實驗室儀器設備器皿及用具演示文稿

實驗室儀器設備器皿及用具演示文稿當前第1頁\共有65頁\編于星期二\6點實驗室儀器設備器皿及用具當前第2頁\共有65頁\編于星期二\6點

組織培養(yǎng)實驗室布局的總體要求

便于隔離便于操作便于滅菌便于觀察一、實驗室設置基本布局規(guī)律根據實驗操作程序排列實驗室；接種室和培養(yǎng)室設在與外界環(huán)境隔離性好的區(qū)域；滅菌室與接種室相鄰；其他實驗室的布局可根據條件，以方便使用為宜。當前第3頁\共有65頁\編于星期二\6點基本實驗室輔助實驗室實驗室組成準備室緩沖室無菌操作室培養(yǎng)室細胞生物學實驗室溫室生化分析實驗室當前第4頁\共有65頁\編于星期二\6點基本實驗室布局平面圖實驗臺擱架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架藥品及儀器柜無菌臺無菌臺擱架拉窗冰箱擱架水槽電爐門4.5m3.0m3.5m4.0m準備室緩沖室無菌室培養(yǎng)室當前第5頁\共有65頁\編于星期二\6點植物組織培養(yǎng)實驗室布局示意圖培養(yǎng)室準備室滅菌室儲藏室接種室緩沖室當前第6頁\共有65頁\編于星期二\6點組織培養(yǎng)準備實驗室當前第7頁\共有65頁\編于星期二\6點1.準備室1.1洗滌間根據工作量的大小決定其大小，一般面積控制在30-50m2。在實驗室的一側設置專用的洗滌水槽，用來清洗玻璃器皿。中央實驗臺還應配置2個水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以購置一臺洗瓶機。準備1-2個洗液缸，專門用于洗滌對潔凈度要求很高的玻璃器皿。此外還應配置落水架、干燥箱、柜子、超聲波清洗器等。地面應耐濕并排水良好。當前第8頁\共有65頁\編于星期二\6點超聲波清洗器當前第9頁\共有65頁\編于星期二\6點

面積60平方米左右，配備的主要儀器設備有：冰箱、天平、微波爐、pH計、培養(yǎng)基分裝器、藥品柜、器械柜、抽氣泵、電爐、各種規(guī)格的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶、儲藏瓶等。冰箱以體積180-200L為宜，用于儲存培養(yǎng)基母液、激素維生素等貴重藥品、彩色膠卷、及保存植物材料。天平應有不同感量。

1.2培養(yǎng)基配制間1.準備室當前第10頁\共有65頁\編于星期二\6點當前第11頁\共有65頁\編于星期二\6點

配備實驗臺、高壓滅菌鍋、排風滅火設備、細菌過濾設備、干熱消毒柜、電爐等。滅菌鍋的選擇應根據不同的要求選擇不同型號的滅菌鍋。一般實驗室可選用小型的醫(yī)用手提式高壓滅菌鍋，較大的實驗室可選用立式自動控制壓力和溫度的滅菌鍋。生產性的實驗室可選用大型的臥式滅菌鍋。

如果沒有條件的話，可以將上述工作間合并成一個準備間，要求是設備的安裝和排列要合理、房間要寬敞、明亮、透風，地面要便于清潔、防滑。

1.3消毒間1.準備室當前第12頁\共有65頁\編于星期二\6點2.緩沖室當前第13頁\共有65頁\編于星期二\6點無菌操作室主要用于實驗材料的接種操作，所以又叫接種室。通常由里外兩間組成，外間是緩沖間，用于準備工作，還有防止污染的作用。緩沖間的門應該與接種室的門錯開，兩個門也不要同時開啟，以保證無菌室不因開門和人的進出帶進雜菌。緩沖間內應該設有水槽、實驗臺、鞋帽架、和柜子、紫外燈。無菌操作室的內壁應當用塑鋼板或瓷磚裝修，工作人員進入操作間前要穿上消過毒的工作服和拖鞋。

室內應配有超凈工作臺，紫外燈、解剖鏡、各種接種器械等。3.無菌操作室當前第14頁\共有65頁\編于星期二\6點無菌室當前第15頁\共有65頁\編于星期二\6點無菌室當前第16頁\共有65頁\編于星期二\6點

