依那普利有關(guān)物質(zhì)及含量測(cè)定

一、 儀器與試藥Aglient1100高效液相色譜系統(tǒng)（G1310A一元泵，G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A柱溫箱,G1314A紫外檢測(cè)器）,ZorbaxXDBC8柱（5八m,416mmX150mm）;馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)1007052200401;依那普利拉和依那普利雙酮、馬來(lái)酸依那普利片（規(guī)格5mg）均由河南省泌陽(yáng)盤(pán)古藥業(yè)有限責(zé)任公司提供；試劑：乙月青，色譜純，其他試劑均為分析純。二、 色譜條件用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙青-磷酸鹽緩沖溶液（0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調(diào)pH為2.2）（25：75）為流動(dòng)相，流速1.5，檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm,柱溫為50°C，進(jìn)樣量:20八l。含量測(cè)定：照高效液相色譜法（中國(guó)藥典1990年版二部附錄34）測(cè)定。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙醇-水-1%磷酸（70:30:1.5）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm，理論塔板數(shù)按依那普利峰計(jì)算應(yīng)不低于700。測(cè)定法取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于馬來(lái)酸依那普利25mg），置25ml量瓶中，加水適量，振搖使馬來(lái)酸依那普利溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20ml，注入液相譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積；另取以五氧化二磷為干燥劑，在50C減壓干燥4小時(shí)的馬來(lái)酸依那普利適量，制成每ml中含1mg的溶液，同法測(cè)定，計(jì)算，即得。含量測(cè)定：照高效液相色譜法（附錄VD）測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以己青-磷酸鹽緩沖溶液（0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調(diào)pH為2.2）（25:75）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為215nmn，柱溫為50C，取馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品與依那普利拉對(duì)照品適量，加水溶解分別制成每1ml中含0.1mg的溶液。另取依那普利雙酮對(duì)照品適量，加流動(dòng)相超聲處理使溶解，制成每1ml中含0.1mg的溶液。取上述三種溶液用水稀釋成每1ml含馬來(lái)酸依那普利、依那普利拉、依那普利雙酮各為0.02mg的混合溶液，取20gl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數(shù)按依那普利峰計(jì)算不低于300，拖尾因子應(yīng)不大于2.0。馬來(lái)酸峰與依那普利拉峰的分離度應(yīng)符合要求，依那普利拉、依那普利與依那普利雙附各峰的分離度應(yīng)大于4.0測(cè)定法取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于馬來(lái)酸依那普利20mg），胃10Oml量瓶中，加水適量，振搖，使馬來(lái)酸依那普利溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20gl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品適量，精密稱定，加水溶解并定量制成每1ml中約含0.2mg的溶液，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。檢查：含量均勻度照高效液相層析法（中國(guó)藥典1985年版二部附錄29頁(yè)）測(cè)定。儀器及性能要求用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填科；乙醇-水-1%磷酸（50：：1.5）為流動(dòng)相，流速1ml/min；柱溫為50C；檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm。塔板數(shù)按馬來(lái)酸依斯普利峰計(jì)算應(yīng)不得低于700。供試品溶液的制備與測(cè)定取1片，置10ml量瓶?jī)?nèi)，加水1ml振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液6pl注入滾相層析儀，記錄層析譜，量取峰面積，另取馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品，同法測(cè)定，計(jì)算，即得。除合量差就于±15%的不得多于1片并不得超過(guò)土±20%外，應(yīng)符合規(guī)定。（中國(guó)藥典1985年版二部附錄45頁(yè)）。照高效液相色譜法（中國(guó)藥典1995年版二部附錄VD）測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用辛基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀136mg，加水800ml溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.0，用水稀釋至1000ml，搖勻，即得）一乙腈（1:1）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm，理論板數(shù)按依那普利峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。