熒光分光光度計(jì)驗(yàn)收細(xì)則

島津RF-5301PC熒光分光光度計(jì)的驗(yàn)收方案一、熒光分光光度計(jì)的方法原理某些物質(zhì)由于受到光照耀而被激發(fā)之后，會(huì)放射出比照耀波長稍長的光〔熒光，熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度有如下關(guān)系：

FkI(1eLc)0式中：

F—熒光強(qiáng)度；k—儀器常數(shù)；—熒光量子效率I—激發(fā)光強(qiáng)度0—熒光物質(zhì)的摩爾吸取系數(shù)L—熒光物質(zhì)液層的厚度c—熒光物質(zhì)的濃度Fkc二、試劑1、試劑及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：1〕0.05mol/L硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液將1000mL的容量瓶中參加適量的二次蒸餾水，用滴定管取濃硫酸2.7mL，注入容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，并混合均勻后放置備用。2〕500mL1×10-5g/mL的硫酸奎寧標(biāo)準(zhǔn)溶液24h5.00mg的硫酸奎寧標(biāo)500mL0.05mol/L0.05mol/L硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至刻度，搖勻即可。注：用深色玻璃瓶儲(chǔ)存高濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。溶液應(yīng)低溫、避光、密封儲(chǔ)存。稀標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)當(dāng)現(xiàn)配現(xiàn)用。濃溶液有效期為半年。3、設(shè)備及器材三、驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)及驗(yàn)收方法〔僅對于色散型單色器〔光柵一、波長示值誤差及重復(fù)性12.0n1.0n。2、驗(yàn)證方法：氙燈亮線法激發(fā)側(cè)單色器波長示值誤差和重復(fù)性〔或無熒光的白色濾紙條〕1.5n〔350~550nm〕的波長范圍內(nèi)進(jìn)展掃描，在譜圖上找到450.1nm處的光譜峰，并確定其峰值位置。連續(xù)測量三次，依據(jù)式〔1〕和式〔2〕分別計(jì)算波長示值誤差和重復(fù)性。

133 i1

???(1)n—波長測量值〔nm〕i —參考波長測量值〔氙燈亮線參考波長測量值為：450.1nm〕n波長重復(fù)性：

i

133i1

〔nm〕???〔2〕i2〕放射側(cè)單色器波長示值誤差和重復(fù)性〔或無熒光的白色濾紙條〕1.5n〔350~550nm〕的波長范圍內(nèi)進(jìn)展掃描，在譜圖上找到450.1nm處的光譜峰，并確定其峰值位置。連續(xù)測量三次，依據(jù)式〔1〕和式〔2〕分別計(jì)算波長示值誤差和重復(fù)性。二、檢出極限1、標(biāo)準(zhǔn)：用硫酸奎寧標(biāo)準(zhǔn)溶液的檢出極限為5×10-10g/mL。20.05mol/L1×10-9g/mL硫酸奎寧標(biāo)準(zhǔn)溶液，靈敏度至最高檔，狹縫寬度為1.5nm，激發(fā)波長350nm，放射波長為450nm，對空白111次數(shù)據(jù)是由于外界干擾或是操作失誤造成的誤差，應(yīng)當(dāng)將此數(shù)據(jù)刪除。Fi

F Fi1 i0Fi1

—標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度F —空白溶液的熒光強(qiáng)度i0F

111Fn i1

〔n—測量次數(shù)〕檢測限是指二倍于標(biāo)準(zhǔn)偏差讀數(shù)的物質(zhì)的濃度。用符號DL表示；式中：

DL

c2sFni1 ni1 2FFin1s三、測量線性1、標(biāo)準(zhǔn)：儀器測量結(jié)果的線性值0.99。2、驗(yàn)收方法：用0.05mol/L硫酸溶液做空白樣，將靈敏度至于高檔，狹縫寬度為1.5nm，激350nm450nm4中各濃度硫酸奎寧標(biāo)準(zhǔn)溶液。4硫酸奎寧標(biāo)準(zhǔn)溶液(g/L)標(biāo)準(zhǔn)溶液號 1 2 3 41×10-74×10-78×10-71×10-6分別對4中質(zhì)量濃度工作標(biāo)準(zhǔn)溶液與空白溶液連續(xù)交替3強(qiáng)度的平均值。用最小二乘法對4中標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度和熒光強(qiáng)度測量平均值進(jìn)展處理，得到線性相關(guān)系數(shù)，幾位測量線性的檢定結(jié)果。最小二乘法的計(jì)算公式：

YabXbSxxSxyaYbXSS xx

xyS Sxx yyXS Sxx yyX2nS yy

Y2nS xy

XY

XY2n注：cj作為XF作為Y即可進(jìn)展計(jì)算。四)熒光光譜峰值強(qiáng)度的重復(fù)性1、標(biāo)準(zhǔn)：儀器測量熒光光譜峰值強(qiáng)度的重復(fù)性≤1.5%。2、驗(yàn)證方法：用0.05mol/L硫酸溶液做空白樣，將靈敏度至于高檔，狹縫寬度為1.5nm，激350nm450nm1×10-7g/mL的硫酸奎寧標(biāo)準(zhǔn)溶液，見光3min后，對365~500nm重復(fù)掃描三次。光譜強(qiáng)度的重復(fù)性由下式計(jì)算：maxFi

133 i i1 FF—為光譜峰值強(qiáng)度的讀數(shù)。i五〕穩(wěn)定度

13F3 ii1110min中內(nèi)基線漂移≤0.5%10min內(nèi)的漂移≤1.5%。2、驗(yàn)證方法調(diào)整靈敏度為中等強(qiáng)度，關(guān)閉光閘門，記錄10min內(nèi)的漂移；至激發(fā)波長和放射波長為450nm10nm，漫反射板置入樣品室，調(diào)整靈敏度，使90%3min10min中示值的變化。熒光分光光度計(jì)檢定記錄一、外觀與初步檢查：_