艾滋病的脂質(zhì)筏結(jié)構(gòu)展示培訓(xùn)課件

艾滋病的脂質(zhì)筏結(jié)構(gòu)課件展示簡介：脂質(zhì)成分的艾滋病病毒膜，像洗滌劑耐藥,是明顯不同于宿主細(xì)胞膜。這個(gè)成分,為艾滋病毒脂質(zhì)體關(guān)于在活細(xì)胞存在脂質(zhì)筏提供了強(qiáng)有力的證據(jù)。1、LBPA是一種圓錐形的磷脂，這已被證明。在晚期核內(nèi)體，不能被大量的分光術(shù)測(cè)定。因?yàn)樗荒芘c其同分異構(gòu)體——磷脂酰甘油明確的區(qū)分開來。2、鞘磷脂類和膽固醇的富集是DRM的特征。DRM的另一個(gè)標(biāo)志是像酰膽堿之類的飽和脂類的富集。3、飽和的酰膽堿由在細(xì)胞膜中占18%增加到在病毒中占41%.4、在SM中未觀察到飽和脂HIV肪酸鏈的增長有明顯變化。5、在HIV-1細(xì)胞中有大量的DHSM（雙氫鏈霉菌）富集。6、在HIV-1中，我們發(fā)現(xiàn)有一種不同尋常的鞘脂類DHSM富集，和SM相反，在DHSM的鞘氨醇鏈上沒有4.5反式雙鏈。7、在病毒和細(xì)胞膜中主要的SM和DHSM是SMd18:1/16:0和DHSMd18:0/16:0,它們都包含氫胺化合物連接的十六?；?。SM和DHSM樣品的定量是利用靈敏+PREC184掃描進(jìn)行試驗(yàn)的脂質(zhì)產(chǎn)生的乙酰膽堿片段離子在相對(duì)豐度上沒有差異，這種脂質(zhì)包含鞘氨醇或鞘氨醇骨架，脅迫SM樣本因此可用來對(duì)脂質(zhì)定量。與細(xì)胞膜相比，SM和DHSM的主要樣本都高度富含病毒。在HIV-1(0.12比0.95)中，16:0_PC的摩爾比率增加了近8倍，而DHSM16:0_PC的摩爾比率由于一個(gè)因素增加了15倍（0.028比0.41），因此，HIV-1中SM的二氫樣品平均值比SM高，而Npalmitoyl-DHSM分子單獨(dú)包含約10%HIV-1磷脂總量，我們同時(shí)確定二氫氨基化合物作為一個(gè)DHSM潛在的前體，和dihydromonohexosylceramide一樣，但由于相對(duì)片段離子產(chǎn)量低，不能進(jìn)行定量。C圖：SM與dhsm比PC在hiv與drm里的比率6、在HIV-1中，我們發(fā)現(xiàn)有一種不同尋常的鞘脂類Cer（神經(jīng)酰胺）160鞘氨醇的減少（在細(xì)胞膜也觀察到了，沒有顯示數(shù)據(jù)）對(duì)病毒的釋放沒有明顯影響在HIV-1感染中一個(gè)很強(qiáng)的影響被觀察到，無論如何，F(xiàn)相比未處理的細(xì)胞，B1處理的細(xì)胞釋放的HIV-1感染性是可再生的4倍。3、飽和的酰膽堿由在細(xì)胞膜中占18%增加到在病毒41），因此，HIV-1中SM的二氫樣品平均值比SM高，而Npalmitoyl-DHSM分子單獨(dú)包含約10%HIV-1磷脂總量，我們同時(shí)確定二氫氨基化合物作為一個(gè)DHSM潛在的前體，和dihydromonohexosylceramide一樣，但由于相對(duì)片段離子產(chǎn)量低，不能進(jìn)行定量。DHSM尚未作為HIV-1的元件被報(bào)道，因此，HIV-1膜中的鞘氨醇類的數(shù)據(jù)不可用并不奇怪。HC600SM（苯乙烯）37,000DHSM（雙清鏈霉素）17,0001、LBPA是一種圓錐形的磷脂，這已被證明。