天然藥化常見的鑒別反應(yīng)

天然藥化常見的鑒別反應(yīng)（部分）一、顏色反應(yīng)的對比（一）、三萜類的顏色反應(yīng)1.Liebermann-Burchard反應(yīng)將樣品溶于乙酸酐中，加濃硫酸-乙酸酐（1：20）數(shù)滴，可產(chǎn)生黃→紅→紫→藍(lán)等顏色變化，最后褪色。2.Kahldenberg反應(yīng)將樣品的氯仿或醇溶液點于濾紙上，噴20%五氯化銻的氯仿溶液（或三氯化銻飽和的氯仿溶液），干燥后60℃～70℃加熱，顯藍(lán)色、灰藍(lán)色、灰紫色等多種顏色。3.Rosen-Heimer反應(yīng)將樣品溶液滴在濾紙上，噴25%三氯乙酸乙醇溶液，加熱至100℃，呈紅色，逐漸變?yōu)樽仙?.Salkowski反應(yīng)將樣品溶于氯仿，加入濃硫酸后，在硫酸層呈現(xiàn)紅色或藍(lán)色，氯仿層有綠色熒光出現(xiàn)。5.Tschugaeff反應(yīng)將樣品溶于冰乙酸中，加乙酰氯數(shù)滴及氯化鋅結(jié)晶數(shù)粒，稍加熱，則呈現(xiàn)淡紅色或紫紅色。（二）、甾體類化合物的顏色反應(yīng)1.Liebermann-Burchard反應(yīng)將樣品溶于氯仿中，加濃硫酸-乙酸酐（1：20）數(shù)滴，可產(chǎn)生紅→紫→藍(lán)→綠→污綠等顏色變化，最后褪色。也可將樣品溶于冰乙酸，加試劑產(chǎn)生同樣的反應(yīng)。2.Kahldenberg反應(yīng)將樣品的氯仿或醇溶液點于濾紙上，噴20%五氯化銻的氯仿溶液，干燥后60℃～70℃加熱，樣品斑點顯藍(lán)色、灰藍(lán)色、灰紫色等多種顏色。3.Rosen-Heimer反應(yīng)將樣品溶液滴在濾紙上，噴25%三氯乙酸乙醇溶液，加熱至60℃，呈紅色，逐漸變?yōu)樽仙?.Salkowski反應(yīng)將樣品溶于氯仿，加入濃硫酸后，在硫酸層呈現(xiàn)紅色或藍(lán)色，氯仿層有綠色熒光出現(xiàn)。5.Tschugaeff反應(yīng)將樣品溶于冰乙酸中，加乙酰氯數(shù)滴及氯化鋅結(jié)晶數(shù)粒，稍加熱，則呈現(xiàn)淡紅色或紫紅色。二、強心苷的顏色反應(yīng)1.C17位上不飽和內(nèi)酯環(huán)的顏色反應(yīng)甲型強心苷在堿性醇溶液中，五元不飽和內(nèi)酯環(huán)上的雙鍵移位產(chǎn)生C22活性亞甲基，能與活性亞甲基試劑作用而顯色。乙型強心苷在堿性醇溶液中，不能產(chǎn)生活性亞甲基，無此類反應(yīng)。所以，利用此類反應(yīng)可區(qū)別甲、乙型強心苷。（1）Legal反應(yīng)：又稱亞硝酰鐵氰化鈉試劑反應(yīng)。取樣品1～2mg，溶于吡啶2～3滴中，加3%亞硝酰鐵氰化鈉溶液和2mol/L氫氧化鈉溶液各1滴，反應(yīng)液呈深紅色并漸漸退去。（2）Raymond反應(yīng)：陽性反應(yīng)是反應(yīng)液呈紫紅色。（3）Kedd反應(yīng)：又稱3,5-二硝基苯甲酸試劑反應(yīng)。陽性反應(yīng)是反應(yīng)液呈紅色或紫紅色。（4）Baljet反應(yīng)：又稱堿性苦味酸試劑反應(yīng)。