK或AM檢測(cè)；檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)CK；膜上AM、CK受體同一細(xì)胞內(nèi)兩種以上細(xì)胞因子表達(dá)

熟悉第二十五頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一四、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(ELISPOT)

包被有待測(cè)細(xì)胞因子抗體的微孔板

分泌相應(yīng)細(xì)胞因子的待測(cè)細(xì)胞

有或無(wú)刺激物培養(yǎng)細(xì)胞因子被板上的特異性抗體捕獲后續(xù)的反應(yīng)如同ELISA一個(gè)斑點(diǎn)代表一個(gè)細(xì)胞因子分泌細(xì)胞，斑點(diǎn)的顏色深淺程度與細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子量相關(guān)

基本原理+了解第二十六頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一第二十七頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一方法學(xué)評(píng)價(jià)比常規(guī)ELISA法的靈敏度提高200倍應(yīng)用：檢測(cè)分泌特定細(xì)胞因子的細(xì)胞熟悉第二十八頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一五、免疫學(xué)測(cè)定方法學(xué)評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)：

特異性高操作簡(jiǎn)便、快速，無(wú)需依賴(lài)細(xì)胞株影響因素較少且易控制，重復(fù)性好，方法容易標(biāo)準(zhǔn)化。缺點(diǎn)：

所測(cè)定含量，與其生物活性不一定呈正比結(jié)果與所用的抗體來(lái)源及親和力有很大的關(guān)系

敏感性相對(duì)較低標(biāo)本中可溶性受體，會(huì)影響特異性抗體對(duì)細(xì)胞因子結(jié)合熟悉第二十九頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一第三節(jié)細(xì)胞因子與黏附分子測(cè)定的臨床應(yīng)用1.特定疾病的輔助診斷2.機(jī)體免疫狀態(tài)的評(píng)估3.臨床疾病治療效果的監(jiān)測(cè)和指導(dǎo)用藥4.疾病預(yù)防的應(yīng)用熟悉第三十頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一一、臨床應(yīng)用原則方法選擇和結(jié)果判斷作出綜合考慮:

異質(zhì)性

功能交叉性和多樣性

來(lái)源的復(fù)雜性

組織細(xì)胞的非特異性細(xì)胞因子和粘附分子第三十一頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一

全身免疫或炎癥狀態(tài)——血漿、血清炎癥局部細(xì)胞因子的水平——局部分泌液細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的特性——外周單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞表面細(xì)胞因子受體或黏附分子定位檢測(cè)疾病療效觀察和預(yù)后判斷1.標(biāo)本的適當(dāng)選取第三十二頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一敏感性高-------特異性低，廢棄物難處理活性測(cè)定-------不能精確蛋白定量基因分析-------操作繁瑣，有助于疾病分析多種方法—綜合分析—正確評(píng)價(jià)

2.方法的聯(lián)合應(yīng)用第三十三頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一意義：細(xì)胞因子具有網(wǎng)絡(luò)狀調(diào)節(jié)的特點(diǎn)級(jí)聯(lián)效應(yīng)或相互抑制作用的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)有助于提供有效的疾病診斷和機(jī)體免疫狀態(tài)信息舉例：免疫細(xì)胞分泌：IL-1、IL-2、IFN-γ和GM-CSFTh1/Th2細(xì)胞平衡狀態(tài)：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ3.細(xì)胞因子的聯(lián)合檢測(cè)第三十四頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一二、特定疾病的輔助診斷（一）細(xì)胞因子與疾病1.細(xì)胞因子風(fēng)暴—IL-1、IL-2、IL-6、IFN-γ等

引發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征2.變態(tài)反應(yīng)性疾病—哮喘IL-4促進(jìn)IgE合成3.自身免疫病—類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、MCP-1）第三十五頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一（一）細(xì)胞因子與疾病4.免疫缺陷病—IL-2Rγ基因缺陷（重癥聯(lián)合免疫缺陷?。?；IL-6（漿細(xì)胞瘤、膀胱癌）5.器官移植排斥反應(yīng)—TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6、IFN-γ水平升高6.惡性腫瘤—檢測(cè)IL-2、IL-6、IFN-γ水平用于療效的評(píng)估第三十六頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一（二）黏附分子與疾病1.動(dòng)脈粥樣硬化——ICAM、P-選擇素2.腎臟疾病——ICAM3.肝臟疾病---VCAM-1、ICAM-1、IL-14.自身免疫病----SLE（E-選擇素、ICAM-1）類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（E-選擇素）

第三十七頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一三、評(píng)估機(jī)體的免疫狀態(tài)機(jī)體免疫應(yīng)答的強(qiáng)弱作為觀察治療效果和判斷預(yù)后的重要指標(biāo)對(duì)保證治療效果具有指導(dǎo)意義第三十八頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一四、疾病療效檢測(cè)及指導(dǎo)用藥根據(jù)患者相關(guān)細(xì)胞因子水平或免疫狀態(tài)的檢測(cè)結(jié)果選擇細(xì)胞因子的種類(lèi)和劑量。細(xì)胞因子水平過(guò)表達(dá)/可溶性黏附分子增高使用相應(yīng)的細(xì)胞因子拮抗劑或抗體第三十九頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一1．細(xì)胞因子和細(xì)胞粘附分子的概念？細(xì)胞因子可分為幾類(lèi)？2．臨床檢測(cè)中常用細(xì)胞因子與細(xì)胞黏附分子的免疫學(xué)檢測(cè)方法有哪些？3．細(xì)胞因子及黏附分子檢測(cè)的臨床意義是什么？思考題第四十頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一1.細(xì)胞外可溶性黏附分子主要測(cè)定法是()

A.ELISAB.酶免疫組化法

C.熒光免疫法D.流式細(xì)胞儀測(cè)定法

E.時(shí)間分辨熒光免疫法2.下列對(duì)FCM檢測(cè)細(xì)胞因子的描述中錯(cuò)誤的是()A.靈敏度高B.可測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子

C.特異性高D.單細(xì)胞水平分析

E.mRNA表達(dá)水平3．用ELISA方法測(cè)定細(xì)胞因子，錯(cuò)誤的是()

A.特異性高B.可測(cè)活性

C.操作簡(jiǎn)便D.可定量分析E.時(shí)間短4.在檢測(cè)可溶性黏附分子中，ELISA常用()

A.直接法B.間接法C.夾心法D.競(jìng)爭(zhēng)法E.組化法AEBC第四十一頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一5.不屬于細(xì)胞因子特點(diǎn)的是()

A.分泌型蛋白質(zhì)B.自分泌C.低分子量D.不受MHC限制E.半衰期長(zhǎng)6.黏附分子作用是()

A.細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)與活化B.細(xì)胞的伸展與轉(zhuǎn)移

C.細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化D.創(chuàng)傷的愈合

E.以上都是7.慢性肝炎的急性期和活動(dòng)期水平顯著升高,而穩(wěn)定期和恢復(fù)期有明顯下降的細(xì)胞因子()A.TNF和IL-6B.TNF和IL-10C.TNF和EPOD.GM-CSF和EPOE.GM-CSF和IL-6EEA第四十二頁(yè)，共四十三頁(yè)，編輯于2023年，星期一8.細(xì)胞因子生物學(xué)測(cè)定法最重要的優(yōu)點(diǎn)是()A.高特異性B.