Brij96不是特別嚴(yán)格，對(duì)flotillin和鐵傳遞蛋白受體的有一個(gè)較廣的貢獻(xiàn)。接下來的實(shí)驗(yàn)將關(guān)注于鞘氨醇及其衍生物脂質(zhì)與HIV-1感染相關(guān)損失的特有脂質(zhì)，和決定他們機(jī)制的活動(dòng)。Chol（膽固醇）134,000與細(xì)胞膜相比，SM和DHSM的主要樣本都高度富含病毒。為了測(cè)試鞘磷脂是否在HIV-1形成和感染有決定性作用，我們用煙曲霉毒素B1處理感染的MT-4細(xì)胞。FB1阻斷了鞘磷脂的重新合成，(阻礙dihydroceramide的合成,它是所有鞘磷脂的前體)，還有回收途徑。DHSM（雙清鏈霉素）17,000SM（苯乙烯）37,000減小了19%(Cer)，30%(SMs)和54%(HC)，不同鞘氨醇被分別觀察到。DHSM尚未作為HIV-1的元件被報(bào)道，因此，HIV-1膜中的鞘氨醇類的數(shù)據(jù)不可用并不奇怪。至今，DHSM被描述為一個(gè)僅在人晶體抽提物中的主要連續(xù)生物細(xì)胞膜，它包含了全部磷脂的50%。DHSM的功能目前還不知道。眼晶體富含膽固醇的細(xì)胞膜中的DHSM被認(rèn)為在阻遏氧化和形成膽固醇晶體中起作用。對(duì)脂質(zhì)體和?；溒ヅ銼M和DHSM比較的生物物理研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)DHSM導(dǎo)致在較高的溶解溫度下更多有序膜形成，這是由于它極性小的特性。基于這些結(jié)果，DHSM被認(rèn)為在側(cè)方濃縮有序液體膜區(qū)域具有膜組織者的功能，例如脂筏。所以，在SM和富含膽固醇的HIV-1膜的量高可能影響到胞外病毒膜的有序和物理穩(wěn)定，也可能對(duì)阻遏氧化起作用?？梢源_定的是，富含HIV-1的pl-PE，可能對(duì)這種阻礙起作用，如已經(jīng)討論了的縮醛磷脂抗氧化作用。抑制鞘磷脂的生物合成可減小HIV-1的感染性之前的研究已經(jīng)報(bào)道了在產(chǎn)HIV-1細(xì)胞或從細(xì)胞或病毒膜的膽固醇抽提物中對(duì)膽固醇的生化合成的抑制可導(dǎo)致病毒復(fù)制和感染的降低。為了測(cè)試鞘磷脂是否在HIV-1形成和感染有決定性作用，我們用煙曲霉毒素B1處理感染的MT-4細(xì)胞。FB1阻斷了鞘磷脂的重新合成，(阻礙dihydroceramide的合成,它是所有鞘磷脂的前體)，還有回收途徑。FB1處理的細(xì)胞中純化的HIV-1和PC相比表現(xiàn)出明顯的減小率，和預(yù)期的抑制劑效果一致。減小了19%(Cer)，30%(SMs)和54%(HC)，不同鞘氨醇被分別觀察到。鞘氨醇的減少（在細(xì)胞膜也觀察到了，沒有顯示數(shù)據(jù)）對(duì)病毒的釋放沒有明顯影響在HIV-1感染中一個(gè)很強(qiáng)的影響被觀察到，無論如何，F(xiàn)相比未處理的細(xì)胞，B1處理的細(xì)胞釋放的HIV-1感染性是可再生的4倍。所以，HIV-1膜中鞘氨醇的濃度對(duì)維持病毒感染表現(xiàn)出重要性，但不僅僅是對(duì)病毒生長必要的。我們的結(jié)果表明生物膜的脂質(zhì)組分的改變可能不僅局限在一個(gè)狹小的范圍，因?yàn)椴《厩拾贝嫉牟糠譁p小導(dǎo)致HIV-1感染率明顯降低。關(guān)于脂質(zhì)組分細(xì)微的改變導(dǎo)致明顯功能的變化的結(jié)論之前已在囊泡運(yùn)輸過程研究中被提出。接下來的實(shí)驗(yàn)將關(guān)注于鞘氨醇及其衍生物脂質(zhì)與HIV-1感染相關(guān)損失的特有脂質(zhì)，和決定他們機(jī)制的活動(dòng)。我們的FB1結(jié)果脂質(zhì)活性藥物在膜組成上有敏感的改變作用表明有潛力成為一種抗HIV的有效治療試劑。未處理的HIV-1膜和DRM脂質(zhì)我們對(duì)HIV-1脂質(zhì)成分的分析生成一個(gè)與先前DRM類似報(bào)道的圖。因此，我們對(duì)MT-4MT-4細(xì)胞中的HIV-1andDRM進(jìn)行了直接比較。DRM使用洗滌劑TritonX-100和Brij96準(zhǔn)備好，與他們的溶解特異蛋白和脂質(zhì)不同的能力，TritonX-100更嚴(yán)格。片段經(jīng)過等差密度梯度離心用來分析有關(guān)DRM標(biāo)記的flotillin和鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白受體的貢獻(xiàn)，與DRM沒有聯(lián)系(圖.4a)。在TritonX-100抽提物中，F(xiàn)lotillin受到Flotillin限制。而在梯度底部找到了鐵傳遞蛋白受體(片段7–9)，因此定義片段2為DRM片段。Brij96不是特別嚴(yán)格，對(duì)flotillin和鐵傳遞蛋白受體的有一個(gè)較廣的貢獻(xiàn)。圖4顯示SMs_PC在DRM中TritonX-100和Brij96處理的細(xì)胞顯著增加（相比細(xì)胞中脂質(zhì)），并且和未處理HIV-1脂質(zhì)是相似的。A圖：鞘磷脂,二氫鞘磷脂,磷脂酰膽堿（PC）在病毒膜和抗去垢劑膜是由納米電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)光譜法而形成的蛋白質(zhì)免疫印跡。(一)抗去垢劑膜從冷萃取的hiv-1感染帶有Tritonx–100（上)或96(低)MT-4的細(xì)胞中分析得到有筏(flotillin1)和無筏(轉(zhuǎn)鐵蛋白受體)標(biāo)記分布。B圖：鞘磷脂比磷脂酰膽堿在所有細(xì)胞膜中的比率C圖：SM與dhsm比PC在hiv與drm里的比率

D圖：從感染的MT-4細(xì)胞里分離出的（1條帶），從受感染細(xì)胞分離出的DRM（2-4），純凈HIV（5-7）用蛋白質(zhì)免疫印跡分析檢測(cè)flotillin和gp41。根據(jù)細(xì)胞編號(hào)，所獲得的細(xì)胞提取的數(shù)目是正常的。HIV-1的脂質(zhì)成分觀察報(bào)告與脂質(zhì)微觀（筏）猜測(cè)相似在五個(gè)方面：1.PC(富含飽和脂肪)2.PS（聚苯乙烯）3.PL-PE（聚乙烯）4.SM(膽固醇)5.DHSM(鞘脂類)

支撐的假設(shè)：HIV-1的病毒芽來自細(xì)胞的微薄膜。表格2：HIV-1病毒的脂質(zhì)成分

平均每分子脂質(zhì)含病毒粒子PC(聚碳酸酯)26,000SM（苯乙烯）37,000DHSM（雙清鏈霉素）17,000PE（聚乙烯）13,000pl-PE44,000PS（聚苯乙烯）25,000Chol（膽固醇）134,000Cer（神經(jīng)酰胺）160HC600材料和方法FB1（纖維蛋白原）和Brij96（聚氧乙烯脂肪醇醚96）溶血神經(jīng)鞘氨脂轉(zhuǎn)移磷脂酰和SM（苯乙烯）脂肪酸和TritonX-100細(xì)胞培養(yǎng)和病毒分離純化

MT-4細(xì)胞（31）保持在37℃和5％CO2在RPMI1640培養(yǎng)基中添加10％熱滅活的FCS，抗生素4ml谷氨酰胺5mmCO2細(xì)胞感染HIV-1毒株NL4-3（32）病毒在受感染的細(xì)胞共同培養(yǎng)，并收獲前未受感染的細(xì)胞病變效應(yīng)觀察D圖：從感染的MT-4細(xì)胞里分離出的（1條帶），從受感染細(xì)胞分離出的DRM（2-4），純凈HIV（5-7）用蛋白質(zhì)免疫印跡分析檢測(cè)flotillin和gp41。我們的結(jié)果表明生物膜的脂質(zhì)組分的改變可能不僅局限在一個(gè)狹小的范圍，因?yàn)椴《厩拾贝嫉牟糠譁p小導(dǎo)致HIV-1感染率明顯降低。因此，我們對(duì)MT-4MT-4細(xì)胞中的HIV-1andDRM進(jìn)行了直接比較。DHSM尚未作為HIV-1的元件被報(bào)道，因此，HIV-1膜中的鞘氨醇類的數(shù)據(jù)不可用并不奇怪。眼晶體富含膽固醇的細(xì)胞膜中的DHSM被認(rèn)為在阻遏氧化和形成膽固醇晶體中起作用。DHSM尚未作為HIV-1的元件被報(bào)道，因此，HIV-1膜中的鞘氨醇類的數(shù)據(jù)不可用并不奇怪。的另一個(gè)標(biāo)志是像酰膽堿之類的飽和脂類的富集。鞘氨醇的減少（在細(xì)胞膜也觀察到了，沒有顯示數(shù)據(jù)）對(duì)病毒的釋放沒有明顯影響在HIV-1感染中一個(gè)很強(qiáng)的影響被觀察到，無論如何，F(xiàn)相比未處理的細(xì)胞，B1處理的細(xì)胞釋放的HIV-1感染性是可再生的4倍。鞘氨醇的減少（在細(xì)胞膜也觀察到了，沒有顯示數(shù)據(jù)）對(duì)病毒的釋放沒有明顯影響在HIV-1感染中一個(gè)很強(qiáng)的影響被觀察到，無論如何，F(xiàn)相比未處理的細(xì)胞，B1處理的細(xì)胞釋放的HIV-1感染性是可再生的4倍。鞘氨醇的減少（在細(xì)胞膜也觀察到了，沒有顯示數(shù)據(jù)）對(duì)病毒的釋放沒有明顯影響在HIV-1感染中一個(gè)很強(qiáng)的影響被觀察到，無論如何，F(xiàn)相比未處理的細(xì)胞，B1處理的細(xì)胞釋放的HIV-1感染性是可再生的4倍。7、在病毒和細(xì)胞膜中主要的SM和DHSM是鞘氨醇的減少（在細(xì)胞膜也觀察到了，沒有顯示數(shù)據(jù)）對(duì)病毒的釋放沒有明顯影響在HIV-1感染中一個(gè)很強(qiáng)的影響被觀察到，無論如何，F(xiàn)相比未處理的細(xì)胞，B1處理的細(xì)胞釋放的HIV-1感染性是可再生的4倍。脂質(zhì)成分的艾滋病病毒膜，像洗滌劑耐藥,是明顯不同于宿主細(xì)胞膜。而在梯度底部找到了鐵傳遞蛋白受體(片段7–9)，因此定義片段2為DRM片段。根據(jù)細(xì)胞編號(hào)，所獲得的細(xì)胞提取的數(shù)目是正常的。PC(聚碳酸酯)26,000為了測(cè)試鞘磷脂是否在HIV-1形成和感染有決定性作用，我們用煙曲霉毒素B1處理感染的MT-4細(xì)胞。PE（聚乙烯）13,000DHSM（雙清鏈霉素）17,000的另一個(gè)標(biāo)志是像酰膽堿之類的飽和脂類的富集。