為了控制培養(yǎng)室的溫度和光照時間及其強度，培養(yǎng)室的房間不要窗戶，但應當留一個通氣窗，并安上排氣扇。室內溫度由空調控制，光照由日光燈控制。天花板和內墻最好用塑料鋼板裝修，地面用水磨石或瓷磚鋪設，一般要分兩間，一為光照培養(yǎng)室，一為暗培養(yǎng)。

培養(yǎng)室外應有一預備間或走廊。

培養(yǎng)室應配有培養(yǎng)架、轉床、搖床、光照培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、自動控時器等。日光燈一般用40W，固定在培養(yǎng)架的側面或擱板的下面，每層有兩支日光燈，距離在20cm，光照強度為2000-3000lx。

4.培養(yǎng)室當前第17頁\共有65頁\編于星期二\6點設計組培實驗室時的注意事項為了減少污染，實驗室最好設一走廊且走廊上方最好安裝紫外燈；培養(yǎng)室最好設在南面，設大玻璃窗，以雙層玻璃窗為最好。如果培養(yǎng)室是設在房屋的邊側，其東邊或西邊的墻上也可設置大玻璃窗；培養(yǎng)室房間及門要小，而且密閉性要好，最好裝移門；無菌操作室要小，要設緩沖間，也最好裝移門，且門要稍大一些。當前第18頁\共有65頁\編于星期二\6點二、儀器與設備1、基本設備

冰箱、電爐、酸度計、純水器、天平、培養(yǎng)基分裝器、攪拌器等。當前第19頁\共有65頁\編于星期二\6點酸度計電熱套當前第20頁\共有65頁\編于星期二\6點天平當前第21頁\共有65頁\編于星期二\6點培養(yǎng)基分裝器攪拌器當前第22頁\共有65頁\編于星期二\6點2、滅菌設備蒸汽壓力滅菌鍋、干熱消毒柜、過濾滅菌裝置、噴霧消毒器、紫外燈。當前第23頁\共有65頁\編于星期二\6點蒸汽壓力滅菌鍋當前第24頁\共有65頁\編于星期二\6點干熱消毒柜

利用高溫干熱對微生物有氧化、蛋白質變性、電介質濃縮引起中毒等作用。其中主要是通過氧化作用破壞細胞原生質，使微生物死亡，所以在一定的加熱時間內可殺死一切微生物。當前第25頁\共有65頁\編于星期二\6點無菌瓶頂過濾裝置噴霧消毒器（參考圖）（參考圖）當前第26頁\共有65頁\編于星期二\6點接種器具消毒器當前第27頁\共有65頁\編于星期二\6點3、無菌操作設備

超凈工作臺當前第28頁\共有65頁\編于星期二\6點無菌接種箱當前第29頁\共有65頁\編于星期二\6點4、細胞培養(yǎng)設備搖床當前第30頁\共有65頁\編于星期二\6點培養(yǎng)架當前第31頁\共有65頁\編于星期二\6點恒溫振蕩培養(yǎng)箱

光照培養(yǎng)箱當前第32頁\共有65頁\編于星期二\6點5、細胞學鑒定設備光學研究顯微鏡、實體顯微鏡、倒置顯微鏡倒置顯微鏡光學顯微鏡當前第33頁\共有65頁\編于星期二\6點1、玻璃器皿三、培養(yǎng)器皿及實驗用具培養(yǎng)皿三角瓶培養(yǎng)瓶當前第34頁\共有65頁\編于星期二\6點2、金屬材質用具鑷子解剖刀接種針當前第35頁\共有65頁\編于星期二\6點1、玻璃器皿洗滌新購置玻璃器皿1%稀HCl浸漬12h洗衣粉洗滌清水沖洗晾干備用已用過的玻璃器皿四、洗滌技術當前第36頁\共有65頁\編于星期二\6點清洗后器皿內外不可掛有水珠，否則重洗，若重洗后仍掛有水珠，則需用洗液浸泡數小時后（或用去污粉擦洗），重新清洗。

當前第37頁\共有65頁\編于星期二\6點2、塑料用品洗滌新的塑料器皿打開即用已用過的塑料器皿2%NaOH浸泡12h清水沖洗2%—5%鹽酸浸泡30min清水沖洗蒸餾水沖洗晾干備用當前第38頁\共有65頁\編于星期二\6點