陽性反應(yīng)是反應(yīng)液呈現(xiàn)橙色或橙紅色。2.α-去氧糖顏色反應(yīng)（1）Keller-Kiliani（K-K）反應(yīng)：此反應(yīng)在冰乙酸溶液中進(jìn)行，如有α-去氧糖，乙酸層顯藍(lán)色。界面的顏色隨苷元羥基、雙鍵的位置和數(shù)目不同而異，可顯紅色、綠色、黃色等。注意此反應(yīng)只對游離的α-去氧糖或α-去氧糖與苷元連接的苷顯色，對α-去氧糖和葡萄糖或其他羥基糖連接的二糖、三糖及乙?；摩?去氧糖不顯色。因它們在此條件下不能水解出α-去氧糖。此反應(yīng)陽性可肯定α-去氧糖的存在，但對此反應(yīng)不顯色的有時未必具有完全的否定意義。（2）呫噸氫醇反應(yīng)：反應(yīng)試劑為呫噸氫醇試劑，此反應(yīng)極為靈敏，只要分子中有α-去氧糖即顯紅色，且分子中的α-去氧糖可定量地發(fā)生反應(yīng)，故還可用于定量分析。（3）對-二甲氨基苯甲醛反應(yīng)：分子中若有α-去氧糖可顯灰紅色斑點。（4）過碘酸-對硝基苯胺反應(yīng)：此反應(yīng)可在濾紙或薄層板上進(jìn)行，反應(yīng)過程是先噴過碘酸鈉水溶液，再噴對硝基苯胺試液，則迅速在灰黃色背底上出現(xiàn)深黃色斑點，置紫外燈下觀察則為棕色背底上出現(xiàn)黃色熒光斑點。再噴以5%氫氧化鈉甲醇溶液，則斑點轉(zhuǎn)為綠色。三、醌類化合物的顏色反應(yīng)醌類的顏色反應(yīng)主要基于其氧化還原性質(zhì)以及分子中的酚羥基性質(zhì)。（1）Feigl反應(yīng)：所有醌類衍生物在堿性條件下經(jīng)加熱能迅速與醛類及鄰二硝基苯反應(yīng)生成紫色化合物。（2）無色亞甲藍(lán)顯色試驗：無色亞甲藍(lán)溶液為苯醌類及萘醌類的專用顯色劑。藍(lán)色斑點，與蒽醌類化合物相區(qū)別。（3）Borntrger反應(yīng)：羥基醌類在堿性溶液中發(fā)生顏色改變，會使顏色加深。多呈橙、紅、紫紅及藍(lán)色。羥基蒽醌以及具有游離酚羥基的蒽醌苷均可呈色，但蒽酚、蒽酮、二蒽酮類化合物則需氧化形成羥基蒽醌類化合物后才能呈色也就是不顯色。（4）Kesting—Craven反應(yīng)（活性亞甲基）：苯醌及萘醌類化合物當(dāng)其醌環(huán)上有未被取代的位置時，可在堿性條件下與一些含有活性次甲基試劑（如乙酰乙酸酯、丙二酸酯、丙二腈等）的醇溶液反應(yīng)，生成藍(lán)綠色或藍(lán)紫色。萘醌的苯環(huán)上如有羥基取代，此反應(yīng)即減慢反應(yīng)速度或不反應(yīng)。蒽醌類化合物因醌環(huán)兩側(cè)有苯環(huán)，不能發(fā)生該反應(yīng)，故可加以區(qū)別。（5）與金屬離子的反應(yīng)：在蒽醌類化合物中，如果有α-酚羥基或鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)時，則可與Pb2+、Mg2+等金屬離子形成絡(luò)合物。