中藥的含藥血清藥理研究方法

經典word整理文檔，僅參考，轉Word此處可刪除頁眉頁腳。本資料屬于網絡整理，如有侵權，請聯(lián)系刪除，謝謝！實用文檔中藥含藥血清藥理研究方法概述中藥血清藥理研究方法：是指動物灌胃給予中藥及制劑，經吸收進入機體血液循環(huán)，在一定時間內采取血液，分離所得血清，必定含有一定量的該藥物成分，胞培養(yǎng)體系，觀察其藥理作用的體外實驗方法。中藥血清藥理學研究方法的意義：1、采取的含藥物血清與機體內環(huán)境相一致且排除了中藥制劑pH培養(yǎng)體系，觀察其藥理作用，具有更好的科學性，可行性；細胞分子水平藥細胞分子藥理學研究具有重要的促進作用。2、創(chuàng)了對于許多成分不明或復方中藥制劑藥動學研究的一種新方法。3、中藥藥效與中藥成分的研究更能協(xié)調一致。從1988年日本學者田代真一正式提出了“血清藥理學”這一新概念，至今已有十余年時間。其研究主要經歷了三個階段：1、可行性探索研究2、方法學研究3、應用研究階段。文案大全實用文檔可行性探索研究有所探索，自田代真一提出“血清藥理學”的概念以后，重新引起了學術界的廣泛關注。國內學者對其進行了廣泛的可行性探索研究。一.抗菌、抗病毒的實驗研究楊奎等應用中藥血清藥理方法進行了中藥體外抗菌實驗，發(fā)現(xiàn)黃芩、藿香正氣水、藿香正氣液的血清分別具有明顯的抑菌作用，抑制率高達70％以上。該研究發(fā)現(xiàn)一些含中藥血清相對于正常血清表現(xiàn)為促進細菌繁殖作用，表明一些中藥可以降低機體抗御外邪的能力。同時，該研究還發(fā)現(xiàn)，不論是中藥復方，還是單味中藥，均可出現(xiàn)多個抑菌高峰，表明中藥抗菌有效成分復雜，其吸收高峰不相一致，可以對細菌給予多次打擊，有利于抑制其繁殖。崔曉蘭等應用口飼桂枝湯的含藥血清進行研究，發(fā)現(xiàn)每日1次連續(xù)32小時的血清有明顯抑制副流感病毒致細胞病變防止假陰性實驗結果的出現(xiàn)。二.對單核細胞產生內生致熱原的研究楊奎等觀察了口飼黃芩、香薷、羌活勝濕湯、九味羌活丸的含藥血清對家兔單核細胞內生致熱原產生過程中單核細胞內、蛋白質合成速度及Ca2+文案大全實用文檔顯抑制單核細胞內DNA合成，抑制Ca內流，并推測出黃芩解熱機2+理之一是通過抑制單核細胞內DNA合成，抑制Ca內流而阻斷內生2+致熱原的合成。含香薷血清、含羌活勝濕湯血清、含九味羌活丸血清三者對單核細胞內DNA合成均有明顯抑制作用；對單核細胞Ca內2+量效遞增性抑制作用時效關系表明，九味羌活丸對Ca內流的抑制作用在給藥后90min達高峰，對2+DNA合成的抑制作用在給藥后30min和90min作用較明顯。三.抗腫瘤作用的實驗研究王力倩等采用中藥血清藥理研究方法進行離體試驗，觀察了含苦含藥血清藥理研究對中藥抗腫瘤作用的評價有一定的意義。四.對造血系統(tǒng)的實驗研究張英華等用血清藥理方法研究了當歸補血湯對造血祖細胞的影CFU－GMCFU－）的增殖有明顯的促進作用，隨著含藥血清量的增加，CFU－GM、CFU－E的增殖數(shù)越高。提示當歸文案大全實用文檔有側重，又互相合作，共同調節(jié)機體的造血補血機能。而當歸補血湯煎液對CFU－GM－E血清藥理體外實驗方法克服了中藥粗提物進行體外實驗的弊端，是一種更為科學有效的中藥復方體外實驗方法。五.