萬年蒿提取物對小鼠肝損傷的保護作用

萬年蒿提取物對小鼠肝損傷的保護作用【摘要】目的探討萬年蒿超臨界萃取物和水提液對小鼠肝臟損傷的保護作用。方法分別以萬年蒿超臨界萃取物和水提液灌胃小鼠,并以CCl4制成小鼠急性肝臟損傷模型，測定小鼠血清中門冬氨酸氨基轉移酶(AST）和丙氨酸氨基轉移酶(ALT）含量，觀察萬年蒿不同提取物對肝臟損傷的保護作用。結果和模型組相比，萬年蒿水提液高劑量組和超臨界萃取物高劑量組能夠明顯降低小鼠的AST，ALT含量(或)。結論萬年蒿提取物具有較好的保肝作用。

【關鍵詞】萬年蒿；四氯化碳；肝損傷；超臨界萃取

Abstract：ObjectiveTostudytheprotectiveeffectsofsupercriticalfluidextraction(SFE)extractsandwaterextractsofArtemisiasacrorumLedeb.onacutehepaticinjuryinmicewereperfusedwithwaterextractsandSFEextractsrespectively.ThemousemodelofacutehepaticinjurywereinducedbyCCl4andtheserumlevelsofALTandASTofthemiceweremeasured.ResultsThehigh-dosegroupsofwaterextractsandofSFEextractsgreatlydecreasedASTandALTlevelsinserumcomparedtomodelgroup().ConclusionTheextractsofArtemisiasacrorumLedeb.haveprotectiveeffectsagainsthepaticinjury.

Keywords：ArtemisiasacrorumLedeb;CCl4;Hepaticinjury;Supercriticalfluidextraction(SFE)

萬年蒿為菊科植物萬年蒿ArtemisiasacrorumLedeb.干燥地上部分，也可為全草。有利濕退黃、涼血止血作用［1～3］。民間常用其治療急慢性肝炎、婦女內(nèi)寒證等。東北某些地區(qū)在治療黃疸等肝炎癥狀時，更愿意選用萬年蒿替代茵陳蒿作為首選藥物。

本文通過測定小鼠血漿中門冬氨酸氨基轉移酶(AST）和丙氨酸氨基轉移酶(ALT）等的含量，研究了萬年蒿的超臨界萃取等四種提取物對CCl4所致小鼠肝損傷的影響，為進一步研究萬年蒿的保肝作用打下了基礎。

1器材

藥材與試劑萬年蒿采集自吉林省延吉市溪洞，由延邊大學藥學院生藥學教研室劉永鎮(zhèn)教授鑒定為ArtemisiasacrorumLedeb.的地上部分；四氯化碳；試劑盒；羧甲基纖維素鈉；吐溫-80等。

儀器沈陽天誠超臨界流體萃取儀；紫外分光光度計；R2060旋轉蒸發(fā)儀；離心機；200μl移液器,1000μl移液器。

動物昆明種小鼠,60只雄性，22～25g，由延邊大學醫(yī)學院動物科提供。

2方法

提取方法

萬年蒿水提法取500g萬年蒿加入適量水中浸泡，1h后，加熱至沸，提取兩次，1h/次，合并濾液，用旋轉蒸發(fā)儀濃縮。參考萬年蒿的成人劑量，通過體表面積轉換，配制成灌胃小鼠的低、高兩個濃度，分別為：g(相當于生藥量)/kg，g(相當于生藥量)/kg。

超臨界萃取法投藥800g萬年蒿于超臨界萃取儀里，分別進行了兩次萃取。第一次沒有提攜劑，第二次以無水乙醇為提攜劑。具體實驗條件及結果如下。

表1萬年蒿超臨界萃取條件

超臨界萃取物的配制取適量無水乙醇作為提攜劑的超臨界萃取物，用少量吐溫-80和配制好的g/ml羧甲基纖維素鈉溶液作為溶劑配制成低、高兩種濃度：，g/kg。

動物實驗

實驗方法從動物科取回小鼠后，放置于藥學院動物室，使其適應環(huán)境數(shù)日。小鼠隨機分成6組，每組10只：第1組：正常組;第2組：急性肝損傷模型組;第3組：萬年蒿的水提液低劑量組;第4組：萬年蒿的水提液高劑量組;第5組：萬年蒿超臨界萃取物低劑量組(g/kg);第6組：萬年蒿超臨界萃取物高劑量組(g/kg)。正常組和模型組灌胃蒸餾水，其余各組分別灌胃上述劑量的相應藥物，連續(xù)4d。第5天上午灌胃一次，過2h正常組腹腔注射相應的生理鹽水，其它各組小鼠腹腔注射%CCl4豆油溶液ml/10g。24h后由小鼠頸動脈取血,離心機3000r/min分離血清,根據(jù)試劑盒方法測定AST，ALT［4，5］。

