抗核抗體譜免疫印跡法課件

抗核抗體譜檢測及其臨床意義課程章節(jié)單擊添加文本……抗核抗體譜的定義1單擊添加文本……自身免疫性疾病與ANAs的相關性2抗核抗體譜的免疫印跡法原理抗核抗體譜的臨床意義抗核抗體譜的檢測及意義3抗核抗體譜的定義第一章單擊添加文本……抗核抗體譜的定義1抗核抗體譜的定義傳統(tǒng)定義：針對細胞核成分的自身抗體的總稱。多核苷酸：dsDNA，ssDNA，RNA組蛋白：H1,H2A,H2B,H3,H4,H2A-H2B復合體核漿中的核糖核蛋白（ENA）：Sm,nRNP,SSA/Ro,SSB/La核仁抗原：U3-nRNP/Fibrillaria，PM-Scl/PM-1，7-2-RNP/To，4-6-S-RNA著絲點：著絲點蛋白其他蛋白：Scl-70,PCNA，核點,Mi-1,Mi-2,Ku，板層素，NOR-90根據細胞核內靶抗原分子理化特性和分布部位分類：抗核抗體譜的定義廣義定義：指抗細胞內所有抗原成分的自身抗體的總稱。對ANA的理解已不再局限于核成分，而是指抗核酸（nucleicacid）和核蛋白（nucleoprotein）抗體的總稱。整個細胞，包括細胞核、細胞漿、細胞骨架、細胞分裂周期蛋白等。自身免疫性疾病與ANAs的相關性第二章單擊添加文本……自身免疫性疾病與ANAs的相關性2慢性炎癥性結締組織病干燥綜合征(SS)SS-AandSS-B慢性炎癥性結締組織病(CICTD)夏普綜合征(MCTD)nRNP系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)dsDNA慢性炎癥性結締組織病(CICTD)系統(tǒng)性硬化癥(SSc)Scl-70andCenpB多肌炎/皮肌炎(PM/DM)MyositisProfileANCA相關性血管炎系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種多發(fā)于青年女性的累及多臟器的自身免疫性炎癥性結締組織病，早期、輕型和不典型的病例日漸增多。有些重癥患者（除患者有彌漫性增生性腎小球腎炎者外），有時亦可自行緩解。有些患者呈“一過性”發(fā)作，經過數月的短暫病程后疾病可完全消失。系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）關節(jié)炎(至少2個關節(jié)以上受累;96%)血液系統(tǒng)受累(貧血等;

60%)狼瘡腎炎(51%)漿膜炎(胸膜炎,心包炎;

77%)神經系統(tǒng)受累(30%)皮膚(蝴蝶狀皮疹,盤狀狼瘡;

74%)SLE在臨床上各器官受累的表現ANAs與系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的相關性系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）中的自身抗體抗原陽性率雙鏈DNA60-90%單鏈DNA70-95%RNA50%組蛋白95%U1-nRNP15-40%Sm5-40%SS-A（Ro）20-60%SS-B（La）10-20%細胞周期蛋白（PCNA）3%Ku10%核糖體P蛋白（rRNP）10%熱休克蛋白90kDA：Hsp-9050%心磷脂40-60%類風濕關節(jié)炎（RA）

類風濕關節(jié)炎（RA）是一種病因未明的慢性、以炎性滑膜炎為主的系統(tǒng)性疾病。其特征是手、足小關節(jié)的多關節(jié)、對稱性、侵襲性關節(jié)炎癥，經常伴有關節(jié)外器官受累及血清類風濕因子陽性，可以導致關節(jié)畸形及功能喪失。ANAs與類風濕關節(jié)炎（RA）的相關性類風濕關節(jié)炎中的抗核抗體抗原陽性率組蛋白15-50%單鏈DNA（ssDNA）8%U1-nRNP3%RANA90-95%干燥綜合征（SS）腮腺腫脹口腔干燥外分泌腺受累的自身免疫疾病癥狀:-口腔干燥