4、在SM中未觀察到飽和脂HIV肪酸鏈的增長有明顯PC(聚碳酸酯)26,000SMd18:1/16:0和DHSMd18:0/16:0,它們都包含PS（聚苯乙烯）25,000Cer（神經(jīng)酰胺）160表格2：HIV-1病毒的脂質(zhì)成分所以，在SM和富含膽固醇的HIV-1膜的量高可能影響到胞外病毒膜的有序和物理穩(wěn)定，也可能對(duì)阻遏氧化起作用。對(duì)脂質(zhì)體和酰基鏈匹配SM和DHSM比較的生物物理研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)DHSM導(dǎo)致在較高的溶解溫度下更多有序膜形成，這是由于它極性小的特性。未處理的HIV-1膜和DRM脂質(zhì)(一)抗去垢劑膜從冷萃取的hiv-1感染帶有Tritonx–100（上)或96(低)MT-4的細(xì)胞中分析得到有筏(flotillin1)和無筏(轉(zhuǎn)鐵蛋白受體)標(biāo)記分布。未處理的HIV-1膜和DRM脂質(zhì)之前的研究已經(jīng)報(bào)道了在產(chǎn)HIV-1細(xì)胞或從細(xì)胞或病毒膜的膽固醇抽提物中對(duì)膽固醇的生化合成的抑制可導(dǎo)致病毒復(fù)制和感染的降低。因此，我們對(duì)MT-4MT-4細(xì)胞中的HIV-1andDRM進(jìn)行了直接比較。根據(jù)細(xì)胞編號(hào)，所獲得的細(xì)胞提取的數(shù)目是正常的。6、在HIV-1中，我們發(fā)現(xiàn)有一種不同尋常的鞘脂類41），因此，HIV-1中SM的二氫樣品平均值比SM高，而Npalmitoyl-DHSM分子單獨(dú)包含約10%HIV-1磷脂總量，我們同時(shí)確定二氫氨基化合物作為一個(gè)DHSM潛在的前體，和dihydromonohexosylceramide一樣，但由于相對(duì)片段離子產(chǎn)量低，不能進(jìn)行定量。7、在病毒和細(xì)胞膜中主要的SM和DHSM是的另一個(gè)標(biāo)志是像酰膽堿之類的飽和脂類的富集。接下來的實(shí)驗(yàn)將關(guān)注于鞘氨醇及其衍生物脂質(zhì)與HIV-1感染相關(guān)損失的特有脂質(zhì)，和決定他們機(jī)制的活動(dòng)。HC600PE（聚乙烯）13,000我們的結(jié)果表明生物膜的脂質(zhì)組分的改變可能不僅局限在一個(gè)狹小的范圍，因?yàn)椴《厩拾贝嫉牟糠譁p小導(dǎo)致HIV-1感染率明顯降低。HC600我們的FB1結(jié)果脂質(zhì)活性藥物在膜組成上有敏感的改變作用表明有潛力成為一種抗HIV的有效治療試劑。圖4顯示SMs_PC在DRM中TritonX-100和Brij96處理的細(xì)胞顯著增加（相比細(xì)胞中脂質(zhì)），并且和未處理HIV-1脂質(zhì)是相似的。未處理的HIV-1膜和DRM脂質(zhì)PE（聚乙烯）13,000這個(gè)成分,為艾滋病毒脂質(zhì)體關(guān)于在活細(xì)胞存在脂質(zhì)筏提供了強(qiáng)有力的證據(jù)。FB1阻斷了鞘磷脂的重新合成，(阻礙dihydroceramide的合成,它是所有鞘磷脂的前體)，還有回收途徑。HC600PE（聚乙烯）13,000所以，在SM和富含膽固醇的HIV-1膜的量高可能影響到胞外病毒膜的有序和物理穩(wěn)定，也可能對(duì)阻遏氧化起作用。所以，HIV-1膜中鞘氨醇的濃度對(duì)維持病毒感染表現(xiàn)出重要性，但不僅僅是對(duì)病毒生長必要的。脂肪酸和TritonX-100因此，我們對(duì)MT-4MT-4細(xì)胞中的HIV-1andDRM進(jìn)行了直接比較。