金屬用品一般不宜用各種洗滌液洗滌（新的可以用熱洗衣粉水洗凈），需要清洗時，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。3、金屬用品洗滌當前第39頁\共有65頁\編于星期二\6點

（一）、滅菌工作是極其重要的。

首先應建立有菌和無菌的概念有菌的范疇：

有菌：凡是暴露在空氣中的物體，至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超凈工作臺的臺面，未處理的工具和手等。

無菌：高壓高溫處理（工具、器皿、培養(yǎng)基等）

物理或化學處理；

火烤后的物體；

健康的動植物不與內外部表面接觸的組織

內部可能是無菌的（有時也有內生菌，但

不會影響培養(yǎng)，也不會污染）

五.滅菌技術當前第40頁\共有65頁\編于星期二\6點1、物理方法：干熱、濕熱、過濾（0.25微米）紫外燈、超聲波等。

2、化學方法：使用滅菌劑或抗菌素，如酒精、次氯酸鈉、升汞、漂白粉、高錳酸鉀、雙氧水、福爾馬林等。

五.滅菌技術當前第41頁\共有65頁\編于星期二\6點干熱滅菌玻璃器皿、器械濕熱滅菌培養(yǎng)基、蒸餾水、器械、棉塞等熏蒸滅菌接種室、培養(yǎng)室過濾滅菌液體培養(yǎng)基、蒸餾水藥劑滅菌培養(yǎng)材料燒灼滅菌器械、瓶口、棉塞、包頭紙輻射滅菌

接種室、培養(yǎng)間（一）各種滅菌方法及其使用范圍當前第42頁\共有65頁\編于星期二\6點

適用于玻璃器皿和金屬器械的滅菌。操作方法：150℃、40min或120℃、120min，如果發(fā)現芽孢桿菌，160℃、90～120min（1）干熱滅菌當前第43頁\共有65頁\編于星期二\6點

適用于各種器皿、培養(yǎng)基、器皿、蒸餾水、棉塞、紙等。121℃維持20～30min

注意點：加足水、排盡氣、氣壓降到0時，才能開蓋。（2）濕熱滅菌當前第44頁\共有65頁\編于星期二\6點

培養(yǎng)基的滅菌一般用高壓高溫處理，但如果培養(yǎng)基中某些成分遇到高溫分解（如某些生長調節(jié)劑GA3、玉米素等），就需要過濾滅菌。另外酶、血清等也需要過濾滅菌。

滅菌方法：將生長調節(jié)劑或酶配成一定濃度，用注射器注入微孔濾膜慮，濾膜孔徑0.22～0.45微米。制培養(yǎng)基時，現將培養(yǎng)基高壓滅菌，待降至50℃左右時，加入適量的激素，然后分裝。

（3）過濾滅菌當前第45頁\共有65頁\編于星期二\6點主要是利用紫外燈進行照射，適合實驗室空氣、操作臺等，滅菌時間20～30min。

注意：關燈后5min后再進入。超凈工作臺關燈后要打開風機。（4）射線滅菌當前第46頁\共有65頁\編于星期二\6點

用火焰灼燒達到滅菌目的，適用于接種器皿的滅菌。（5）火焰灼燒滅菌當前第47頁\共有65頁\編于星期二\6點

適用外植體、實驗器皿、操作表面、皮膚等。

幾種常用消毒劑的效果比較

消毒劑使用濃度(%)消毒時間(min.)效果殘液去除難易乙醇70-750.1-3好易新潔爾滅10～205～30好易氯化汞0.1～12～15最好最難過氧化氫10～125～15較好最易抗菌素4～50mgl-130～60較好較難次氯酸鈣/納9～105～30好易（6）消毒劑當前第48頁\共有65頁\編于星期二\6點

長期不用的培養(yǎng)室或接種室要進行熏蒸。方法：甲醛、高錳酸鉀熏蒸。

甲醛的用量通常按每立方米空間2-6毫升計算，高錳酸鉀的用量是甲醛的一半。室內準備妥當后，把稱好的高錳酸鉀放在瓷碗或燒杯內(最好在碗或杯下面鋪一張報紙，以利清洗)，然后將甲醛也倒入碗或杯內，立即出屋關門。幾秒鐘后，甲醛溶液即沸騰揮發(fā)。高錳酸鉀是一種氧化劑，當它與一部分甲醛作用時，由氧化反應產生的熱可使其余的甲醛揮發(fā)為氣體。（7）熏蒸滅菌當前第49頁\共有65頁\編于星期二\6點

