飼料中氟蟲腈的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法

飼料中氟蟲腈的測定液相色譜—串聯(lián)質譜法范圍本標準規(guī)定了飼料中氟蟲腈的測定方法。本標準適用于配合飼料、濃縮飼料、添加劑預混合飼料和植物源飼料原料中氟蟲腈的測定。本標準氟蟲腈的檢出限為0.002mg/kg，定量限為0.005mg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T20195動物飼料試樣的制備原理樣品用乙腈提取，經(jīng)C18固相萃取柱、液液分配凈化后，液相色譜串聯(lián)質譜儀測定，外標法定量。試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑。水：GB/T6682，一級。甲醇：色譜純。乙腈：色譜純。乙酸銨：色譜純。甲酸：色譜純。80%乙腈水溶液：將80mL乙腈與20mL水混合均勻。80%甲醇水溶液：將80mL甲醇與20mL水混合均勻。0.1%甲酸水溶液（含4mmol/L乙酸銨）：稱取0.308g乙酸銨于適量水中，準確加入甲酸1mL，用水定容至1000mL。氟蟲腈標準儲備液（1mg/mL）：稱取氟蟲腈對照品（CAS：120068-37-3，純度不低于98.7%）10mg（準確至0.01mg）于10mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.2）溶解定容。-18℃避光保存，有效期為1年。氟蟲腈標準工作液Ⅰ（100μg/mL）：準確移取氟蟲腈標準儲備液（4.8）1mL于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋定容。2～8℃保存，有效期為1個月。氟蟲腈標準工作液Ⅱ（1μg/mL）：準確移取氟蟲腈標準工作液Ⅰ（4.9）0.1mL于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋定容。2～8℃保存，有效期為1個月。C18固相萃取柱：1000mg/6mL，或性能相當者。微孔濾膜：0.22μm，有機系。儀器設備液相色譜－串聯(lián)質譜儀：配電噴霧離子源（ESI）。電子天平：感量0.0001g和0.01mg。旋渦混合器。離心機：轉速不低于10000r/min。固相萃取裝置。超聲波振蕩器。氮吹儀。樣品按GB/T20195制備樣品，至少200g，粉碎過0.42mm孔徑的分析篩，充分混勻，裝入磨口瓶中避光保存?zhèn)溆谩Ｔ囼灢襟E提取平行做兩份試驗。稱2g（準確至0.01g）樣品于50mL離心管，準確加入25mL乙腈（4.3），振蕩提取20min，4500r/min離心5min，取上層乙腈2.5mL于15mL的離心管，加入0.5mL水，渦旋混勻待用。凈化C18固相萃取柱分別用6mL乙腈和6mL水活化，接收加載液，于50mL離心管中，近自然滴干時，再加入12mL80%乙腈水（4.6），并同時接收于上述離心管中，加入約1.5gNaCl使上述溶液飽和，振蕩，4500r/min離心5min，取上層乙腈層濃縮至干。準確加入4mL80%甲醇水（4.7）溶液定容，過0.22μm濾膜，待測。標準工作曲線的制備準確量取適量標準工作液，用80%甲醇水溶液（4.7）稀釋成濃度分別為0.1、0.2、0.5、1.0、5.0μg/L的標準溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配，供液相色譜-串級質譜儀測定。對于基質效應較大的樣品，采用基質空白溶液配制標準溶液進行定量。儀器測定液相色譜參考條件色譜柱：BEHC18柱，長50mm，內徑2.1mm，粒徑1.7μm，或性能相當者。柱溫：40℃。流速：0.3mL/min。進樣量：1μL。流動相：A為甲醇（4.2）；B為0.1%甲酸水溶液（4.8），梯度洗脫條件見表1。梯度洗脫程序表時間，min流速，mL/minA，%B，%1initial0.3109021.50.395533.50.395543.510.31090質譜參考條件離子化模式及掃描方式：電噴霧負離子掃描（ESI-）。檢測方式：多反應檢測（MRM）。氣簾氣（CurtainGAS）35Psi。碰撞氣（CollisionGAS）8Psi。噴霧電壓（IonSprayVoltage）-2500V。霧化源溫度（Temperature）400℃。霧化氣（IonSourceGAS1）55Psi。輔助加熱氣（IonSourceGAS2）55Psi。定性離子對、定量離子對及電壓、碰撞能量見表2。質譜參數(shù)名稱離子對（m/z）DP（V）CE（V）氟蟲腈定量離子434.9＞329.9-65-24定性離子434.9＞249.9-65-36定性測定在相同試驗條件下，待測物在樣品中的保留時間與標準工作液中的保留時間相對偏差在±2.5%之內，并且色譜圖中定性離子對的相對豐度與濃度接近的標準工作液中相應定性離子對的相對豐度進行比較，若相對偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判斷為樣品中存在對應的待測物。定性確證時相對離子豐度的最大允許誤差相對離子豐度（%）＞50＞20～50＞10～20≤10允許的相對偏差（%）±20±25±30±50定量測定在儀器最佳工作條件下，將標準工作溶液（從低濃度到高濃度）和試樣溶液上機測定，以標準工作液中氟蟲腈定量離子的峰面積為縱坐標，氟蟲腈濃度為橫坐標繪制標準工作曲線，對樣品進行定量。試樣溶液中氟蟲腈的響應值應在標準工作曲線測定的線性范圍內。超出線性范圍的則用80%的甲醇水溶液（4.7）適當稀釋后再進樣分析。在上述色譜-質譜條件下，氟蟲腈標準工作液特征離子的多反應監(jiān)測（MRM）色譜圖參見附錄A。試驗數(shù)據(jù)處理試樣中氟蟲腈的含量以質量分數(shù)ω計，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，多點校準按式（1）計算： （SEQ標準自動公式\*ARABIC1）式中：C——從標準曲線查得的試樣溶液中氟蟲腈的濃度，單位為微克每升（μg/L）；V——上機液定容體積，單位為毫升（mL）；V1——提取液體積，單位為毫升（mL）；V2——分取體積，單位為毫升（mL）；m——試樣的質量，單位為克（g）；n——上機測定的試樣溶液超出線性范圍后，進一步稀釋的倍數(shù)。測XX果用平行測定的算術平均值表示，結果保留3位有效數(shù)字。精