超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)

超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)第一頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一第二十二章

超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)楊巍第二十二章超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)第二頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一目錄第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)一、Ⅰ型超敏反應(yīng)體內(nèi)檢測(cè)方法二、Ⅰ型超敏反應(yīng)體外檢測(cè)項(xiàng)目及檢測(cè)方法第二節(jié)Ⅱ型超敏反應(yīng)一、Ⅱ型超敏反應(yīng)常見(jiàn)檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法二、Ⅱ型超敏反應(yīng)抗血細(xì)胞抗體檢測(cè)的臨床意義及應(yīng)用評(píng)價(jià)第三節(jié)Ⅲ型超敏反應(yīng)一、Ⅲ型超敏反應(yīng)常見(jiàn)檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法二、Ⅲ型超敏反應(yīng)免疫復(fù)合物檢測(cè)的臨床意義及應(yīng)用評(píng)價(jià)第四節(jié)Ⅳ型超敏反應(yīng)一、Ⅳ型超敏反應(yīng)常見(jiàn)檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法二、Ⅳ型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)臨床意義及應(yīng)用評(píng)價(jià)本章小結(jié)第二十二章超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)第三頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一重點(diǎn)提示Ⅰ型超敏反應(yīng)體外檢測(cè)項(xiàng)目及檢測(cè)方法?？寡?xì)胞抗體常見(jiàn)檢測(cè)方法和臨床意義?？乖翘禺愋匝h(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)方法和臨床意義。第二十二章超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)第四頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一超敏反應(yīng)（hypersensitivity）：是機(jī)體接受某些抗原刺激時(shí)，出現(xiàn)生理功能紊亂或組織細(xì)胞損傷等異常的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。第二十二章超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)第五頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一Ⅰ-Ⅳ型超敏反應(yīng)發(fā)生機(jī)制的比較

超敏反應(yīng)類型介導(dǎo)形式和成分效應(yīng)細(xì)胞和成分初次介導(dǎo)組分二次介導(dǎo)組分Ⅰ型（速發(fā)型）抗體介導(dǎo)，IgE肥大細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞血管活性胺白三烯、PGD2、PAF、細(xì)胞因子Ⅱ型（細(xì)胞溶解型）抗體介導(dǎo)，IgG、IgMFcR+細(xì)胞（吞噬細(xì)胞、NK細(xì)胞）補(bǔ)體、攻膜復(fù)合體溶酶體酶、穿孔素Ⅲ型（免疫復(fù)合物型）免疫復(fù)合物介導(dǎo)，IgGFcR+細(xì)胞、補(bǔ)體抗原-抗體、補(bǔ)體復(fù)合物溶酶體酶Ⅳ型（遲發(fā)型）T細(xì)胞介導(dǎo)，Th1、Th2、CTL巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、CTLIFN-γ、IL-4、IL-5、eotaxin、細(xì)胞毒素趨化因子、細(xì)胞因子、細(xì)胞毒素、炎癥介質(zhì)第二十二章超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)第六頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)

第七頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一Ⅰ型超敏反應(yīng)：亦稱變態(tài)反應(yīng)（allergy）或過(guò)敏反應(yīng)（anaphylaxis），主要由特異性IgE抗體介導(dǎo)產(chǎn)生，因其發(fā)生速度快，常在再次接觸相同抗原后數(shù)分鐘內(nèi)即出現(xiàn)臨床反應(yīng)，故又稱速發(fā)型超敏反應(yīng)（immediatehypersensitivity）。第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)

第八頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)

AgMastcellIgE再次接觸一、Ⅰ型超敏反應(yīng)體內(nèi)檢測(cè)方法1.皮膚試驗(yàn)Mastcell脫顆粒局部紅腫、硬結(jié)20-30minMastcellMastcell第九頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一2．激發(fā)試驗(yàn)(provocationtest)：是模擬自然發(fā)病條件，以少量致敏原引起一次較輕的變態(tài)反應(yīng)發(fā)作，用以確定變應(yīng)原的試驗(yàn)。非特異性激發(fā)試驗(yàn)特異性激發(fā)試驗(yàn)第十頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一二、Ⅰ型超敏反應(yīng)體外檢測(cè)方法第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)

血清總IgE檢測(cè)特異性IgE檢測(cè)IgG4檢測(cè)細(xì)胞脫顆粒測(cè)定體外檢測(cè)方法第十一頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一1．血清總IgE(totalIgE，tIgE)檢測(cè)（1）檢測(cè)方法：包括免疫比濁、化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。（2）臨床意義：TIgE升高常見(jiàn)于過(guò)敏性疾病，當(dāng)患者有選擇性IgA缺乏癥，感染、腫瘤和其他情況（輸血、川崎病、腎病綜合癥、肝臟疾病）時(shí)也出現(xiàn)血清TIgE升高。單純TIgE升高不能作為疾病診斷依據(jù)，也不能說(shuō)明患者屬于特異質(zhì)個(gè)體；TIgE正常也不能排除變態(tài)反應(yīng)疾病。第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)

第十二頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一（3）血清總IgE檢測(cè)的應(yīng)用評(píng)價(jià)：①免疫比濁和化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)敏感性高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好，測(cè)定自動(dòng)化、檢測(cè)時(shí)間短；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方便、實(shí)用，敏感性和特異性均好，不需要特殊儀器。②血清tIgE含量受多種因素的影響，因此，在分析血清tIgE結(jié)果時(shí)須建立當(dāng)?shù)厝巳簍IgE水平的參考區(qū)間。第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)

第十三頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一2．特異性IgE（specificIgE，sIgE）檢測(cè)（1）檢測(cè)方法：包括放射免疫試驗(yàn)、免疫印跡和熒光酶免疫試驗(yàn)。放射變應(yīng)原吸附試驗(yàn)（radioallergosorbenttest，RAST）RAST是目前公認(rèn)的檢測(cè)Ⅰ型超敏反應(yīng)的有效方法之一。根據(jù)標(biāo)記物不同分為：RASTRIA、RASTEIA、RASTFEIA。第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)

第十四頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一免疫印跡應(yīng)用免疫印跡檢測(cè)sIgE時(shí)，因?yàn)镃CD的存在，可能出現(xiàn)交叉反應(yīng)，影響結(jié)果判定。交叉反應(yīng)性碳水化合物決定因子（Cross-reactiveCarbohydratDeterminant，CCD）：是指變應(yīng)原分子結(jié)構(gòu)中包含的能與蛋白質(zhì)結(jié)合的寡聚糖側(cè)鏈，可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性IgE?？笴CD的sIgE不引起過(guò)敏反應(yīng)，但可以造成血清學(xué)變應(yīng)原檢測(cè)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)

第十五頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一熒光酶免疫試驗(yàn)（fluorescentenzymeimmunoassays，F(xiàn)EIA）是利用酶標(biāo)記抗體（抗IgE）與待測(cè)樣本（血清sIgE）反應(yīng)，借助酶催化熒光底物，經(jīng)酶促反應(yīng)生成穩(wěn)定且高效的熒光物質(zhì)，通過(guò)測(cè)定熒光強(qiáng)度確定待測(cè)樣本sIgE的含量。第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)

第十六頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一（2）sIgE檢測(cè)的臨床意義：sIgE檢測(cè)可以與變應(yīng)原皮試和支氣管激發(fā)試驗(yàn)互為補(bǔ)充，但不能完全代替后兩種試驗(yàn)。（3）sIgE檢測(cè)的應(yīng)用評(píng)價(jià)：①RAST方法檢測(cè)效率低（每次只能檢測(cè)一種變應(yīng)原）；有放射性核素污染風(fēng)險(xiǎn)；當(dāng)待測(cè)血清中含有相同特異性IgG時(shí)可干擾正常結(jié)果。②免疫印跡無(wú)污染、無(wú)需特殊設(shè)備、操作簡(jiǎn)單、能一次性確定多種變應(yīng)原，故廣泛應(yīng)用。③熒光酶免疫試驗(yàn)的敏感性和特異性均較好，但使用熒光素做標(biāo)記時(shí)，試劑的使用有效期較短。第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)

第十七頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一3.IgG4檢測(cè)（1）檢測(cè)方法：包括放射免疫試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、免疫比濁等。（2）臨床意義：①IgG4異常增高可見(jiàn)于Ⅰ型超敏反應(yīng)性疾病和IgG4相關(guān)性疾病。②此外，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫病患者血清中亦可出現(xiàn)IgG4水平升高。第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)

