狂犬病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和診斷技術(shù)課件

狂犬病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)與診斷技術(shù)中國(guó)生物技術(shù)集團(tuán)公司武漢生物制品研究所基因工程室嚴(yán)家新徐葛林1.臨床診斷與實(shí)驗(yàn)室診斷實(shí)驗(yàn)室手段對(duì)狂犬病的確診非常必要WHO要求狂犬病病例的統(tǒng)計(jì)上報(bào)資料要注明診斷的依據(jù)(是否包括實(shí)驗(yàn)室診斷?)。目前國(guó)際上公認(rèn)狂犬病的死亡率是100%,原則上不承認(rèn)有狂犬病康復(fù)的可能,即狂犬病的發(fā)病率應(yīng)與死亡率相等。沒(méi)有合格實(shí)驗(yàn)室給出的肯定診斷的康復(fù)病例應(yīng)從狂犬病病例的統(tǒng)計(jì)數(shù)字中剔除。“狂犬病患者必死無(wú)疑,不死不算狂犬病”,要挑戰(zhàn)這個(gè)命題,必須提供確切、完整的病史和權(quán)威的實(shí)驗(yàn)室診斷資料。2.人狂犬病的生存期內(nèi)診斷生存期內(nèi)的診斷技術(shù)的選擇主要隨著病程的不同而異。在病后最初幾天,檢測(cè)抗原一般是敏感的腦脊液及血清中的病毒中和抗體常常趨向于在病后710天出現(xiàn)檢測(cè)抗原可用熒光抗體(FA)法檢查狂犬病患者角膜印片或皮膚活組織,但是,FA陽(yáng)性標(biāo)本在發(fā)病的后期更常見(jiàn)。皮膚活組織檢查常常從頸背部取含有末稍神經(jīng)的帶有毛囊的標(biāo)本。角膜印片(切勿劃痕)取自伴有腦炎的患者,用顯微鏡的載波片輕輕觸及角膜的中心部位。角膜印片及皮膚活組織標(biāo)本的質(zhì)量很重要,采取后應(yīng)立即冷凍,直至檢測(cè)。不過(guò),用FA技術(shù)做生存期內(nèi)的診斷,其敏感性是有限的。人狂犬病的生存期內(nèi)診斷已證實(shí)患者及自然感染和實(shí)驗(yàn)感染動(dòng)物的角膜印片中存在狂犬病抗原。但是,角膜印片檢出率較低,陽(yáng)性結(jié)果可肯定是狂犬病,而陰性結(jié)果并不能排除是狂犬病的可能。雖然在臨床癥狀開(kāi)始時(shí),在皮膚活組織中可能檢出狂犬病抗原,但早期癥狀時(shí)僅有25·50%的患者為陽(yáng)性,隨著病情的進(jìn)展陽(yáng)性率也增加。頸背部皮膚活組織檢査只有一些患者呈陽(yáng)性結(jié)果,特別是在臨床疾病的早期。用FA檢查皮膚活組織的靈敏度一般高于檢查角膜印片。3.動(dòng)物和人狂犬病的死后診斷抗原檢測(cè)6病毒分離病毒鑒定等6為了確保實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的可信性,必需滿足若干條件1.標(biāo)本質(zhì)量要好;2.標(biāo)本送達(dá)實(shí)驗(yàn)室的條件要好(符合GLP標(biāo)準(zhǔn),獲得一定級(jí)別的資格認(rèn)證);3.獲得結(jié)果的等待時(shí)間要短;4.結(jié)果的傳遞要迅速二狂犬病診斷實(shí)驗(yàn)室的安全措施1.危險(xiǎn)性在一般的實(shí)驗(yàn)室條件,技術(shù)人員暴露于以下傳染的危險(xiǎn)野生狂犬病毒(即街毒),當(dāng)實(shí)驗(yàn)室對(duì)接收到的動(dòng)物標(biāo)本進(jìn)行尸體解剖時(shí)或?qū)?biāo)本進(jìn)行加工時(shí)(懸液制備,離心)等,這一類操作是非常危險(xiǎn)的,必須在P3以上條件的專業(yè)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)的病毒(即固定毒),當(dāng)接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或操作感染的細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),特別是制備大量的高濃度病毒時(shí),主要的傳染來(lái)源為手指被有感染的玻璃或工具刺傷或割破:;新糜爛的皮膚或粘膜與感染物接觸也應(yīng)認(rèn)為是一種傳染的危險(xiǎn)。