對呼吸系統(tǒng)的實驗研究明顯抑制組胺引起的離體豚鼠回腸的收縮，表明金蕎麥片具有H受1時效關系表明等效劑量的金蕎麥片給予豚鼠40分鐘出現(xiàn)效應，80分鐘到達峰值，160分鐘效應開始衰減，效應至少可以維持160分鐘。量效關系表明：3倍與9好的量效關系，與直接煎劑進行離體藥理實驗具有相似的藥理效應。2小時，表明血清藥效實驗的可靠性及可信度在某些方面優(yōu)于通常的藥理實驗。文案大全實用文檔六.對心血管系統(tǒng)的實驗研究張群豪等采用血清藥理方法觀察到口飼血府逐瘀濃縮丸的含藥SMC呈現(xiàn)出對SME繁殖的抑制作用，且煎劑濃縮液作用強于含藥血清。表明血府逐瘀濃縮丸在體內外確均有抑制SMC增殖的作用，血府逐瘀濃縮丸確含抗SMC增殖的有效成分，并且此成分口服有效。血府從消化道吸收或經體內代謝失活有關。王偉等用血清藥理研究方法觀察到血府逐瘀膠囊、精制血府膠氫酶（－）的釋放，且胞的保護作用強于血府逐瘀膠囊。劉強等觀察了清心飲對大鼠心肌細胞感染柯薩奇B病毒的影3響，發(fā)現(xiàn)清心飲的含藥血清可明顯減輕實驗性病毒心肌炎的細胞病變，改善細胞搏動，降低細胞上清液中的病毒滴度，減少感染心肌細胞乳酸脫氫酶、天冬氨酸氨基轉移酶的釋放，顯著抑制柯薩奇B病1由此提示清心飲中含抗病毒、保護心肌細胞的有效成分，口服有效。針對以往附子強心作用的研究均采用體外實驗或靜脈直接給藥文案大全實用文檔2有效成分確能經胃腸吸收入血，且不會經吸收立即被代謝失活。七.對神經系統(tǒng)的實驗研究劉國卿等采用具有典型神經內分泌細胞特征的PC12細胞株為實驗模型，用血清藥理方法觀察了口飼“李氏5號方”的含藥血清對神經元的影響。結果發(fā)現(xiàn)含藥血清作用24小時、48小時、72小時時均能劑量依賴性地促進PC12細胞的增殖，對NaCN加缺糖致PC12細關系。離體的神經細胞谷氨酸損傷模型，運用血清方法，進一步觀察了含“李氏5表明“李氏5號方”水煎劑（含揮發(fā)油成分）雖能抑制原代培養(yǎng)皮層神經細胞損傷，但作用不如其含藥血清強，同時，含藥血清抑制神經損傷的藥理作用呈劑量依賴性，提示“李氏5號方”可拮抗興奮性氨基酸神經毒性。八.對肝細胞的實驗研究文案大全實用文檔作用。培養(yǎng)上清液中ALT、AST活性，抑制正常及損傷肝細胞的膠原生成形成的重要細胞抗纖維化作用機理之一。王曉玲等采用血清藥理方法進一步研究了扶正化瘀方抗肝纖維細胞的活化、增殖，抑制其膠原、TGFβ的基因表達與蛋白生成。1最顯著，蟲草菌絲的抑制β作用最強。證實了“藥有個性之特1九.對免疫功能調節(jié)的研究曾南等觀察了含蟲草的血清對IL－2活性的影響，發(fā)現(xiàn)[23]1.25g/kg劑量組能增強IL－2活性，但7.5g/kg3.5g/kg劑量組作用不明顯，相反3.5g/kg劑量組卻出現(xiàn)抑制作用，這可能與血清的稀釋度及其內容物有關。陰赪宏等應用血清藥理方法觀察了當歸補血湯對小鼠白細胞的13.2gkg體重灌胃文案大全實用文檔小鼠后6~60min等不同時相的含藥血清對小鼠白細胞均具有活化作用，量效關系表明，當歸補血湯6.60~33.0g飲片／kg體重分別灌胃小鼠后的含藥血清對小鼠白細胞均具有活化作用。十.對泌尿系統(tǒng)的實驗研究血清對體外培養(yǎng)的腎小球系膜細胞（MsC）增殖有明顯的抑制作用，且與血清中的藥物含量成正比例關系，提示溫陽降濁湯抑制MsC增之一。寬了研究領域，提高了中藥（尤其是中藥復方）體外實驗的可信度。