免疫酶組織化學技術

免疫酶組織化學技術

第一節(jié)基本原理

抗原＋抗體（特異性）＋酶標記抗體，通過酶與底物作用生成有色反應物，定位組織或細胞內(nèi)抗原的一門技術。免疫酶組化免疫學(抗原抗體反應)

酶細胞化學(底物顯色反應)+特異性敏感性定位性可視性PAP法免疫酶組織化學基本組成：抗原↓抗體↓放大系統(tǒng)↓顯色系統(tǒng)ABC法免疫酶特點：信號定位準確標本可長期保存陽性標記與病變關系方法簡便，易推廣

一、酶及其特點酶選擇標準：

★該酶用細胞化學易于被檢出，能被光鏡或電鏡觀察。

★酶反應產(chǎn)物須穩(wěn)定，不擴散，具有良好定位。第二節(jié)酶和底物

★酶易于純化，獲得純制品。

★酶與免疫球蛋白結合后，不喪失其活性?！锩冈赑H中性液內(nèi)較穩(wěn)定?！锝M織中不應存在與底物作用的內(nèi)源性酶。符合央上述兇條件離：辣根駛過氧渣化物幼酶堿性飯磷酸荷酶葡萄慘糖氧癢化酶（一鬼）辣李根過恨氧化罩物酶（HR孔P）★分子晨量（蘿40者00漿0）撕，不西會遮耽蓋抗馬原的蘿結合篇部位★穩(wěn)定釣，易箏獲得浴較高熟純度漆酶★具有膀較高甲活性今及特撿異性★可溶灣性佳仁，生孫成的壓產(chǎn)物毯不擴磨散★組織內(nèi)中內(nèi)愁源性游酶較信少★可作饑用于煮多種樸底物財，產(chǎn)叉生不架同顏拒色★HR決P穿透衫力強辰，易榜進入?yún)^(qū)細胞趕內(nèi)（二）堿性挽磷酸桑酶（AK卵P）從小樂牛腸惡粘膜植或大攪腸桿惠菌中臟提取●組織憤穿透偽能力降較弱●內(nèi)源仰性AK萬P較高●左旋斬咪唑洲具有后抑制全作用（三仙）葡伙萄糖鍋氧化艱酶（GO拌D）底物款為葡凱萄糖坑，終袋產(chǎn)物公穩(wěn)定●體內(nèi)慚無內(nèi)勸源性GO陵D●分子獨量大防，穿拔透力地較弱二、但底物蠻及其醉特點酶＋底物→酶·底物→酶＋產(chǎn)物尊（顯嫂色）HR避P的底承物：HR板P的底背物為戚低濃剛度的H2O2，供氫講體為啊胺類聽及酚災類化井合物瓜。HR剃P顯色膛反應秩：HR呆P＋H2O2HR悠P＋H2O＋電子客供體雀（氧串化型倦）電子宜供體電子蓋供體答被氧楚化后虜，迅耕速改冠變顏絡色，池通過適聚合骨等反妙應，唐生成弱不溶癢性有棵色顆秧粒，待并就頑地原鼓位沉步淀。HR板P常用腦的電失子供攏體：●3.冷3-襪二氨讀基聯(lián)腥苯胺狂(DA謝B)?！厣癜币?guī)突L巴唑適(AE滋C)也～紅色豈，易粘溶于編有機雹溶劑綠，易摩擴散貫，用織水溶賠性封晨固劑蛛。●4-如氯-倍1-嗚茶酚宗（4CN搜）～藍色介，易晃彌散嘉，不播能久共保存●3.炊3，霜5.汽5-蓄四甲鐮基聯(lián)贊苯胺霉(TM濾B)啦～黃色AK歉P底物舉：AK他P常用縣的底建物為α-萘酚AS君-B火1磷酸僵鹽偶聯(lián)補試劑尖：固蘭BB敵～藍色固紅TR乒～紅色第三迫節(jié)賞酶標梳記抗租體法酶標疑記抗棟體法巖（En零za落ym亦e堤La瓣be什ll伯edan謝ti版bo誕dy切）是將蜜酶通初過共情價鍵栽結合事在抗歷體分窮子上茄，制邪備成白酶標鄭記抗寫體，私通過?？贵w夠去尋亡找相敲應抗職原。一、舞直接閣法原理儲：HR坦P標記年在特兇異性展抗體（第歲一抗著體）哪上，待抗原--訓-抗體●HR剝P復合華物組織抗原第一抗體過氧化物酶直接書法步驟輸：一步省完成特點冶：方法榮簡便穗、省筍時，壟專一性強紐奉，非鬼特異沖染色矮輕，但敏耗感性甚差，檢一種場標記抗體領只能言檢測貍一種淹抗原砌。二、賞間接強法原理卸：HR吹P標記當在第拍二抗趁體上暑，抗原--替-特異守性抗嶼體--罷-第二抗嬸體●HR陸P復合靜物步驟灶：二步蹤蝶法組織世抗原第一植抗原第二伴抗體過氧盲化物燈酶間接價法特點拘：敏感碰性較方直接圓法高扁，一種標帳記抗塞體能長用于帥相應動物得制備吼的多羞種特筍異性抗體勵，檢幼測多壩種抗前原。但較增直接高法費富時，叉非特異染國色稍競重。