雖然固定毒的毒力已大為下降,歷史上僅有一例死于固定毒操作的報(bào)道,但仍有定的危險(xiǎn)性,因此操作固定毒仍須十分小心。生物安全級(jí)別&對(duì)工作人員的要求(BiologicalSafetyLevel,BSL)(Protection,P)BSL-1:實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)程序方面受過(guò)特殊訓(xùn)練,由受過(guò)微生物學(xué)或相關(guān)科學(xué)一般訓(xùn)練的科學(xué)工作者監(jiān)督實(shí)驗(yàn)。BSL-2:實(shí)驗(yàn)人員均接受過(guò)病源處理方面的特殊培訓(xùn),并由有資格的科學(xué)工作者指導(dǎo)。BSL-3:實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)在處理致病性的和可能使人致死的病源方面受過(guò)專業(yè)訓(xùn)練,并由對(duì)該病源工作有經(jīng)驗(yàn)的有資格的科學(xué)工作者監(jiān)督。BSL-4:實(shí)驗(yàn)室成員應(yīng)在處理特別危險(xiǎn)的傳染源方面受過(guò)特殊和全面的訓(xùn)練,應(yīng)了解標(biāo)準(zhǔn)和特殊操作中一級(jí)和二級(jí)遏制的作用、遏制設(shè)備、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)性能。實(shí)驗(yàn)由在有關(guān)病源方面受過(guò)訓(xùn)練、并有工作經(jīng)驗(yàn)的、有資格的科學(xué)工作者監(jiān)督。2.對(duì)安全操作的建議操作所有潛在狂犬病感染的材料均應(yīng)在P2或P3生物安全實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。對(duì)狂犬病實(shí)驗(yàn)室診斷的安全性要求①一個(gè)封閉的環(huán)境,專作狂犬病感染性工作②通過(guò)緩沖更衣間并限制一定的專業(yè)人員進(jìn)入③穿專用的實(shí)驗(yàn)室隔離無(wú)菌衣和鞋④操作完畢對(duì)操作臺(tái)進(jìn)行消毒(當(dāng)材料偶然地溢出時(shí)應(yīng)立即用3%的雷蘇爾溶液或其他相應(yīng)的消毒劑消毒)⑤每日應(yīng)至少消毒地板一次⑥所有用后剩余的標(biāo)本,尸解工具,實(shí)驗(yàn)室材料在拿出實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)進(jìn)行高壓蒸氣消毒在生物安全柜或隔離器內(nèi)打開(kāi)動(dòng)物顱蓋骨的操作很困難,技術(shù)人員在操作這項(xiàng)工作時(shí)應(yīng)帶面罩,護(hù)目鏡、手套和圍裙。由于與狂犬病相關(guān)病毒對(duì)人的致病性還不很了解,所有操作可能含有這些病毒的標(biāo)本均應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行所有實(shí)驗(yàn)室工作人員務(wù)必進(jìn)行狂犬病疫苗的暴露前免疫,這些人員的中和抗體應(yīng)定期檢査,所有意外地暴露于感染時(shí)必需立即報(bào)告負(fù)責(zé)人。狂犬病毒抗原的檢測(cè)61.標(biāo)本選擇6在選擇、運(yùn)送標(biāo)本前,實(shí)際操作獲得標(biāo)本的人員與實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員事先取得聯(lián)系共同選擇實(shí)驗(yàn)方法是很重要的。1)標(biāo)本取自個(gè)體的生命期A.檢查病毒和(或)抗原:樣品應(yīng)放在干燥試管內(nèi)。樣品的獲取可按下述方法進(jìn)行。(1)用注射器或吸管吸入法采集唾液