反應(yīng)靈敏，生成的顏色因分子中羥基的位置不同而不同，有助于識別羥基位置顯的顏色不同：環(huán)上有1個α-羥基——橙色鄰二酚羥基——藍(lán)紫色對二酚羥基——顯紫到紫紅色各有1個α-羥基或還有間位羥基——橙紅色至紅色（6）對亞硝基二甲苯胺反應(yīng)：9位或10位未取代的羥基蒽酮類化合物，尤其是1,8-二羥基衍生物，其羰基對位的亞甲基上的氫很活潑，可與0.1%對亞硝基-二甲苯胺吡啶溶液反應(yīng)縮合而產(chǎn)生各種顏色。本反應(yīng)可作為蒽酮類化合物的定性鑒別反應(yīng)，不受蒽醌類、黃酮類、香豆素類、糖類及酚類化合物的干擾。四、香豆素的顏色反應(yīng)（1）異羥肟酸鐵反應(yīng)香豆素類成分具有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，在堿性條件下開環(huán)，與鹽酸羥胺縮合生成異羥肟酸，在酸性條件下再與Fe3+絡(luò)合而顯紅色。此反應(yīng)為香豆素的檢識或結(jié)構(gòu)鑒定。（2）酚羥基反應(yīng)香豆素類成分常具有酚羥基取代，可與三氯化鐵溶液反應(yīng)產(chǎn)生綠色至墨綠色沉淀。常利用與三氯化鐵溶液的反應(yīng)判斷酚羥基的有無。四、黃酮類顏色反應(yīng)①HCl-Mg：多數(shù)黃酮、黃酮醇、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物顯紅～紫紅色；②四氫硼鈉還原反應(yīng)：二氫黃酮類化合物專屬性較高；③鋯鹽-枸櫞酸反應(yīng)：3-OH，5-OH；④氨性氯化鍶反應(yīng)：鄰二酚羥基；⑤五氯化銻：查耳酮。1.還原反應(yīng)②應(yīng)用：對于鑒別黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)類型有一定意義。還可幫助鑒別分子中某些結(jié)構(gòu)特征。4.硼酸顯色反應(yīng)5-羥基黃酮、6′-羥基查耳酮類化合物在無機酸或有機酸存在條件下，可與硼酸反應(yīng)，產(chǎn)生亮黃色。①一般在草酸存在下顯黃色并具有綠色熒光。②在枸櫞酸丙酮存在的條件下，則只顯黃色而無熒光。5.五氯化銻反應(yīng)①方法：樣品的無水四氯化碳溶液，加2%五氯化銻的四氯化碳溶液，若為查耳酮類則生成紅色或紫紅色沉淀，而黃酮、二氫黃酮及黃酮醇類顯黃色至橙色，②應(yīng)用：查耳酮類與其他黃酮類化合物。6.其他顯色反應(yīng)①應(yīng)用：Gibb′s反應(yīng)也可用于鑒別黃酮類化合物酚羥基對位是否被取代。②方法：將樣品溶于吡啶中，酚羥基對位未被取代者在加入Gibb′s試劑后即顯藍(lán)色或藍(lán)綠色。顯色總結(jié)：①HCl-Mg：多數(shù)黃酮、黃酮醇、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物顯紅～紫紅色；②四氫硼鈉還原反應(yīng)：二氫黃酮類化合物專屬性較高；③鋯鹽-枸櫞酸反應(yīng)：3-OH，5-OH；④氨性氯化鍶反應(yīng)：鄰二酚羥基；⑤五氯化銻：查耳酮。膽汁酸類除具有甾體母核的顏色反應(yīng)外，尚具有以下顏色反應(yīng)：（1）Pettenkofer反應(yīng)：取膽汁加蒸餾水及l(fā)0%蔗糖溶液搖勻，沿試管管壁加入濃硫酸，則在兩液分界處出現(xiàn)紫色環(huán)。