家兔試驗性肺水腫課件

相關(guān)理論知識

水腫概念過多的液體積聚于組織間隙或體腔。水腫機制1.血管內(nèi)外液體交換失衡（組織液生成增多或淋巴回流受阻）2.體內(nèi)外液體交換失衡（攝入大于排出，鈉、水潴留）

血管內(nèi)外液體交換示意圖

平均有效濾過壓=有效流體靜壓-有效膠體滲透壓(平均毛細(xì)血管流體靜壓-組織間靜水壓)-(血漿膠體滲透壓-組織間膠滲壓)小動脈小靜脈血漿膠體滲透壓25mmHg組織間靜水壓-10mmHg組織間膠滲壓10mmHg淋巴管Pcap20mmHg組織液生成過多1.毛細(xì)血管流體靜壓升高2.毛細(xì)血管膠體滲透壓降低3.血管壁通透性增高4.淋巴回流受阻實驗?zāi)康?.掌握肺水腫動物模型復(fù)制方法。2.觀察肺水腫時呼吸、心率、中心靜脈壓的變化及典型體征。3.通過實驗加深對肺水腫發(fā)生機制的理解。實驗原理

實驗中家兔大量快速輸液，可使血容量明顯增加，血漿膠體滲透壓下降，有利于水腫的發(fā)生。在此基礎(chǔ)上，輸注腎上腺素，可引起外周血管廣泛收縮，導(dǎo)致血液由體循環(huán)急速轉(zhuǎn)移到肺循環(huán)，加之毛細(xì)血管通透性增高，未能為左心所代償，結(jié)果使左心房壓力和肺毛細(xì)血管流體靜壓突然升高，液體進(jìn)入肺泡及間質(zhì)增多，影響肺呼吸功能，而出現(xiàn)肺水腫。實驗對象

家兔器械與藥品常規(guī)手術(shù)器械，氣管插管，嬰兒秤，聽診器，天平，兔固定臺。20ml注射器，輸液裝置，PowerLab信號采集處理系統(tǒng)，壓力換能器，濾紙，燒杯，絲線，粗棉線。20%烏拉坦，注射用腎上腺素。步驟與方法

實驗分組：PE組家兔4只，Sham組2只。稱重后經(jīng)耳緣靜脈注入20%烏拉坦（5ml/kg.bw）進(jìn)行全身麻醉1.稱重、麻醉與固定：步驟與方法2.手術(shù)（備皮，在頸部正中做長6cm的縱切口。）步驟與方法2.手術(shù)（鈍性分離氣管和一側(cè)的頸淺靜脈并分別插管。）步驟與方法3.觀察呼吸、心率、中心靜脈壓的變化，聽診呼吸音。步驟與方法4.

輸入生理鹽水100ml/kg.bw，速度150~180滴/分。

輸液瓶中加入腎上腺素以0.5mg/kg，繼續(xù)滴注。

密切觀察各指標(biāo)變化。（有無明顯呼吸困難，濕羅音，以及粉紅色泡沫痰溢出）步驟與方法5.當(dāng)出現(xiàn)肺水腫典型表現(xiàn)時，用止血鉗夾閉氣管，將肺取出，觀察肺大體變化并用濾紙吸干肺表面水分后，準(zhǔn)確稱取肺重量，計算肺系數(shù)。

肺系數(shù)=肺重量（g）÷體重（kg）。正常肺系數(shù)為4~5。取右肺上葉放入盛滿4%多聚甲醛液的EP管中，保存于4℃冰箱，用于組織形態(tài)學(xué)觀察和免疫組織化學(xué)染色分析。實驗拓展抽取頸總動脈全血標(biāo)本5ml置于一次性使用真空采血管中，低速離心（3000rpm，10min）后，取血漿放入-80℃冰箱保存留作檢測。取右肺下葉用于肺干濕比測定。左肺用于制備肺泡灌洗。標(biāo)本留?。▽嶒灲M與對照組分別留取）實驗拓展常規(guī)方法，進(jìn)行乙醇梯度脫水、透明、浸蠟、包埋等程序制作組織蠟塊；連續(xù)切片（5μm），在攤片機48℃水中展片和撈片，然后在68℃恒溫烤箱中烘烤4h；然后按我室常規(guī)步驟進(jìn)行HE染色。1.肺組織形態(tài)學(xué)肺組織HE染色（×100）Sham組PE組1PE組2實驗拓展準(zhǔn)確稱取固定位置肺組織的濕重，并記錄；置烤箱80°C連續(xù)烘烤72h后，再用稱濕重的同一電子太平稱取干重，計算濕重/干重的重量比（W/D）。2.肺組織干濕比PE組肺組織濕干重比顯著高于Sham組實驗拓展制備支氣管肺泡灌洗液：使用10ml無菌注射器抽取6ml生理鹽水，針尖插入左肺主干氣管并結(jié)扎，將生理鹽水緩慢注入右肺內(nèi)，再倒置，留取支氣管肺泡灌洗液（BLAF），放入標(biāo)識好的EP管中在恒溫高速離心機中離心（4°C，3000轉(zhuǎn)速，5min）后-80°C冰箱保存。3.肺通透性指數(shù)應(yīng)用全自動生化分析儀檢測血漿總蛋白濃度。計算肺通透性指數(shù)：BLAF總蛋白濃度/血漿總蛋白濃度。應(yīng)用BCA方法檢測總蛋白濃度。PE組家兔肺通透性指數(shù)顯著高于Sham組。注意事項1.不能使用實驗前有肺水腫指征（羅音、喘息、氣促）的動物，否則會影響實驗結(jié)果。2.控制好輸液速度和輸液量，過慢時實驗組和對照組均不發(fā)生肺水腫，而過快時對照組也會發(fā)生肺水腫。3.如一次給腎上腺素肺水腫指征不明顯需重新給藥時，兩次間隔宜在10~15分鐘，不易過頻。4.取肺時要小心，防止肺組織破裂和水腫液流出，否則影響肺系數(shù)的準(zhǔn)確性。討論1.本實驗中為什么要大量快速輸液？2.輸入腎上腺素導(dǎo)致肺水腫的機制是什么？3.實驗中為什么會出現(xiàn)粉紅色泡沫痰？4.臨床上可以選用血管擴張劑，利尿劑，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI）