白血病細(xì)胞遺傳學(xué)教學(xué)課件

一、白血病的細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史

雖然早在1914年德國(guó)學(xué)者Boveri就提出了染色體畸變是導(dǎo)致腫瘤的基本原因的假說(shuō)，可是由于受到技術(shù)的限制，長(zhǎng)時(shí)間以來(lái)人類(lèi)染色體的正確數(shù)目一直無(wú)法搞清楚，自然更談不上對(duì)腫瘤開(kāi)展研究了。1956年Tjio和Levan通過(guò)人胚胎肺的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，終于確定人類(lèi)染色體的正確數(shù)目為46.這一重要發(fā)現(xiàn)被公認(rèn)為細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)展史上的第一個(gè)里程碑。1958年Ford等在一例急性白血病患者的骨髓細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有44個(gè)染色體和1個(gè)斷片的非整倍體異常，標(biāo)志著白血病染色體研究的開(kāi)始。1960年Nowell和Hungerford在美國(guó)費(fèi)城發(fā)現(xiàn)了2例慢性粒細(xì)胞白血病患者外周血標(biāo)本中有小的異常染色體，這一發(fā)現(xiàn)迅速為許多其他學(xué)者所證實(shí)并將該異常染色體命名為Ph染色體，即費(fèi)城染色體。這是人類(lèi)腫瘤中第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的標(biāo)記染色體，它激起了人們對(duì)腫瘤染色體研究的巨大熱情，遂被公認(rèn)為細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)展史上的第二個(gè)里程碑。

白血病的染色體研究大致經(jīng)歷了以下4個(gè)發(fā)展階段：

1、非顯帶時(shí)期（1958-1970年）

2、顯帶時(shí)期（1970年后）

3、FISH時(shí)期（1980年后）

4、多色FISH時(shí)期（1990年后)二、白血病的細(xì)胞遺傳學(xué)研究的方法（一）標(biāo)本的來(lái)源和采集按照腫瘤染色體研究的標(biāo)本必須取自腫瘤組織本身的原則，白血病的染色體研究通常以采用骨髓為宜。當(dāng)外周血白細(xì)胞總數(shù)>10x109/L和原、幼細(xì)胞百分比>10%時(shí)，也可采用外周血細(xì)胞進(jìn)行短期培養(yǎng)。（二）染色體的制備

1、標(biāo)本采集。用肝素潤(rùn)濕的針筒抽取骨髓2ml或更多，立即注入含1640培養(yǎng)基的標(biāo)本瓶中。

2、細(xì)胞接種。將標(biāo)本瓶帶回實(shí)驗(yàn)室后，先做骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)，再按照1~2x106/ml的細(xì)胞密度注入標(biāo)本瓶中，將培養(yǎng)瓶放入37℃溫箱中持續(xù)培養(yǎng)24或48h，其間定時(shí)搖勻培養(yǎng)物。

3、阻留中期分裂相。培養(yǎng)瓶中加入秋水仙素，終濃度為0.05ug/ml，搖勻后置37℃溫箱中1h。

4、收獲細(xì)胞。將培養(yǎng)物吸至尖底離心管，離心，1000轉(zhuǎn)/min，10min。

5、低滲。棄上清液，沿管壁緩緩加入預(yù)溫至37℃的0.075mol/L的KCl溶液6~8ml，吹打混勻后置37℃溫箱中30min。

6、預(yù)固定。加入3：1甲醇、冰醋酸固定液1ml，吹打混勻。離心，1000轉(zhuǎn)/min，10min。

7、固定。吸去上清液，加新鮮配制的3：1甲醇、冰醋酸固定液6~8ml，吹打混勻。靜置至少30min后，離心，1000轉(zhuǎn)/min，10min。重復(fù)固定三次，后兩次靜置時(shí)間至少15min。

8、制片。用吸管將細(xì)胞懸液輕輕打勻后吸取少量，從10cm高處滴至冰水浸泡過(guò)的玻片上，每片三滴，然后在酒精燈上來(lái)回通過(guò)數(shù)次，使其干燥。

9、顯帶。將玻片置于預(yù)溫至87.5℃的R顯帶液中孵育，時(shí)間以60~120min為宜。

10、染色。標(biāo)本用10%的Giemsa染色液染色10~20min，流水沖洗，待干，鏡檢。

采集標(biāo)本

短期培養(yǎng)

加秋水仙素1h

低滲30min

預(yù)固定

固定

制片

顯帶

染色CR后原有異常重新出現(xiàn)，提示白血病復(fù)發(fā)。AML1-ETO融合基因通過(guò)對(duì)殘存的正常的CBFa/β轉(zhuǎn)錄因子的顯性負(fù)調(diào)控作用，干擾了有關(guān)基因的表達(dá)，最終導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。一、白血病的細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史（三）t（15；核型對(duì)治療方案的選擇也有一定的指導(dǎo)意義，最典型的例子為早幼粒細(xì)胞白血病患者若發(fā)現(xiàn)t（15；1960年Nowell和Hungerford在美國(guó)費(fèi)城發(fā)現(xiàn)了2例慢性粒細(xì)胞白血病患者外周血標(biāo)本中有小的異常染色體，這一發(fā)現(xiàn)迅速為許多其他學(xué)者所證實(shí)并將該異常染色體命名為Ph染色體，即費(fèi)城染色體。按照腫瘤染色體研究的標(biāo)本必須取自腫瘤組織本身的原則，白血病的染色體研究通常以采用骨髓為宜。17）易位或PML-RARa融合基因，則提示將對(duì)全反式維甲酸或三氧化二砷治療有良好的反應(yīng)；低滲30min低危t(8;21)、t(15;17)、inv(16)>50的超二倍體、t（12；1．伴有特殊細(xì)胞遺傳易位的AML

（1）伴有t(8;21)(q22;q22)AML,

AML1（CBFα）/ETO的AML

（2）伴有inv(16)(p13;q22)或

t(16;16)(p13;q22),

CBFβ/MYH11的骨髓嗜酸粒細(xì)胞增多的AML

（3）伴有t(15;17)(q22;q11-12),PML/RARα

及變異的急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋPL）

（4）伴有11q23(MLL)異常增生的AML根據(jù)Ph染色體的有無(wú)，可將CML與類(lèi)白血病反應(yīng)、骨髓增生綜合征及MDS相鑒別。1、非顯帶時(shí)期（1958-1970年）將培養(yǎng)物吸至尖底離心管，離心，1000轉(zhuǎn)/min，10min。17）易位或PML-RARa融合基因，則提示將對(duì)全反式維甲酸或三氧化二砷治療有良好的反應(yīng)；22）幾乎總是預(yù)后不良，需要高劑量化療和在首次CR后進(jìn)行異基因骨髓移植治療。PML-RARa融合蛋白既破壞了核體的正常結(jié)構(gòu)，又通過(guò)與PML或其他的維甲酸結(jié)合蛋白形成穩(wěn)定的異源二聚體，從而對(duì)野生型的PML和RARa等位基因起顯性的負(fù)調(diào)控作用，最終導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。重復(fù)固定三次，后兩次靜置時(shí)間至少15min。（四）inv（16）（p13q22）該易位約見(jiàn)于8%的AML和25%的AML-M4患者。7、固定。三、白血病染色體畸變的臨床和生物學(xué)意義

（一）克隆性染色體異常的檢出有助于白血病的診斷和鑒別診斷特別是一些特異性染色體的重排不僅有助于AML和ALL的鑒別，而且有助于進(jìn)一步識(shí)別它們中的亞型。1985年國(guó)際白血病形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)分型討論會(huì)將特異性染色體的重排和細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征、免疫學(xué)表型等一起列為白血病診斷分型的重要指標(biāo)，即以MIC分型代替既往單純以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)的FAB分型。新近世界衛(wèi)生組織WHO提出的直接用特異性染色體易位或免疫表型來(lái)命名白血病的亞型，這進(jìn)一步凸顯出了細(xì)胞遺傳學(xué)和免疫學(xué)在白血病診斷分型中的地位和作用。當(dāng)今WHO分型將AML分為四亞型：

伴有特殊染色體的AML

伴有病態(tài)造血的AML

治療相關(guān)的AML和MDS

不伴特殊細(xì)胞遺傳易位的AML

1．伴有特殊細(xì)胞遺傳易位的AML

（1）伴有t(8;21)(q22;q22)AML,

AML1（CBFα）/ETO的AML

（2）伴有inv(16)(p13;q22)或

t(16;16)(p13;q22),

CBFβ/MYH11的骨髓嗜酸粒細(xì)胞增多的AML

（3）伴有t(15;17)(q22;q11-12),PML/RARα

及變異的急性早幼粒細(xì)胞白血病（APL）

（4）伴有11q23(MLL)異常增生的AML

2．伴有多系增生異常的急性髓細(xì)胞白血病

（1）有MDS或MDS/MPD病史

（2）發(fā)病前無(wú)MDS病史

3．治療相關(guān)的AML和MDS

（1）與烷化劑相關(guān)

（2）與DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ抑制劑相關(guān)

（一些可以是淋巴系）

（3）其他

4．不伴特殊細(xì)胞遺傳易位的AML

（1）未分化AML

（2）未成熟AML

（3）成熟AML

（4）急性粒-單核細(xì)胞白血病

（5）急性單核細(xì)胞白血病

（6）急性紅白血病

（7）急性巨核細(xì)胞白血病

（8）急性嗜堿細(xì)胞白血病

（9）伴骨髓纖維化的急性全髓增生

（10）髓細(xì)胞肉瘤（二）染色體畸變可作為監(jiān)測(cè)急性白血病緩解、復(fù)發(fā)和CML急變的重要指標(biāo)急性白血病最初的核型異常經(jīng)過(guò)治療后完全消失而代之以正常核型提示CR。CR后原有異常重新出現(xiàn)，提示白血病復(fù)發(fā)。除原有異常外，又增添了新的異常，提示發(fā)生了克隆性核型演變，通常意味著疾病的進(jìn)展如CML加速期或急變期往往在原有的t(9;22)的基礎(chǔ)上出現(xiàn)+ph、+8、+19、

i（17q）、+21等異常。因此病程中反復(fù)多次染色體檢查有助于判斷急白的緩解、復(fù)發(fā)和CML急變。（三）性染色體標(biāo)志可用來(lái)驗(yàn)證異基因骨髓移植是否成功或確定白血病復(fù)發(fā)的來(lái)源（四）染色體是獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)并有助于治療方案的選擇診斷時(shí)的核型是急白最有價(jià)值的預(yù)后因素，它決定著患者獲得CR的幾率、CR持續(xù)時(shí)間和總生存期的長(zhǎng)短。根據(jù)核型可將急白患者分為三個(gè)不同的預(yù)后亞型

與急白預(yù)后相關(guān)的細(xì)胞遺傳學(xué)亞型核型預(yù)后等級(jí)

AMLALL低危t(8;21)、t(15;17)、inv(16)>50的超二倍體、t（12；21）正常核型、+8、+21、+22、11q23

中危del(9q)、del(7q)、del(12p)、-y正常核型、6q-、t(10;14)、

t(11;14)高危-5、-7、del（5q）、3q重排、t(9;22)、t(8;14)、t(4;11)、復(fù)雜異常（≥3種異常）亞二倍體/近單倍體

核型對(duì)治療方案的選擇也有一定的指導(dǎo)意義，最典型的例子為早幼粒細(xì)胞白血病患者若發(fā)現(xiàn)t（15；17）易位或PML-RARa融合基因，則提示將對(duì)全反式維甲酸或三氧化二砷治療有良好的反應(yīng)；反之，則療效不佳。t（12；21）易位或高二倍體ALL對(duì)左旋門(mén)冬酰胺酶和抗代謝藥物為主的化療方案反應(yīng)良好。t（1；19）則需要更強(qiáng)烈的方案方能獲得較好療效。t（4；11）和t（9；22）幾乎總是預(yù)后不良，需要高劑量化療和在首次CR后進(jìn)行異基因骨髓移植治療。（五）染色體發(fā)現(xiàn)為分子生物學(xué)研究提供了重要線(xiàn)索染色體易位斷裂點(diǎn)的克隆導(dǎo)致一系列與白血病有關(guān)的重要基因被相繼發(fā)現(xiàn)，這不但對(duì)于白血病的診斷及其微小殘留病的檢測(cè)有很大的應(yīng)用價(jià)值，而且對(duì)于研究白血病的發(fā)病機(jī)制和探索新的治療手段也有重要的理論意義。四、與FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排

（一）t（9；22）（q34;q11）Ph染色體約見(jiàn)于95%的CML患者，通常被認(rèn)為是CML的重要診斷標(biāo)志。根據(jù)Ph染色體的有無(wú)，可將CML與類(lèi)白血病反應(yīng)、骨髓增生綜合征及MDS相鑒別。分子生物學(xué)的研究證明，原位于9q34的ABL原癌基因易位到22q11上和BCR基因的一部分融合，產(chǎn)生BCR/ABL融合基因，后者轉(zhuǎn)錄為8.5Kb的BCR/ABL融合mRNA，最終翻譯成210KD的蛋白質(zhì)。該蛋白質(zhì)具有酪氨酸激酶的活性，它通過(guò)包括RAS在內(nèi)的多種信號(hào)傳導(dǎo)途徑來(lái)活化癌基因和某些細(xì)胞因子，最終導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。CML患者經(jīng)過(guò)新近問(wèn)世的BCR/ABL信號(hào)傳導(dǎo)抑制劑STI571治療后，100%的患者可獲得完全的血液學(xué)緩解，53%的病例有細(xì)胞遺傳學(xué)的反應(yīng)，其中13%為完全的細(xì)胞遺傳學(xué)反應(yīng)。（針對(duì)易位靶點(diǎn)的研究將在白血病的治療前景中發(fā)揮重要的作用。）

CML急變期，20%的患者保持46，t（9；22）核型不變，80%的患者可發(fā)生核型演變，即出現(xiàn)額外的染色體異常以致染色體眾數(shù)增加至47~50.最多見(jiàn)的額外染色體異常按出現(xiàn)的頻率的高低依次為2Ph、+8、i（17q）、+19和+21。它們可單獨(dú)或聯(lián)合出現(xiàn)。染色體的丟失較少見(jiàn)，其中-7約見(jiàn)于3%的患者，多為急淋變。額外異常通常比臨床和血液學(xué)急變征象早出現(xiàn)2~4個(gè)月，因此CML病程中定期進(jìn)行染色體檢測(cè)有助于早期診斷CML急變。染色體易位斷裂點(diǎn)的克隆導(dǎo)致一系列與白血病有關(guān)的重要基因被相繼發(fā)現(xiàn)，這不但對(duì)于白血病的診斷及其微小殘留病的檢測(cè)有很大的應(yīng)用價(jià)值，而且對(duì)于研究白血病的發(fā)病機(jī)制和探索新的治療手段也有重要的理論意義。低危t(8;21)、t(15;17)、inv(16)>50的超二倍體、t（12；采集標(biāo)本復(fù)雜異常（≥3種異常）亞二倍體/近單倍體3．治療相關(guān)的AML和MDS

（1）與烷化劑相關(guān)

（2）與DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ抑制劑相關(guān)

（一些可以是淋巴系）

（3）其他（四）染色體是獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)并有助于治療方案的選擇（二）染色體畸變可作為監(jiān)測(cè)急性白血病緩解、復(fù)發(fā)和CML急變的重要指標(biāo)17）易位或PML-RARa融合基因，則提示將對(duì)全反式維甲酸或三氧化二砷治療有良好的反應(yīng)；1960年Nowell和Hungerford在美國(guó)費(fèi)城發(fā)現(xiàn)了2例慢性粒細(xì)胞白血病患者外周血標(biāo)本中有小的異常染色體，這一發(fā)現(xiàn)迅速為許多其他學(xué)者所證實(shí)并將該異常染色體命名為Ph染色體，即費(fèi)城染色體。（一）t（9；一、白血病的細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史（二）t（8；核型對(duì)治療方案的選擇也有一定的指導(dǎo)意義，最典型的例子為早幼粒細(xì)胞白血病患者若發(fā)現(xiàn)t（15；將培養(yǎng)物吸至尖底離心管，離心，1000轉(zhuǎn)/min，10min。AMLALL急性白血病最初的核型異常經(jīng)過(guò)治療后完全消失而代之以正常核型提示CR。急性白血病最初的核型異常經(jīng)過(guò)治療后完全消失而代之以正常核型提示CR。21）易位或高二倍體ALL對(duì)左旋門(mén)冬酰胺酶和抗代謝藥物為主的化療方案反應(yīng)良好。靜置至少30min后，離心，1000轉(zhuǎn)/min，10min。雖然早在1914年德國(guó)學(xué)者Boveri就提出了染色體畸變是導(dǎo)致腫瘤的基本原因的假說(shuō)，可是由于受到技術(shù)的限制，長(zhǎng)時(shí)間以來(lái)人類(lèi)染色體的正確數(shù)目一直無(wú)法搞清楚，自然更談不上對(duì)腫瘤開(kāi)展研究了。因此病程中反復(fù)多次染色體檢查有助于判斷急白的緩解、復(fù)發(fā)和CML急變。CMLt(9;22),-Y

（二）t（8；21）（q22;q22）該易位和AML-M2有特別的聯(lián)系（92%為AML-M2，7%為AML-M4，個(gè)別為AML-M1）分子生物學(xué)研究揭示該易位導(dǎo)致原位于21q22的AML1基因易位到8q22上和位于該處的ETO基因并置，形成AML1-ETO融合基因。AML1系核心結(jié)合因子（CBF）的a亞單位。正常情況下，它和CBFβ亞單位結(jié)合，形成異二聚體的轉(zhuǎn)錄因子，從而調(diào)節(jié)許多與髓系細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化有關(guān)的基因的表達(dá)。AML1-ETO融合基因通過(guò)對(duì)殘存的正常的CBFa/β轉(zhuǎn)錄因子的顯性負(fù)調(diào)控作用，干擾了有關(guān)基因的表達(dá)，最終導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。

（三）t（15；17）（q22;q21）該易位只見(jiàn)于早幼粒細(xì)胞白血病，即AML-M3。約85%的AML-M3包括粗顆粒型和細(xì)顆粒型均可檢出t（15；17），因而成為該型白血病高度特異的細(xì)胞遺傳學(xué)標(biāo)志。分子遺傳學(xué)研究揭示原位于17q上的維甲酸受體a基因（RARa）易位到15q上和位于該處的早幼粒細(xì)胞白血病基因（PML）融合，形成PML-RARa融合基因。正常情況下，PML顯示類(lèi)似腫瘤抑制基因的活性，RARa則有促進(jìn)分化和抑制生長(zhǎng)的活性。PML-RARa融合蛋白既破壞了核體的正常結(jié)構(gòu)，又通過(guò)與PML或其他的維甲酸結(jié)合蛋白形成穩(wěn)定的異源二聚體，從而對(duì)野生型的PML和RARa等位基因起顯性的負(fù)調(diào)控作用，最終導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。

臨床上凡具有t（15；17）易位或PML-RARa融合基因的AML-M3病例應(yīng)用全反式維甲酸治療有效，反之則無(wú)反應(yīng)，表明t（15；17）的有無(wú)對(duì)AML-M3的治療有指導(dǎo)作用。（1988年我國(guó)學(xué)者王振義在國(guó)際上首先成功應(yīng)用全反式維甲酸（ATRA）治療急性粒細(xì)胞性白血病（APL），不僅取得了很高的完全緩解(CR)率，而且不誘發(fā)DIC，不引起骨髓抑制，開(kāi)辟了一條有別于聯(lián)合化療誘導(dǎo)治療APL的新途徑。由于費(fèi)用低廉，使用方便等優(yōu)點(diǎn)，ATRA是目前公認(rèn)的誘導(dǎo)治療APL的首選藥物）

（四）inv（16）（p13q22）該易位約見(jiàn)于8%的AML和25%的AML-M4患者。分子生物學(xué)研究揭示inv（16）導(dǎo)致原位于16p13上的平滑肌肌球蛋白重鏈基因（MYH11）和位于16q22上CBFβ基因斷裂后并置在一起，形成CBFβ-MYH11融合基因。與AML1-ETO融合基因一樣，CBFβ-MYH11由于阻斷了CBFa/β的轉(zhuǎn)錄激活功能而導(dǎo)致關(guān)鍵靶基因表達(dá)誘導(dǎo)的阻斷。這一重要發(fā)現(xiàn)被公認(rèn)為細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)展史上的第一個(gè)里程碑。重復(fù)固定三次，后兩次靜置時(shí)間至少15min。1、標(biāo)本采集。AMLALL用吸管將細(xì)胞懸液輕輕打勻后吸取少量，從10cm高處滴至冰水浸泡過(guò)的玻片上，每片三滴，然后在酒精燈上來(lái)回通過(guò)數(shù)次，使其干燥。分子生物學(xué)研究揭示inv（16）導(dǎo)致原位于16p13上的平滑肌肌球蛋白重鏈基因（MYH11）和位于16q22上CBFβ基因斷裂后并置在一起，形成CBFβ-MYH11融合基因。分子遺傳學(xué)研究揭示原位于17q上的維甲酸受體a基因（RARa）易位到15q上和位于該處的早幼粒細(xì)胞白血病基因（PML）融合，形成PML-RARa融合基因。9、顯帶。AMLALL17）易位或PML-RARa融合基因，則提示將對(duì)全反式維甲酸或三氧化二砷治療有良好的反應(yīng)；核型對(duì)治療方案的選擇也有一定的指導(dǎo)意義，最典型的例子為早幼粒細(xì)胞白血病患者若發(fā)現(xiàn)t（15；分子生物學(xué)的研究證明，原位于9q34的ABL原癌基因易位到22q11上和BCR基因的一部分融合，產(chǎn)生BCR/ABL融合基因，后者轉(zhuǎn)錄為8.17）易位或PML-RARa融合基因，則提示將對(duì)全反式維甲酸或三氧化二砷治療有良好的反應(yīng)；約85%的AML-M3包括粗顆粒型和細(xì)顆粒型均可檢出t（15；075mol/L的KCl溶液6~8ml，吹打混勻后置37℃溫箱中30min。該蛋白質(zhì)具有酪氨酸激酶的活性，它通過(guò)包括RAS在內(nèi)的多種信號(hào)傳導(dǎo)途徑來(lái)活化癌基因和某些細(xì)胞因子，最終導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。22）幾乎總是預(yù)后不良，需要高劑量化療和在首次CR后進(jìn)行異基因骨髓移植治療。1、非顯帶時(shí)期（1958-1970年）3．治療相關(guān)的AML和MDS

（1）與烷化劑相關(guān)

（2）與DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ抑制劑相關(guān)

（一些可以是淋巴系）

（3）其他CMLt(9;22),-Y

（五）t/del（11）（q23）該異常和單核細(xì)胞白血病有特別的聯(lián)系，約見(jiàn)于22%的AML-M5。它可以是單獨(dú)缺失，也可以是易位，后者常涉及11q23，而其“對(duì)手”染色體則不固定，約有54種之多。分子生物學(xué)研究揭示，所有這些融合蛋白都導(dǎo)致原位于11q23的MLL基因的激活區(qū)缺失，干擾了野生型的MLL基因?qū)ζ湎掠蜨OX基因表達(dá)的調(diào)節(jié)，從而導(dǎo)致白血病的發(fā)生。ThankYou一、白血病的細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史