所以，HIV-1膜中鞘氨醇的濃度對(duì)維持病毒感染表現(xiàn)出重要性，但不僅僅是對(duì)病毒生長必要的。SM（苯乙烯）37,000細(xì)胞感染HIV-1毒株NL4-3（32）未處理的HIV-1膜和DRM脂質(zhì)的另一個(gè)標(biāo)志是像酰膽堿之類的飽和脂類的富集。表格2：HIV-1病毒的脂質(zhì)成分(一)抗去垢劑膜從冷萃取的hiv-1感染帶有Tritonx–100（上)或96(低)MT-4的細(xì)胞中分析得到有筏(flotillin1)和無筏(轉(zhuǎn)鐵蛋白受體)標(biāo)記分布。對(duì)脂質(zhì)體和?；溒ヅ銼M和DHSM比較的生物物理研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)DHSM導(dǎo)致在較高的溶解溫度下更多有序膜形成，這是由于它極性小的特性。DHSM的功能目前還不知道。PS（聚苯乙烯）25,000SM（苯乙烯）37,00041），因此，HIV-1中SM的二氫樣品平均值比SM高，而Npalmitoyl-DHSM分子單獨(dú)包含約10%HIV-1磷脂總量，我們同時(shí)確定二氫氨基化合物作為一個(gè)DHSM潛在的前體，和dihydromonohexosylceramide一樣，但由于相對(duì)片段離子產(chǎn)量低，不能進(jìn)行定量。細(xì)胞感染HIV-1毒株NL4-3（32）之前的研究已經(jīng)報(bào)道了在產(chǎn)HIV-1細(xì)胞或從細(xì)胞或病毒膜的膽固醇抽提物中對(duì)膽固醇的生化合成的抑制可導(dǎo)致病毒復(fù)制和感染的降低。抑制鞘磷脂的生物合成可減小HIV-1的感染性4、在SM中未觀察到飽和脂HIV肪酸鏈的增長有明顯所以，在SM和富含膽固醇的HIV-1膜的量高可能影響到胞外病毒膜的有序和物理穩(wěn)定，也可能對(duì)阻遏氧化起作用。鞘氨醇的減少（在細(xì)胞膜也觀察到了，沒有顯示數(shù)據(jù)）對(duì)病毒的釋放沒有明顯影響在HIV-1感染中一個(gè)很強(qiáng)的影響被觀察到，無論如何，F(xiàn)相比未處理的細(xì)胞，B1處理的細(xì)胞釋放的HIV-1感染性是可再生的4倍。D圖：從感染的MT-4細(xì)胞里分離出的（1條帶），從受感染細(xì)胞分離出的DRM（2-4），純凈HIV（5-7）用蛋白質(zhì)免疫印跡分析檢測(cè)flotillin和gp41。因此，我們對(duì)MT-4MT-4細(xì)胞中的HIV-1andDRM進(jìn)行了直接比較。PE（聚乙烯）13,000根據(jù)細(xì)胞編號(hào)，所獲得的細(xì)胞提取的數(shù)目是正常的。Cer（神經(jīng)酰胺）160的另一個(gè)標(biāo)志是像酰膽堿之類的飽和脂類的富集。所以，HIV-1膜中鞘氨醇的濃度對(duì)維持病毒感染表現(xiàn)出重要性，但不僅僅是對(duì)病毒生長必要的。95)中，16:0_PC的摩爾比率增加了近8倍，而DHSM16:0_PC的摩爾比率由于一個(gè)因素增加了15倍（0.之前的研究已經(jīng)報(bào)道了在產(chǎn)HIV-1細(xì)胞或從細(xì)胞或病毒膜的膽固醇抽提物中對(duì)膽固醇的生化合成的抑制可導(dǎo)致病毒復(fù)制和感染的降低。PE（聚乙烯）13,000表格2：HIV-1病毒的脂質(zhì)成分因此，我們對(duì)MT-4MT-4細(xì)胞中的HIV-1an