在一定程度上揭示了中藥和復方在胃腸內處置過程中活性成分的轉化和改變。文案大全實用文檔中藥含藥血清藥理的方法學研究盡管在上世紀九十年代中期以前，對含藥血清的藥理作用及其價括：1、建立中藥含藥血清體外藥理實驗方法意義的論證。2、含藥血清制備技術的規(guī)范化研究。3、血清藥理方法體外反應體系確定的規(guī)范化技術研究。為采用中藥血清藥理方法開展研究提出初步技術規(guī)范。一.建立中藥含藥血清體外藥理實驗方法意義的論證（一）含藥血清和原藥液體外試驗的比較研究用原藥液和用含藥血清在體外實驗中取得的比較研究發(fā)現(xiàn)，有的顯抑制HSV-1對家兔主動脈SMC的DNANK細胞無激活作用，含藥血清及整體實驗均有激活作用；桂枝湯原2小時采集的含桂枝湯家兔血清則有明顯抑制作用。文案大全實用文檔統(tǒng)的認識和臨床或整體動物實驗的結果。（二）含藥血清和整體給藥藥效相關性研究含藥血清的體外藥理實驗結果與該中藥給予動物所得得整體藥關鍵1）在相應藥效指標上，用含藥血清所得的體23物可以呈現(xiàn)該藥口飼模型動物的相同藥效。（三）含藥血清藥效和臨床療效相關性研究用血府逐瘀丸含藥血清進行體外實驗和用血府逐瘀丸進行臨床結果基本和臨床療效相吻合。二.含藥血清制備技術的規(guī)范化研究（一）采血時間的確定程，，直接影響藥效的呈現(xiàn)。采血時間過早過晚，不僅不能很好的反映藥效，而且也與文案大全實用文檔后可設定4-5作為以后實驗的采血時間。另一方面，許多研究顯示，雖然不同方劑藥效具有各自不同的時效過程，但藥效峰值一般在給藥后05-4h之1-2小時采集的含藥血清均反應出藥效。也可以連續(xù)5個半衰期給藥達到穩(wěn)態(tài)血藥濃度后采血。（二）口飼給藥劑量的確定實驗顯示，以相當于臨床等效劑量的0.8-10口飼給動物0.5-2小時所采集的含藥血清，在體外進行相應實驗，能呈現(xiàn)藥理作用。或者遵照新藥藥效學試驗動物給藥劑量計算方法確定給藥劑量。含藥血清的劑量表述也是一個值得探討的問題，這里涉及血清供量以及體外試驗時含藥血清的終濃度或稀釋倍數(shù)，并以g生藥/kg體重/U表示劑量（如以含桂枝湯的大鼠血清對HSV-1病毒的作用實驗為例：動物口飼給藥量為10g/kg體重，實驗時所用含藥血清的終濃度為1:12稀釋，則含藥血清的劑量為10/12=0.83g生藥/kg體重/U，這里U表示是血清在體外系統(tǒng)中終濃度時的稀釋倍數(shù)。（三）給藥次數(shù)、給藥天數(shù)對藥效的影響藥理學的推廣和應用。研究顯示，同一劑量一次給藥優(yōu)于分次給藥，文案大全實用文檔采集，1-2小時采血，以便獲得藥效作用強的含藥血清。（四）采血部位對含藥血清藥效的影響選擇適當?shù)牟裳课皇菫榱俗畲笙薅取⒆罘奖愕孬@得含藥血清，從一些對比實驗看，分別從動脈、靜脈采血對藥效似無明顯影響。如示。另外，從門靜脈和肝靜脈分別采集含藥血清，比較他們的活性，能否也可給我們就肝臟對該藥物代謝的影響有所啟？這些是含藥血清應用研究上應進一步進行的工作。（五）動物種屬的差異性通過對大鼠、小鼠、兔、犬、豚鼠及正常人血清及含藥血清對不添加量越大。（六）供血的實驗動物數(shù)采集含藥血清所需動物數(shù)應遵循動物實驗的一般原則，如大鼠、文案大全實用文檔小鼠或豚鼠每組動物數(shù)應不少于10只，家兔應不少于8只，以避免清藥效測定，亦可將同組個體血清混合后作為一個樣本使用。