雖然早在1914年德國(guó)學(xué)者Boveri就提出了染色體畸變是導(dǎo)致腫瘤的基本原因的假說(shuō)，可是由于受到技術(shù)的限制，長(zhǎng)時(shí)間以來(lái)人類(lèi)染色體的正確數(shù)目一直無(wú)法搞清楚，自然更談不上對(duì)腫瘤開(kāi)展研究了。1956年Tjio和Levan通過(guò)人胚胎肺的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，終于確定人類(lèi)染色體的正確數(shù)目為46.這一重要發(fā)現(xiàn)被公認(rèn)為細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)展史上的第一個(gè)里程碑。1958年Ford等在一例急性白血病患者的骨髓細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有44個(gè)染色體和1個(gè)斷片的非整倍體異常，標(biāo)志著白血病染色體研究的開(kāi)始。1960年Nowell和Hungerford在美國(guó)費(fèi)城發(fā)現(xiàn)了2例慢性粒細(xì)胞白血病患者外周血標(biāo)本中有小的異常染色體，這一發(fā)現(xiàn)迅速為許多其他學(xué)者所證實(shí)并將該異常染色體命名為Ph染色體，即費(fèi)城染色體。這是人類(lèi)腫瘤中第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的標(biāo)記染色體，它激起了人們對(duì)腫瘤染色體研究的巨大熱情，遂被公認(rèn)為細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)展史上的第二個(gè)里程碑。6、預(yù)固定。加入3：1甲醇、冰醋酸固定液1ml，吹打混勻。離心，1000轉(zhuǎn)/min，10min。

7、固定。吸去上清液，加新鮮配制的3：1甲醇、冰醋酸固定液6~8ml，吹打混勻。靜置至少30min后，離心，1000轉(zhuǎn)/min，10min。重復(fù)固定三次，后兩次靜置時(shí)間至少15min。

8、制片。用吸管將細(xì)胞懸液輕輕打勻后吸取少量，從10cm高處滴至冰水浸泡過(guò)的玻片上，每片三滴，然后在酒精燈上來(lái)回通過(guò)數(shù)次，使其干燥。

9、顯帶。將玻片置于預(yù)溫至87.5℃的R顯帶液中孵育，時(shí)間以60~120min為宜。

10、染色。標(biāo)本用10%的Giemsa染色液染色10~20min，流水沖洗，待干，鏡檢。

核型對(duì)治療方案的選擇也有一定的指導(dǎo)意義，最典型的例子為早幼粒細(xì)胞白血病患者若發(fā)現(xiàn)t（15；17）易位或PML-RARa融合基因，則提示將對(duì)全反式維甲酸或三氧化二砷治療有良好的反應(yīng)；反之，則療效不佳。t（12；21）易位或高二倍體ALL對(duì)左旋門(mén)冬酰胺酶和抗代謝藥物為主的化療方案反應(yīng)良好。t（1；19）則需要更強(qiáng)烈的方案方能獲得較好療效。t（4；11）和t（9；22）幾乎總是預(yù)后不良，需要高劑量化療和在首次CR后進(jìn)行異基因骨髓移植治療。（五）染色體發(fā)現(xiàn)為分子生物學(xué)研究提供了重要線(xiàn)索染色體易位斷裂點(diǎn)的克隆導(dǎo)致一系列與白血病有關(guān)的重要基因被相繼發(fā)現(xiàn)，這不但對(duì)于白血病的診斷及其微小殘留病的檢測(cè)有很大的應(yīng)用價(jià)值，而且對(duì)于研究白血病的發(fā)病機(jī)制和探索新的治療手段也有重要的理論意義。17），因而成為該型白血病高度特異的細(xì)胞遺傳學(xué)標(biāo)志。8、制片。2、顯帶時(shí)期（1970年后）該蛋白質(zhì)具有酪氨酸激酶的活性，它通過(guò)包括RAS在內(nèi)的多種信號(hào)傳導(dǎo)途徑來(lái)活化癌基因和某些細(xì)胞因子，最終導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。1956年Tjio和Levan通過(guò)人胚胎肺的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，終于確定人類(lèi)染色體的正確數(shù)目為46.1960年Nowell和Hungerford在美國(guó)費(fèi)城發(fā)現(xiàn)了2例慢性粒細(xì)胞白血病患者外周血標(biāo)本中有小的異常染色體，這一發(fā)現(xiàn)迅速為許多其他學(xué)者所證實(shí)并將該異常染色體命名為Ph染色體，即費(fèi)城染色體。17），因而成為該型白血病高度特異的細(xì)胞遺傳學(xué)標(biāo)志。與急白預(yù)后相關(guān)的細(xì)胞遺傳學(xué)亞型用吸管將細(xì)胞懸液輕輕打勻后吸取少量，從10cm高處滴至冰水浸泡過(guò)的玻片上，每片三滴，然后在酒精燈上來(lái)回通過(guò)數(shù)次，使其干燥。這是人類(lèi)腫瘤中第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的標(biāo)記染色體，它激起了人們對(duì)腫瘤染色體研究的巨大熱情，遂被公認(rèn)為細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)展史上的第二個(gè)里程碑。1960年Nowell和Hungerford在美國(guó)費(fèi)城發(fā)現(xiàn)了2例慢性粒細(xì)胞白血病患者外周血標(biāo)本中有小的異常染色體，這一發(fā)現(xiàn)迅速為許多其他學(xué)者所證實(shí)并將該異常染色體命名為Ph染色體，即費(fèi)城染色體。7、固定。（五）染色體發(fā)現(xiàn)為分子生物學(xué)研究提供了重要線(xiàn)索約85%的AML-M3包括粗顆粒型和細(xì)顆粒型均可檢出t（15；1、非顯帶時(shí)期（1958-1970年）CMLt(9;22),-Y17），因而成為該型白血病高度特異的細(xì)胞遺傳學(xué)標(biāo)志。重復(fù)固定三次，后兩次靜置時(shí)間至少15min。按照腫瘤染色體研究的標(biāo)本必須取自腫瘤組織本身的原則，白血病的染色體研究通常以采用骨髓為宜。（針對(duì)易位靶點(diǎn)的研究將在白血病的治療前景中發(fā)揮重要的作用。