-唾液及眼淚減少

-腮腺腫脹

-胰腺外分泌腺分泌不足ANAs與干燥綜合征（SS）的相關性原發(fā)性干燥綜合征中的自身抗體抗原陽性率SS-A（Ro）40-95%SS-B（La）40-95%單鏈DNA（ss-DNA）13%RANA70%唾液腺分泌管40-60%類風濕因子60-80%多發(fā)性肌炎（PM）及皮肌炎（DM）皮膚與肌肉受累的自身免疫疾病癥狀:-肌肉疼痛/肌無力(如：肩膀/骨盆)皮膚癥狀:膝蓋/手指關節(jié)處皮膚異變紅斑皮膚褪色ANAs與多發(fā)性肌炎（PM）及皮肌炎（DM）的相關性多肌炎和皮肌炎抗原陽性率PM-Scl（PM-1）50-70%Jo-1（組氨酰-tRNA合成酶）25-35%Mi-110%Mi-25%Ku50%單鏈AND（ss-DNA）40-50%PL-7（蘇氨酰-tRNA合成酶）4%PL-12（丙氨酰-tRNA合成酶）3%進行性系統(tǒng)性硬化癥（SSc）指端硬化，爪型手面具臉毛細血管擴張

皮膚鈣質沉著血管與結締組織受累的自身免疫疾病癥狀: -指端硬化(thin,scleroticfingers) -爪型手

-面具臉(嘴周邊出現皺紋,嘴唇變薄) -毛細血管擴張(表面血管永久性擴張) -表皮鈣質沉著(血管壁與皮膚鈣化)ANAs與進行性系統(tǒng)性硬化癥（SSc）的相關性彌漫性進行性系統(tǒng)性硬化癥（DSSC）抗原陽性率原纖維蛋白5-10%PM-Scl（PM-1）50-70%Scl-7025-75%RNA多聚酶Ⅰ4%7-2-RNP（To）罕見NOR-90（核仁形成區(qū)）罕見局限性進行性系統(tǒng)性硬化癥（LSSC）抗原陽性率著絲點80-95%抗核抗體譜的檢測及意義第三章抗核抗體譜的免疫印跡法原理抗核抗體譜的臨床意義抗核抗體譜的檢測及意義3抗核抗體譜的免疫印跡法原理抗核抗體譜的檢測采用免疫印跡法（ImmunoblottingTest,IBT）,用于定性檢測人血清中抗核抗體譜共15中抗體。條膜上平行包被了經純化的抗核抗體譜中要檢測的抗原及質控帶。第一次孵育時，已稀釋的病人樣本與膜條上的抗原反應。如果樣本陽性，特異性的IgG抗體將與相應的抗原結合。為檢測已結合的抗體，在加入酶標羊抗人IgG（堿性磷酸酶結合物）第二次孵育，然后加入底物液以產生藍紫色顏色反應。抗核抗體譜的免疫印跡法原理抗U1-nRNP與Sm抗體靶抗原：位于細胞核內的一組含尿嘧啶豐富的核糖核蛋白，Sm和U1RNP是同一分子復合物中的不同位點。Sm含有u1、u2和u4-u6，而nRNP(u1RNP)僅含u1RNA。也即抗Sm抗體陽性均伴有抗u1RNP抗體，而抗u1RNP抗體可以單獨存在?？筓1-nRNP與Sm抗體

抗Sm：SLE的標記性抗體，是前瞻性及回顧性診斷的指標。陽性率低：SLE（30%）抗U1RNP：多種CTD均可出現，與手指腫脹、雷諾現象、肌炎、指端硬化等相關，但腎炎發(fā)生率低。陽性率：40-60%，其中SLE(30-40%),SSc(14%),pSS(12%),PM/DM(15%)高滴度抗U1RNP+抗Sm-MCTD抗U1RNP+

抗Sm+SLE抗U1RNP-

抗Sm+實驗室誤差?U1RNP丟失?抗SS-A/Ro-52抗體RNA+SS-A(60kDa)hY-RNAhY-RNARNA+SS-A(60kDa)+Ro-52Boireetal.,1995:-Ro-52抗體不與SS-A抗原結合-純化的SS-A抗原不包含Ro-52抗SS-A/Ro-52抗體抗SS-A(60kDa)和抗Ro-52總是分開檢測!WHY？抗SS-A/Ro-52抗體-天然SS-A=RNA+SS-A60kDa蛋白質–無需Ro-52。