甲醛熏蒸接種室應至少在使用前24小時進行，熏蒸后密閉保持4小時以上再進入室內工作。甲醛對人的眼、鼻有強烈刺激作用。因此，可在使用前用氨進行中和。取與甲醛等量的氨水，倒在另一個燒杯里，迅速放入熏蒸室內，使甲醛和氨水發(fā)生中和反應，以消除甲醛味，減少對人體的刺激作用。使用氨水應在工作前2小時進行。

對有材料的培養(yǎng)室，也可以采用乙二醇加熱熏蒸。當前第50頁\共有65頁\編于星期二\6點（二）接種室滅菌空氣消毒滅菌接種室超凈工作臺紫外燈照射70%—75%的酒精擦洗培養(yǎng)材料的接種紫外燈照射當前第51頁\共有65頁\編于星期二\6點（三）外植體滅菌流水沖洗10—20min或更長時間70%—75%酒精中浸泡30s0.1%—0.2%氯化汞液中浸泡10min左右蒸餾水沖洗4—5次在10%的次氯酸鈉、飽和漂白粉浸泡30min左右備用當前第52頁\共有65頁\編于星期二\6點常用消毒劑消毒滅菌比較表消毒劑使用濃度（%）去除難易消毒時間（min）效果次氯酸鈣次氯酸鈉漂白粉溴水過氧化氫升汞酒精抗生素硝酸銀9~102飽和溶液1~210~120.1~170~754~5（mg/L1易易易易最易較難易中較難5~305~305~302~105~152~100.2~230~605~30很好很好很好很好好最好好較好好當前第53頁\共有65頁\編于星期二\6點污染來源人為因素（工作人員本身）：工作服、帽、口罩、酒精擦手。物品因素器皿和用具培養(yǎng)皿：洗→熱壓玻璃器皿：洗→干熱（干熱箱）或晾干接種用具：用CCL4布擦→濕布擦→泡75%~95%酒精→燒培養(yǎng)基：濕熱培養(yǎng)材料外部細菌：用水沖洗→化學藥劑處理內部細菌莖尖培養(yǎng)加抗生素：青霉素、利福平操作的空氣：洗刷地板95%酒精擦超凈工作臺用化學試劑薰蒸六、無菌操作技術

當前第54頁\共有65頁\編于星期二\6點

1、實驗器具和材料的準備

2、用75%的酒精擦拭超凈工作臺，然后室內及超凈工作臺用紫外燈殺菌20min-30min。注意：臺面上的用品不要放置太多或重疊放置，以免降低滅菌效果。

3、關紫外燈、打開風機，過5-10min進入緩沖間，以75%洗手和手臂，更換無菌服、帽子和口罩。進入接種室。（注：沒有特別情況，盡量不要下工作臺）

六、無菌操作技術

當前第55頁\共有65頁\編于星期二\6點

4、用70－75％的酒精拭擦臺面并消毒雙手。試驗用具也應該用酒精消毒。點燃酒精燈，將金屬器械在其火焰上灼燒，冷卻待用。

注意：所有操作應在火焰近處并經過灼燒進行。金屬器械不能過度灼燒，以防退火。移液管不能灼燒，培養(yǎng)瓶口、塑料材料、橡膠材料過火焰不能時間太長。當前第56頁\共有65頁\編于星期二\6點5、取流水沖洗（至少30min）過的外植體，用一定的消毒劑浸泡消毒，用無菌水沖洗3~4次，放入無菌培養(yǎng)皿中，置于酒精燈火焰下方，用無菌的接種器械進行分離、切割或其他處理。

6、打開培養(yǎng)瓶，瓶口在燈焰處旋轉灼燒，用鑷子將培養(yǎng)材料置于培養(yǎng)基上，灼燒鑷子放回，灼燒瓶口，蓋上瓶塞。

7、用酒精擦洗工作臺和手。進行下一輪操作。當前第57頁\共有65頁\編于星期二\6點注意（1）進行培養(yǎng)時，動作要準確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動，增加污染機會。（2）不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。（3）為拿取方便，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應是右手使用的東西放置在右側，左手用品在左側，酒精燈置于中央。（4）工作由始至終要保持一定順