第十八頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一4．細(xì)胞脫顆粒測(cè)定（1）類胰蛋白酶測(cè)定：作為肥大細(xì)胞活化、脫顆粒的指標(biāo)。一般采用雙抗體夾心ELISA法。（2）嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒測(cè)定：該試驗(yàn)陽(yáng)性不僅能夠證實(shí)sIgE的存在，而且能夠證明sIgE是有功能的，較單純皮膚試驗(yàn)或sIgE陽(yáng)性結(jié)果更有臨床意義。（3）嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(eosinophilcationicprotein，ECP)測(cè)定：作為嗜酸性粒細(xì)胞活化、脫顆粒的指標(biāo)。ECP測(cè)定包括熒光免疫試驗(yàn)、化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和放射免疫試驗(yàn)等多種方法。第一節(jié)Ⅰ型超敏反應(yīng)

第十九頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一第二節(jié)Ⅱ型超敏反應(yīng)

第二節(jié)Ⅱ型超敏反應(yīng)

第二十頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一Ⅱ型超敏反應(yīng)：又稱為溶細(xì)胞型或細(xì)胞毒型超敏反應(yīng)，特點(diǎn)是由IgG或IgM類抗體與靶細(xì)胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合后，在補(bǔ)體、吞噬細(xì)胞和NK細(xì)胞參與下，引起的以細(xì)胞溶解或組織損傷為主的病理性免疫反應(yīng)，發(fā)作較快。第二節(jié)Ⅱ型超敏反應(yīng)

第二十一頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一一、Ⅱ型超敏反應(yīng)常見(jiàn)檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法（一）抗血細(xì)胞抗體檢測(cè)方法1．抗球蛋白試驗(yàn)（antiglobulintest，AGT），即Coombs試驗(yàn)。2.微柱凝膠法第二節(jié)Ⅱ型超敏反應(yīng)

-+++雙群+++++++RBC通過(guò)凝膠，沉積在管底凝集RBC在凝膠下部凝集RBC在凝膠中部凝集RBC在凝膠頂部；未凝集RBC在管底凝集RBC在凝膠中上部凝集RBC在凝膠頂部，呈線條形第二十二頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一2．凝聚胺法：原理：低離子介質(zhì)——降低溶液的離子強(qiáng)度——促進(jìn)不完全抗體與紅細(xì)胞抗原結(jié)合；高價(jià)陽(yáng)離子多聚物（凝聚胺）——中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷——使IgG型抗體直接凝集紅細(xì)胞。加入中和液——由凝聚胺引起的非特異性凝集——分散；由抗體介導(dǎo)的特異性凝集——不分散。結(jié)果判定：凝集塊在短時(shí)間（1分鐘）內(nèi)分散——判斷為陰性；形成不同強(qiáng)度的凝集塊——判斷為陽(yáng)性。第二十三頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一3．酶介質(zhì)法：原理是IgG型不完全抗體與紅細(xì)胞膜上相應(yīng)抗原結(jié)合不能形成肉眼可見(jiàn)的凝集。加入酶介質(zhì)后，紅細(xì)胞膜表面的唾液酸糖肽被破壞，細(xì)胞膜表面負(fù)電荷減少，細(xì)胞間排斥力減小，細(xì)胞之間距離縮小，呈現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集。最常用的酶是1%的木瓜酶或菠蘿蛋白酶。第二節(jié)Ⅱ型超敏反應(yīng)

第二十四頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一（二）自身抗體檢測(cè)常見(jiàn)的介導(dǎo)Ⅱ型超敏反應(yīng)的自身抗體還包括抗乙酰膽堿受體抗體、抗促甲狀腺激素受體抗體以及抗腎小球基底膜Ⅳ型膠原抗體和抗腎小管基底膜抗體等。檢測(cè)方法：間接免疫熒光法（indirectimmunofluorescence，IIF）。檢測(cè)時(shí)，以特異性組織切片作為檢測(cè)基質(zhì)。第二十五頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一

第三節(jié)Ⅲ型超敏反應(yīng)第三節(jié)Ⅲ型超敏反應(yīng)

第二十六頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一Ⅲ型超敏反應(yīng)：又稱為免疫復(fù)合物型或血管炎型超敏反應(yīng)，是由抗原和抗體結(jié)合形成中等大小的可溶性免疫復(fù)合物沉積于局部或全身多處毛細(xì)血管基底膜后，激活補(bǔ)體，并在中性粒細(xì)胞、血小板、嗜堿性粒細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞參與下，引起的以充血水腫、局部壞死和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主要特征的炎癥反應(yīng)和組織損傷。第三節(jié)Ⅲ型超敏反應(yīng)