-Ro-52并非SLE或SS患者診斷所需抗體。-SS-A60和Ro-52抗原的混合包被會降低SSA抗體的疾病特異性。-歐蒙產品始終分別檢測SS-A60和Ro-52?？筍S-A/Ro-52抗體抗Ro-52抗體:不同組別中均可出現抗SS-B抗體在原發(fā)性SS病人中，抗SSA/Ro和抗SSB/La陽性率分別為60%和40%，它們是診斷干燥綜合征的血清學標志?？筍SB抗體較抗SSA抗體診斷干燥綜合征更為特異。免疫擴散法與免疫印跡法（WesternBlot）得出的結果常常不一致。SSA和抗SSB抗體陽性可造成新生兒狼瘡及嬰兒心臟傳導阻滯等先天性心臟病。抗SSA和抗SSB抗體常與血管炎、淋巴結腫大、白細胞減少、光過敏、皮損、紫癜等臨床癥狀相關?？筍S-A抗體and抗SS-B抗體SS-A

(Ro-60),

Ro-52

and

SS-B功能:RNA聚合酶III輔助蛋白抗SS-B抗體干燥綜合癥:SLE:新生兒狼瘡:40-95%10-20%

78%功能:調控RNA翻譯X抗SS-A

(60

kDa)抗體干燥綜合癥:SLE:新生兒狼瘡:40-95%20-60%

96%抗Ro-52

(52

kDa)抗體

非特異抗Scl-70抗體靶抗原：DNA拓樸異構酶I的降解產物主要存在核仁中。SSc的標記抗體，陽性率20-30%。多見于DSSc（彌漫型系統(tǒng)性硬化癥），病情進展快，提示預后不良。與ILD

（肺動脈高壓）、彌漫性皮膚硬化有關，而PAH（間質性肺病）少見。抗PM-Scl抗體常見于多肌炎與硬化癥的重疊癥狀中，在重疊癥狀中的陽性率為50%；也可以僅出現于多肌炎患者中，陽性率為8%,彌散性硬化癥中的陽性率為2%-5%?？笿o-1抗體靶抗原：組氨酸t(yī)RNA合成酶胞漿中的磷酸蛋白抗Jo-1抗體PM/DM的標記抗體，陽性率20-30%抗體效價與疾病活動性相關抗Jo-1抗體綜合征：急性發(fā)熱,對稱性關節(jié)炎,技工手,雷諾現象,肌炎（相對輕）,肺間質病變其他抗合成酶抗體：抗PL-7、抗PL-12、抗OJ、抗EJ面具臉毛細血管擴張

皮膚鈣質沉著抗CENP-B抗體主要靶抗原：著絲點蛋白-B多見于LSSc，病程緩慢，提示預后較好。CREST綜合征：軟組織鈣化（C）,雷諾現象（R）,食道功能障礙（E）,指端硬化（S）,毛細血管擴張（T），但并非標記抗體，也見于孤立性雷諾現象、SS、PBC、AIH等。國外文獻：與PAH相關，而ILD少見中國人群：未發(fā)現與PAH（肺動脈高壓）相關，但ILD（間質性肺疾?。┥僖姲滓聊龋踹w等.中國系統(tǒng)性硬化癥患者硬皮病相關自身抗體的檢測及其臨床意義.中華微生物學和免疫學雜志.2011（5）:452-455.抗PCNA抗體抗增殖細胞核抗原抗體（PCNA）抗核糖體P蛋白抗體為SLE的高特異性指標，陽性率在10-40%。SLE患者伴有狼瘡性腦病時，此抗體陽性率可達56-90%。SLE患者出現核糖體P蛋白抗體與中樞神經系統(tǒng)、肝臟或腎臟受累有關。在抗核抗體陰性的SLE患者，抗核糖體抗體陽性有重要診斷價值?？筪s-DNA抗體SLE的血清特異性抗體。多有致病性（IgG型），與親和力（高）有關。與LN與SLE疾病活動性相關，活動期達90％。可用于SLE疾病活動期判斷＆藥物療效觀察。與SLE急性皮疹、血管炎、漿膜腔炎、白細胞減少等有關?？购诵◇w抗體（ANuA）核小體是真核細胞染色質的基本復制單位，含組蛋白二聚體H2A-H2B和H3-H4，其外面為146個堿基對組成的雙鏈DNA。參與SLE發(fā)病機制：多克隆B細胞活化劑產生ANuA，先于其他ANA促進抗dsDNA與AHA形成參與LN的發(fā)生?？购诵◇w抗體（ANuA）

核小體抗體是SLE的診斷標記，其診斷靈敏度為70-90%。在SLE的活性期，此抗體的檢出率幾乎為100%，在非活動期的SLE中為62%（相應