其原理是蔗糖經(jīng)濃硫酸作用生成羥甲基糠醛，后者可與膽汁酸結(jié)合成紫色物質(zhì)。（2）GregoryPascoe反應(yīng)：取膽汁加45%硫酸及0.3%糠醛，水浴加熱，膽酸存在的溶液顯藍(lán)色。本反應(yīng)可用于膽酸的定量分析。（3）Hammarsten反應(yīng)：取少量樣品，用20%鉻酸溶液（20gCrO3在少量水中，用乙酸加至100m1）溶解，溫?zé)?，膽酸為紫色，鵝去氧膽酸不顯色。Molish反應(yīng)--是糖和苷類的檢識反應(yīng)。樣品+濃硫酸+a萘酚=界面處紫色環(huán)。碳苷和糖醛酸與Molish陰性。Smith降解—檢測糖的種類，連接方式，氧環(huán)大小·特點：反應(yīng)條件溫和、易得到原苷元適用：苷元不穩(wěn)定的苷和碳苷，不適合苷元上有鄰二醇羥基或易被氧化的基團的苷。樣品（含稀醇）+NaIO4=糖開裂成醛+NaBH4=伯醇，再調(diào)pH=2，放置。Smith裂解獲得連一個醛基的苷元異羥肟酸鐵反應(yīng)---鑒定內(nèi)酯環(huán)的存在：堿性條件下，香豆素內(nèi)酯開環(huán)，并與鹽酸羥胺縮合成異羥肟酸，再在酸性條件下與三價鐵離子絡(luò)合成鹽而顯紅色。酚羥基反應(yīng)：具酚羥基取代的香豆素類在水溶液中可與三氯化鐵試劑絡(luò)合而產(chǎn)生不同的顏色。酚羥基的對位未被取代，6-位上沒有取代，內(nèi)酯環(huán)堿化開環(huán)后，可與Gibb’s試劑、Emerson試劑反應(yīng)。Gibb’s反應(yīng)：2,6-二氯(溴）苯醌氯亞胺試劑藍(lán)色。Emerson反應(yīng)：2%的4-氨基安替匹林和8%的鐵氰化鉀試劑紅色。.Feigl反應(yīng)堿性加熱與醛類及鄰二硝基苯紫色化合物。無色亞甲基藍(lán)顯色反應(yīng)—苯醌及萘醌類的專用顯色劑（藍(lán)色斑點）與蒽醌區(qū)別。Borntrāger`s反應(yīng)，羥基醌堿性溶液顏色加深，多呈橙，紅，紫紅色，藍(lán)色。活性次甲基試劑的反應(yīng)（K-C法）苯醌及萘醌類環(huán)上有未被取代的位置氨堿性==藍(lán)綠色或藍(lán)紫色。與金屬離子的反應(yīng)（α-酚羥基、鄰位二酚羥基；Pb2+,Mg2+）。鹽酸-鎂(鋅)粉反應(yīng)黃酮(醇)二氫(醇)紅色至紫紅色異黃酮、查爾酮無色四氫硼鈉(鉀)反應(yīng)---二氫（醇）專屬反應(yīng)（紅色、紫紅色）鋯鹽-枸椽酸顯色反應(yīng)。區(qū)別3，5-OH3-OH+ZrOCl2黃色褪5-OH+ZrOCl2黃色不褪氯化鍶(SrCl2)。具鄰二酚羥基生成綠-棕色、黑色沉淀Sabety反應(yīng)：揮發(fā)油1滴→1ml氯仿＋5%溴的氯仿溶液→產(chǎn)生藍(lán)紫色或綠色與Ehrlich試劑(對-二甲胺基苯甲醛濃硫酸)反應(yīng)產(chǎn)生紫色或紅色濃硫酸-醋酐（L-B反應(yīng)）：三萜-紅甾體-綠三氯化銻反應(yīng)：三萜顯黃色、灰藍(lán)、灰紫斑點，UV下藍(lán)紫