統(tǒng)計處理動物實驗數(shù)據(jù)以+s表示，組間差異用t檢驗進行顯著性分析。

3結果

動物實驗結果如表2。

表2萬年蒿對四氯化碳所致肝損傷小鼠的影響

與正常組比較,#；與模型組比較,*；，n=10

由表一可知，模型組的ALT，AST數(shù)據(jù)與正常組相比，,說明用四氯化碳所致小鼠肝損傷造模是成功的。4個萬年蒿組的ALT，AST值均低于相應的模型組。其中超臨界萃取物高劑量組、水提液高劑量組的AST值與模型組相比，有統(tǒng)計學上的顯著性意義;水提液高劑量組的ALT值與模型組相比，有顯著性差異。

4討論

萬年蒿具有清熱解毒，利濕，退黃，涼血止血等作用，近年研究發(fā)現(xiàn)其有明顯的的利膽作用［6］。目前，在吉林省延邊地區(qū)仍有萬年蒿膏劑民間出售，用于治療和預防急慢性肝炎，婦女內(nèi)寒證等，在民間有廣泛的應用基礎。但是有關萬年蒿的研究報道并不多，并且多局限于成分分析。為提高療效對其所做的藥理實驗更是少見。因此有必要通過實驗驗證其抗肝損傷活性，并以現(xiàn)代技術加以開發(fā)，分離精制其有效部位，從而大大提高療效。

在應用上，萬年蒿多為水煎煮液，因此相比脂溶性成分，水溶性成分更能體現(xiàn)中藥應用中的寶貴經(jīng)驗。因此，本實驗以兩種濃度的水提液進行了相關的抗肝損傷藥理實驗。

但是，水煎液在體現(xiàn)寶貴經(jīng)驗的同時，有一個弱點，即破壞熱敏性物質及脂溶性成分提取不完全。因此，本實驗采用了超臨界流體萃取，以試圖很好地解決這個問題。

處于高于其臨界溫度和臨界壓力的情況下的超臨界流體，性質介于氣體和液體之間，其密度接近液體，而擴散系數(shù)則接近氣體，因而不僅具有與液體溶劑相當?shù)妮腿∧芰?，而且具有?yōu)良的傳質效果。超臨界流體萃取是以超臨界流體為萃取劑，從中藥材中萃取藥效成分并進行分離的方法。CO2臨界條件適中，而且本身無毒無腐蝕性，故成為超臨界流體萃取法最常用的超臨界流體，通常稱為CO2超臨界流體萃取法。

超臨界流體萃取與傳統(tǒng)方法相比，具有萃取時間短、得率高、有效成分含量高、質量穩(wěn)定、簡便和安全等優(yōu)點。更重要的是由于萃取溫度較低，中藥中易揮發(fā)組分或生理活性物質極少受到損失或破壞，超臨界流體萃取非常適合于分離熱敏性和化學性質不穩(wěn)定性的物質，因而在醫(yī)藥、食品、化工等領域受到廣泛重視。提攜劑能夠增加溶質溶解度對溫度、壓力的敏感程度，可使溶質的選擇性大大提高。因此添加適當極性提攜劑的CO2超臨界流體萃取法能夠創(chuàng)造一般溶劑達不到的萃取條件，可以對極性物質進行萃取，大幅度提高萃取收率［7～11］。本實驗以無水乙醇做提攜劑進行了CO2超臨界流體萃取并用萃取物進行了抗肝損傷藥理實驗。

實驗結果初步證明民間使用水煎液的做法非常合理，水提液低、高劑量組的ALT，AST值均低于肝損傷模型組。另外，水提液高劑量組的AST值與模型組相比，有統(tǒng)計學上的顯著性意義;水提液高劑量組的ALT值與模型組相比，有顯著性差異。日后水煎液如以大孔吸附樹脂等技術加以分離，必能富集抗肝損傷有效成分群，從而大大提高抗肝損傷活性。

超臨界萃取物高劑量組的AST活性與肝損傷模型組相比，有統(tǒng)計學上的顯著性意義。說明如果選擇好劑量，有可能會收到更好的效果。從而能夠補充水提液損失掉的對抗損傷有益的成分群，更好地發(fā)掘萬年蒿的潛力。

萬年蒿作為有悠久、廣泛應用基礎的民間藥物，發(fā)展?jié)摿薮?，發(fā)展前景看好。本實驗初次使用超臨界流體萃取法對萬年蒿進行了萃取并做了相關的抗肝損傷藥理研究，力圖以現(xiàn)代技術分離其有效部位，提高療效，為開發(fā)保肝保健品及抗肝炎新藥提供技術支持和理論基礎。

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