第四補節(jié)薯酶柄抗昨酶候法●制備號抗酶殖抗體●制備PA染P復合概物酶橋身法組織項抗原第一織抗體第二腳抗體第三闊抗體溝（抗拋酶抗縮慧體）HR么P一、PA丘P法原理涂：抗原--養(yǎng)-特異侮性抗如體--紙-第二抗鋸體（寧橋抗彼體）--術-PA洪P復合申物步驟縣：三步鑒法組織河抗原第一隊抗原第二寫抗體PA宋P復合泉物PA拋P法HR塞P特點管：敏感猴性較鋤高，朋背景且染色經(jīng)較輕但特訊異性浙抗體筍與PA帥P必須逆為同一譯種屬尸動物二、煤雙PA澤P法：原理第：在PA雀P的基貢礎上牛再重屯復錫第譯二抗抬體和PA蘿P復合遞物抗原--劉-特異瘦性抗念體--孩-第二明抗體敏（橋怖抗體植）--確-PA合P--私-第二違抗體--絨-PA漂P復合飾物組織住抗原第一愧抗原第二手抗體PA有P復合啊物雙PA廁P法HR映P雙PA臭P法組織抗原第一抗原第二抗體PAP復合物HRP步驟較：五步完法特點陶：敏感研性較丘高缺點揀：但步此驟多溉，費網(wǎng)時，宅非特異背摸景重三、AP懲AA烈P法原理魔：抗原--膽-特異準抗體--志-第二抗體--駱-AP老AA部P復合光物步驟些：三步狀法AP襯AA減P法特點術：非特戶異背逐景較晚輕，鍋不受晚內(nèi)源性護酶的增干擾煉。但產(chǎn)竄物易址溶于假有機焰溶劑第五好節(jié)銀卵白癥素-爸--逆生物推素Av籠id怒in為一不種鹼塘性糖紗蛋白明，由蠻四個寶相同經(jīng)亞基似組成Bi變ot液in小分悟子維皇生素Av不id團in和Bi霉ot頁in具有注較高顛親和蕩力一癥、AB卸C法Av俯id船inBi脖ot峽in孟C野om丙pl蜓ex原理刃：酶標染記Bi置ot睜in形成論酶素斧化Bi啊ot粘in酶素滔化Bi架ot該in＋Av冬id勸in--紹-AB客C復合矩物抗原--酬-特異?？贵w--遼-Bi忽ot錘in標記第二紙抗--燃-Av膀id租in●Bi塊ot種in●HR選P組織虹抗原第一盈抗體第二跟抗體HR傳P生物霉素卵白去素AB廉C法步驟笨：三步藝法特點珍：敏感夏性較詳高，菌特異丟性強汗，應用死范圍糾廣●某些反臟器怖存在忘內(nèi)源基性生域物素干擾●Av括id疼in與核宋酸及酒細胞品膜中瓦磷脂有非苗特異凍反應SA應BC法St蓄re證pt蔬av蹈id勤inbi壤ot刊inPe飼ro狡xi趁da蓮seCo拖mp排le尋xSA兇BC法已輪代替AB女C法二、LS低AB法La猴be文ll自ed連S襖tr享ep制ta膠vi劉di采nBi棟ot企in臭M陶et津ho維d原理田：●Bi踢ot離in標記侍第二敵抗體LS爸AB法●HR雕P標記Av孩id呼in抗原--裝-特異墻性抗奏體--播-Bi卵ot啞in標記額第二廢抗體--征-Av誰id鞋in●HR剝P復合嫁物步驟號：三步慎法特點照：敏感均性高穿，特將異性騎強，方法旺簡便第六輝節(jié)片多聚紋合物黨酶法HR克P-省--多聚狹合物線--偵-抗注體一、Ep趕os法En落ha拉nc縮慧ed恩p宋ol敏ym鮮er燙o嶼ne慶-s低te釀p參st識ai屠ni庸ng多聚合豪物酶宅法組織旬抗原一抗HR梨P多聚骨架EP鈔OS方法原理朗：采用狠一種洪具有綿惰性乒的多誼聚化合蠅物作梅為骨搭架，暖將特舊異性抗首體和HR輪P，同時廟標記在多睛聚合解物分蝕子上戀，形礎成HR敬P--動-多聚甜合物--勝-特異眾性抗體嘴。步驟蘇：一步柜法特點暢：快速叼，簡堵便，河特異庫性強將，敏感冬性高但商淹品化鳳種類破不全海，價格遮昂貴二、En路Vi慰si萍on法En叮ha吸nc帆edLa終be蘆ll看edPo逗ly宰me容r搬Sy它st兄em原理襪：HR尼P--骨-多聚趴合物--揉-第二抗體組織鑒抗原一抗二抗酶多聚骨架第一虧步第二佛步En燦Vi零si涼onTM方法特點禮：敏感匆性高挺：（1mo金le復合波物中泊含7托0mo牲le墾H駝RP和1煤0mo朝le第二災抗體躺）特異厭性強啦：復合宇物內(nèi)僚無內(nèi)挎源性Av野id周in和Bi嘗ot軋in的干期擾。第七膏節(jié)獸基本循操作報步驟1.抗原輩修復2.內(nèi)源蠅性過百氧化球物抑化制3.正常酸血清概封閉4.第一碑抗體5.第二找抗體6.酶標皆記體7.DA含B-攏H2O2顯色第八呈節(jié)抗原厲定位長及非至特異廣染色組織圍細胞＊固定恰問題＊脫蠟緊