（七）含藥血清的保存含藥血清經低溫保存后是否對藥效產生影響與所觀察的藥效指標和藥物本身有效成分的穩(wěn)定性有關。如抗病毒實驗，血清可在℃保存5-20℃保存二月，藥效不受影響；在一些生化反應體系中，含藥血清-20℃保存二月后，有的對藥效無明顯影響，有的對藥效能產生明顯影響，因此以采用新鮮血清為好。文案大全實用文檔含藥血清藥理方法體外反應體系確定的規(guī)范化技術（一）嚴格執(zhí)行正常血清對照正常血清對照組。正常血清常血清比較而確定。（二）反應體系中含藥血清添加量（即反應體系中含藥血清的終濃度）含藥血清在體外實驗系統(tǒng)中，一般常和反應液或培養(yǎng)液共同培育。由于種系不同，正常血清對反應對象（細胞、酶等）會產生程度不同的影響，就需要有合適的血清添加量。一般而言，在一定范圍內反應體系中含藥血清終濃度一般在20%或以下較宜。增加口飼給藥劑量后，含藥血清的添加量應相應減少。（三）血清凍干技術的應用體系中血清添加量。文案大全實用文檔（四）含藥血清的滅活是否產生干擾，血清經56℃30min滅活后是否可排除這些干擾，而且在排除干擾的同時對藥效有否影響，值得關注。研究結果提示，血清滅活后對藥效的影響與選擇的反應體系及正常血清是否含有相關些作用下降約50%；含藥血清中既有上述的生物活性物質又有藥物的用強度下降，但可體現(xiàn)藥物本身作用，因此，在體外進行抗病毒實驗時應采用滅活血清。（五）預處理方法對血清活性的影響Ach正常血清經乙醇、丙酮、甲殼素處理去蛋白后，顯著降低其作用，而56℃30分鐘使蛋白變性則無明顯影響。也有研究發(fā)現(xiàn)，含小青龍湯血清經丙酮處理后對支氣管平滑肌抗His和Ach的抑制無明顯影響。血清去蛋白后，對特定的生理生化、效能指標產生不同的影響，其重文案大全實用文檔一、不清楚的中藥復方藥效成分的蛋白結合率。文案大全實用文檔含藥血清藥理的應用研究一.含藥血清藥物動力學研究測某一種成分的血藥濃度經時變化，不能代表全方的藥代動力學參有很大影響，是否有可能通過對該方某一藥效的效應半衰期的估測，得研究的內容。此外，目前在中藥復方藥物動力學研究中，還常采用以整體動物藥理效應為測試指標的藥理效應法和以整體動物毒理效物動力學有以下特點：1.理效應試驗觀察，較整體動物易于控制。2.同一批試驗，分離出的含動學參數(shù)。3.文案大全實用文檔35種有效劑量(其中一種相當于臨床等效劑量平行地進行時效測定與比較。二.中藥血清藥化學研究“中藥血清藥化學”和“中藥血清藥理學”是80年代末由日本出以構建血清指紋圖方法來開展研究，但相關具體研究報道較少。入。物川芎中一個明確的單體成分阿魏酸為指標，以此為條件建立相應的血清指紋圖。試驗結果顯示，川芎各提取物含藥血清阿魏酸指紋藥化學研究較為理想。推論方法和思路:含藥血清的藥理效應強度時相過程與其血清指紋關；含藥血清的藥理效應強度與其血清指紋圖中該成分指紋峰的大小、有無不相一致，說明該成分與該藥理作用不相關或不是該藥理作用的主要成分。中藥有很多成分不明確，或已知成分含量極少，又文案大全實用文檔應怎樣開展中藥血清藥化學研究，或與中藥血清藥理作用協(xié)同研究，這是一個值得探索的問題。三.中藥復方組合化學研究中藥復方組合化學研究(CombinatorialChemicalResearchofTraditionalChinesePrescriptions，CCRTCP)，是以中藥復方為天然組合化學庫(N