測(cè)定法取本品10粒，精密稱定，傾出內(nèi)容物，囊殼用小毛刷刷凈后，精密稱定，內(nèi)容物混勻，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于馬來(lái)酸依那普利10mg），置50ml量瓶中，加上述磷酸鹽緩沖液適量，充分振搖使馬來(lái)酸依那普利溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20pl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取經(jīng)50°C減壓干燥4小時(shí)的馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品適量，精密稱定，加上述磷酸鹽緩沖液制成每1ml中含0.2mg的溶液，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。（膠囊）檢查：含量均勻度照高效液相色譜法（中國(guó)藥典1995年版二部附錄VD）測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙醇一水一1%磷酸溶液（70：30：1.5）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm。理論板數(shù)按依那普利峰計(jì)算應(yīng)不低于700。測(cè)定法取本品1粒，將內(nèi)容物傾入10ml量瓶中，囊殼用少量甲醇分次洗凈。洗液并入量瓶中，充分振搖使馬來(lái)酸依那普利溶解，用皿稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20pl，注入液相色譜儀，量取峰面積；另精密稱取經(jīng)50C減壓干燥4小時(shí)的馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品，用甲醇溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.5mg的溶液，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。應(yīng)符合規(guī)定（中國(guó)藥典1995年版二部附錄XE）。溶出度取本品，照溶出度測(cè)定法（中國(guó)藥典1995年版二部附出錄XC第二法），以水250ml為溶劑，轉(zhuǎn)諫為每分鐘75轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分鐘時(shí)，取溶液適量，濾過(guò)，照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法，精密量取續(xù)濾50pl注入液相色譜儀，量取峰面積；另精密稱職經(jīng)50C減壓干燥4小時(shí)的馬來(lái)酸依那普利對(duì)照適量，用水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含20pg的溶液。同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出每粒的溶出量。限度為標(biāo)示量的75%。應(yīng)符合規(guī)定。其他應(yīng)符合膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定（中國(guó)藥典1995年版二部附錄IE）。含量測(cè)定：根據(jù)含量均勻度項(xiàng)下測(cè)得的結(jié)果，計(jì)算出平均含量，即得。三、方法與結(jié)果1系統(tǒng)適用性試驗(yàn)取馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品與依那普利拉適量加水溶解并制成每1ml中含0.1mg的溶液，另取依那普利雙酮適量，加流動(dòng)相超聲處理使溶解，制成每1ml中含0.1mg的溶液，取上述三種溶液用水稀釋成每1ml中含馬來(lái)酸依那普利、依那普利拉、依那普利雙酮各為0.02mg的混合溶液，進(jìn)樣。理論板數(shù)按依那普利峰計(jì)算不低于300，拖尾因子應(yīng)不大于2.0。馬來(lái)酸峰與依那普利拉峰的分離度應(yīng)符合要求，依那普利拉、依那普利與依那普利雙附各峰

的分離度應(yīng)大于4.02樣品測(cè)定取本品細(xì)粉適量，加流動(dòng)相使馬來(lái)酸依那普利溶解并制成每1ml中含2mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量,用流動(dòng)相稀釋制成每1ml中含0.1mg的溶液，作為對(duì)照溶液;取對(duì)照溶液20八l注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的15%，再精密量取供試液20八l注入液相色譜儀，記錄譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍。測(cè)定法取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于馬來(lái)酸依那普利20mg)，胃10Oml量瓶中，加水適量，振搖，使馬來(lái)酸依那普利溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20印l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品適量，精密稱定，加水溶解并定量制成每1ml中約含0.2mg的溶液，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。分別取馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品和供試品細(xì)粉適量，精密稱定，分別加溶劑制成0.2mg/ml的馬來(lái)酸依那普利溶液。取供試品溶液，濾過(guò)。分別取續(xù)濾液和對(duì)照品溶液進(jìn)樣分析圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中馬來(lái)酸依那普利的含量。測(cè)定供試品3批，結(jié)果馬來(lái)酸依那普利的含量分別為標(biāo)示量98.5%99.3%和98.8%。采用USP25方法測(cè)得結(jié)果相應(yīng)地分別為98.6%、99.5%和98.8%。兩種方法的測(cè)定結(jié)果一致。四、 線性范圍精密稱取馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品20.44mg，于50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液；分別精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液3mL(60%)、4mL(80%)、5mL(100%)、6mL(120%)、7mL(140%)于10mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得，取上述溶液各20?l注入液相色譜儀，記錄色譜圖，得線性回歸方程為A=17356.021*C-97495.700r=0.9997(n=9)。結(jié)果表明：馬來(lái)酸依那普利在122.64pg/mL?286.16pg/mL濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。以信噪比S/N=10計(jì)算，本法對(duì)馬來(lái)酸依那普利的檢測(cè)限為 ，以信噪比S/N=3計(jì)算，檢測(cè)限為 。五、 進(jìn)樣精密度取標(biāo)準(zhǔn)曲線試驗(yàn)下濃度為(204.40|Jg/mL)的溶液20pL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖峰面積RSD=0.44%(W2.0%)，說(shuō)明進(jìn)樣精密度良好。六、 回收率取馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品適量，分別按處方比例的80%、100%、120%精密稱定，置100ml量瓶中，再加入同比例的輔料適量，每個(gè)濃度各三份，共九份，加水適量，振搖使馬來(lái)酸依那普利溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取標(biāo)準(zhǔn)曲線下中間濃度的溶液為(204.40pg/ml)作為對(duì)照品溶液，精密量取上述溶液20pl注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率，回收率=99.07% RSD%=1.02%(n=9)。結(jié)果表明：該方法的加樣回收率符合要求。采取標(biāo)準(zhǔn)加人法測(cè)定方法的回收率。分別精密稱取同一份已知含量的供試品細(xì)粉6份，分置50ml量瓶中，分別精密加人馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品儲(chǔ)備液5、7、9ml，照樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法操作。得方法的回收率為(99.8士0.1)%，n=6七、 酸破壞試驗(yàn)、堿破壞試驗(yàn)、氧化破壞試驗(yàn)取樣品三份(0.9g/份)，各置25mL量瓶中，用流動(dòng)相適量溶解后，第一份加0.5moL/L鹽酸溶液5mL，第二份加0.5moL/L氫氧化鈉溶液5mL，第三份加30%過(guò)氧化氫溶液1mL，三份樣品均置水浴加熱30min，放冷，第一份及第二份分別用0.5moL/L氫氧化鈉溶液、0.5moL/L鹽酸溶液調(diào)pH至中性。三份樣品加流動(dòng)相定容至25mL,搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液20pL注入色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的三倍。從色譜圖看，雜峰與主峰能較好地分離。八、溶出度取本品，照溶出度測(cè)定法（中國(guó)藥典2000年版二部附錄XC第一法），以水500ml為溶劑，轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，經(jīng)30分鐘時(shí)取溶液適量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品適量，加水制成每1ml中含20gg（規(guī)格10mg）或10gg（規(guī)格5mg）的溶液，照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法自“分別精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液”起依法測(cè)定，計(jì)算每片的溶出量。限度為標(biāo)示量的75%，應(yīng)符合規(guī)定。溶出度取本品，照溶出度測(cè)定法（中國(guó)藥典1995年版二部附錄XC第一法），以水500ml為溶劑，轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分鐘時(shí)，取溶液濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取經(jīng)50°C堿壓干燥4小時(shí)的馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品適量，精密稱定，用水稀釋成每1ml含馬來(lái)酸依那普利20pg的溶液，作為對(duì)照品溶液，精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各20pl，注入液相色譜儀，按含量測(cè)定項(xiàng)的色譜條件，依法操作，計(jì)算出每粒的溶出量，限度為標(biāo)示量的75%，應(yīng)符合規(guī)定。其它應(yīng)符合膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定（中國(guó)藥典1995年版二部附錄IE）。溶出度取本品，照溶出度測(cè)定法（附錄XC第一法），以水500ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘100轉(zhuǎn)，經(jīng)30分鐘時(shí)取溶液適量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品適量，加水制成每1ml中含20瞄（10mg規(guī)格）或10曲（5mg規(guī)格）的溶液，作為對(duì)照品溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各20叫，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算每片的溶出量。限度為標(biāo)示量的75%，應(yīng)符合規(guī)定。有關(guān)物質(zhì)取本品細(xì)粉適量，加流動(dòng)相使馬來(lái)酸依那普利溶解并制成每1ml中含2mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，用流動(dòng)相稀釋制成每1ml中含0.1mg的溶液，作為對(duì)照溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，取對(duì)照溶液20^1注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)