（三）t（15；17）（q22;q21）該易位只見(jiàn)于早幼粒細(xì)胞白血病，即AML-M3。約85%的AML-M3包括粗顆粒型和細(xì)顆粒型均可檢出t（15；17），因而成為該型白血病高度特異的細(xì)胞遺傳學(xué)標(biāo)志。分子遺傳學(xué)研究揭示原位于17q上的維甲酸受體a基因（RARa）易位到15q上和位于該處的早幼粒細(xì)胞白血病基因（PML）融合，形成PML-RARa融合基因。正常情況下，PML顯示類(lèi)似腫瘤抑制基因的活性，RARa則有促進(jìn)分化和抑制生長(zhǎng)的活性。PML-RARa融合蛋白既破壞了核體的正常結(jié)構(gòu)，又通過(guò)與PML或其他的維甲酸結(jié)合蛋白形成穩(wěn)定的異源二聚體，從而對(duì)野生型的PML和RARa等位基因起顯性的負(fù)調(diào)控作用，最終導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。

吸去上清液，加新鮮配制的3：1甲醇、冰醋酸固定液6~8ml，吹打混勻。與AML1-ETO融合基因一樣，CBFβ-MYH11由于阻斷了CBFa/β的轉(zhuǎn)錄激活功能而導(dǎo)致關(guān)鍵靶基因表達(dá)誘導(dǎo)的阻斷。PML-RARa融合蛋白既破壞了核體的正常結(jié)構(gòu)，又通過(guò)與PML或其他的維甲酸結(jié)合蛋白形成穩(wěn)定的異源二聚體，從而對(duì)野生型的PML和RARa等位基因起顯性的負(fù)調(diào)控作用，最終導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。這一重要發(fā)現(xiàn)被公認(rèn)為細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)展史上的第一個(gè)里程碑。17），因而成為該型白血病高度特異的細(xì)胞遺傳學(xué)標(biāo)志。一、白血病的細(xì)胞遺傳學(xué)發(fā)展簡(jiǎn)史將培養(yǎng)物吸至尖底離心管，離心，1000轉(zhuǎn)/min，10min。四、與FAB亞型相關(guān)的特異性染色體重排加入3：1甲醇、冰醋酸固定液1ml，吹打混勻。22）（q34;q11）Ph染色體約見(jiàn)于95%的CML患者，通常被認(rèn)為是CML的重要診斷標(biāo)志。白血病的染色體研究大致經(jīng)歷了以下4個(gè)發(fā)展階段：（二）染色體畸變可作為監(jiān)測(cè)急性白血病緩解、復(fù)發(fā)和CML急變的重要指標(biāo)分子遺傳學(xué)研究揭示原位于17q上的維