第二十七頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一一、Ⅲ型超敏反應(yīng)常見(jiàn)檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法類別原理方法敏感度（μg）物理法溶解度PEG比濁試驗(yàn)20補(bǔ)體法結(jié)合C1qC1q固相試驗(yàn)0.1抗球蛋白法結(jié)合RFmRF固相抑制試驗(yàn)1~20細(xì)胞法補(bǔ)體受體Raji細(xì)胞試驗(yàn)6第三節(jié)Ⅲ型超敏反應(yīng)

第二十八頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一二、Ⅲ型超敏反應(yīng)免疫復(fù)合物檢測(cè)的臨床意義及應(yīng)用評(píng)價(jià)（一）臨床意義免疫復(fù)合物陽(yáng)性或濃度升高主要見(jiàn)于感染性疾病和自身免疫性疾病。CIC的消長(zhǎng)可反映病情的嚴(yán)重程度、檢測(cè)治療效果。須對(duì)比多次檢測(cè)結(jié)果才能證實(shí)其與疾病的相關(guān)性。對(duì)有蛋白尿、關(guān)節(jié)痛、血管炎、漿膜炎、紫癜癥狀等診斷不明確的患者，可考慮檢測(cè)循環(huán)免疫復(fù)合物，并結(jié)合局部免疫復(fù)合物的免疫組化檢測(cè)結(jié)果以明確病變是否與Ⅲ型超敏反應(yīng)有關(guān)。第三節(jié)Ⅲ型超敏反應(yīng)

第二十九頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一（二）應(yīng)用評(píng)價(jià)目前臨床上多采用PEG比濁試驗(yàn)檢測(cè)循環(huán)免疫復(fù)合物，此法操作簡(jiǎn)便、測(cè)定快速、易于推廣，但不能區(qū)別免疫復(fù)合物分子大小，干擾因素多，特異性較差，僅適用于循環(huán)免疫復(fù)合物的粗篩。循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測(cè)方法種類較多，原理各異，對(duì)同一標(biāo)本采用不同檢測(cè)方法獲得的檢測(cè)結(jié)果不盡相同。迄今，臨床上尚未有公認(rèn)的準(zhǔn)確、特異、敏感、簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)方法和理想的標(biāo)準(zhǔn)參考品。因此建議聯(lián)合應(yīng)用多種方法，以提高準(zhǔn)確性和特異性。第三節(jié)Ⅲ型超敏反應(yīng)

第三十頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一

第四節(jié)Ⅳ型超敏反應(yīng)第四節(jié)Ⅳ型超敏反應(yīng)

第三十一頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一Ⅳ型超敏反應(yīng)：由效應(yīng)T細(xì)胞與特異性抗原結(jié)合后，引起以單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)和組織損傷為主要特征的炎癥反應(yīng)。由于T細(xì)胞介導(dǎo)的超敏反應(yīng)需要經(jīng)過(guò)效應(yīng)分子的合成階段，因而進(jìn)程較為緩慢，通常在再次接觸相同抗原后24小時(shí)～72小時(shí)發(fā)生，故Ⅳ型超敏反應(yīng)又稱為遲發(fā)型超敏反應(yīng)（delayedtypehypersensitivity，DTH）。第四節(jié)Ⅳ型超敏反應(yīng)

第三十二頁(yè)，共三十六頁(yè)，編輯于2023年，星期一一、Ⅳ型超敏反應(yīng)常見(jiàn)檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法1．Ⅳ型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)原理：使用皮內(nèi)注射、皮膚斑貼等方法使變應(yīng)原進(jìn)入已經(jīng)致敏的機(jī)體，體內(nèi)致敏的T細(xì)胞再次接觸到變應(yīng)原后，釋放多種細(xì)胞因子，造成局部以單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥反應(yīng)。24小時(shí)～48小時(shí)后局部出現(xiàn)紅腫、硬結(jié)、水皰等現(xiàn)象，以此來(lái)判斷變應(yīng)原是否引起機(jī)體Ⅳ型超敏反應(yīng)或機(jī)體的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)。2．Ⅳ型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)方法：包括結(jié)核菌素皮試和斑貼試驗(yàn)兩種。第四節(jié)Ⅳ型超敏反應(yīng)

第三