輸血相容性檢測(cè)課件

關(guān)于輸血相容性檢測(cè)第1頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三紅細(xì)胞抗原抗體檢測(cè)技術(shù)鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)抗人球蛋白試驗(yàn)酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)?zāi)郯吩囼?yàn)微柱凝膠免疫試驗(yàn)第2頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)鹽水介質(zhì)中紅細(xì)胞上的抗原決定簇與相應(yīng)抗體分子上的抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見的凝集。用于IgM抗體的檢出、鑒定、鹽水配血試驗(yàn)以及血型的鑒定。當(dāng)特異性的IgG類抗A、抗B的濃度足夠大時(shí)，在鹽水介質(zhì)里也能與相應(yīng)的紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)，與紅細(xì)胞表面抗原位點(diǎn)數(shù)目和抗原決定簇位置有關(guān)。第3頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結(jié)果 試管法-適用于不同溫度、便于洗滌反應(yīng)溫度：4～22℃臨床意義：鹽水凝集試驗(yàn)陽性，并在37℃也有活性的抗體有意義。室溫有活性，37℃無活性者臨床意義不大。優(yōu)點(diǎn)：簡便、快捷、直觀。缺點(diǎn)：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)第4頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗人球蛋白試驗(yàn)是1945年由Coombs等人建立的，又稱Coombs試驗(yàn)?？谷饲虻鞍自囼?yàn)的建立在血型血清學(xué)上有著非常重要的意義。分為直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT）和間接抗人球蛋白試驗(yàn)（IAT）?？谷饲虻鞍自囼?yàn)第5頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三IgG類血型抗體（主要是免疫抗體，如Rh血型抗體）分子量小，與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)，稱之為不完全抗體，但在加入抗-IgG后，以其搭橋作用則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)。補(bǔ)體成分在體內(nèi)被紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物激活以后，結(jié)合在紅細(xì)胞表面。在體外含補(bǔ)體的多克隆抗體，或抗C3b、抗C3d等單特異性抗體與補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞反應(yīng)，使之凝集也稱為抗球蛋白試驗(yàn)?？谷饲虻鞍自囼?yàn)原理第6頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三DAT是檢測(cè)體內(nèi)致敏紅細(xì)胞的一種方法，用于檢查紅細(xì)胞是否已被不完全抗體所致敏，尤其是IgG和C3d包被的紅細(xì)胞。應(yīng)用：HDN和自身免疫性溶血性貧血的診斷紅細(xì)胞被藥物抗體致敏的檢查急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的檢查直接抗人球蛋白試驗(yàn)第7頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三第8頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三IAT是檢測(cè)血清中不完全抗體的一種，用于測(cè)定在體外能引起紅細(xì)胞致敏的抗體。應(yīng)用：血型的鑒定，如Rh血型抗體的檢出和鑒定交叉配血間接抗人球蛋白試驗(yàn)第9頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三第10頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有負(fù)電荷，是紅細(xì)胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷以及紅細(xì)胞之間的排斥力，縮短了紅細(xì)胞之間的間距，使IgG抗體分子能與有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集常用的酶（0.5%）：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)第11頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三優(yōu)點(diǎn)：酶法能顯著增強(qiáng)一些抗原抗體系統(tǒng)的反應(yīng)活性，Rh和Kidd系統(tǒng)最明顯缺點(diǎn)：①酶法處理RBC，蛋白酶會(huì)使RBC的抗原結(jié)構(gòu)破壞和變性（M、N、Fya、Fyb）②操作繁復(fù)，少數(shù)人對(duì)酶液過敏酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)第12頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三原理：凝聚胺是一種多價(jià)陽離子聚合物，在溶液中有多個(gè)陽離子基團(tuán)，能中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，并借助正負(fù)電荷的作用，引起紅細(xì)胞的非特異性凝集。當(dāng)紅細(xì)胞與血清在低離子介質(zhì)中孵育后，IgG抗體與紅細(xì)胞上相應(yīng)的抗原結(jié)合在凝聚胺的作用下發(fā)生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分，再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負(fù)電荷與凝聚胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消失，而真正的凝集不會(huì)消失。凝聚胺試驗(yàn)第13頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三第14頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三微柱凝膠試驗(yàn)原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化學(xué)物質(zhì)做成微型凝膠柱，柱的上端有一個(gè)加樣反應(yīng)室。抗原抗體反應(yīng)后離心，凝膠柱起過篩作用，紅細(xì)胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝膠的上部，未凝集的紅細(xì)胞通過凝膠的間隙，沉積到底部。第15頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三微柱凝膠免疫反應(yīng)的本質(zhì)：凝集反應(yīng)紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)凝集。根據(jù)紅細(xì)胞在膠質(zhì)介質(zhì)中的位置肉眼判斷。第16頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三微柱凝膠試驗(yàn)特異性膠：抗A、抗B、抗D中性膠：對(duì)照孔、反定型抗人球蛋白膠：抗篩、交叉配血第17頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三幾種方法的比較方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)鹽水法操作方便,費(fèi)用低廉只能檢出不相配合完全抗體,不能檢出不相配合的不完全抗體抗球蛋白法檢測(cè)不完全抗體最靈敏的方法操作復(fù)雜、不利于急診檢查和血庫的大批量工作酶法增強(qiáng)Rh、Kidd系統(tǒng)破壞M、N、S、s、Fy(a)、Fy(b)抗原結(jié)構(gòu),易失活,壽命短,反應(yīng)時(shí)間長凝聚胺法方便、應(yīng)用最廣Kell系統(tǒng)部分抗體如抗K、抗kp(a)、抗kp(b)檢測(cè)不出,需要抗球蛋白試驗(yàn).且肝素對(duì)其有影響,易引起假陰性.微柱凝膠法國際安全輸血檢查的推薦方法，靈敏度高、重復(fù)性好、特異性好、檢測(cè)結(jié)果可較長時(shí)間保存費(fèi)用高第18頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗體的篩選及鑒定有臨床意義的抗體：能引起新生兒溶血病、引發(fā)溶血性輸血反應(yīng)，或者使輸入的紅細(xì)胞存活期減少的在37℃有反應(yīng)的同種異型抗體不規(guī)則抗體：抗A，抗B以外的抗體包括：同種抗體和自身抗體第19頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗體篩選方法鹽水介質(zhì)凝集法抗人球蛋白法凝聚胺法微柱凝膠法第20頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三結(jié)果的判讀與解釋溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反應(yīng)陽性結(jié)果。先觀察有無溶血，后觀察有無凝集。記錄結(jié)果，并與以前結(jié)果對(duì)照?？贵w篩選試驗(yàn)不一定能檢出所有有臨床意義的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量效應(yīng)的抗體，可能被漏檢。第21頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗體鑒定通過篩選，抗體一經(jīng)檢出，應(yīng)進(jìn)一步作抗體鑒定試驗(yàn)，以確定其特異性。①自身細(xì)胞檢查-

排除非特異性②譜紅細(xì)胞檢查第22頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗體鑒定譜紅細(xì)胞：一般是由8-16人份的已知血型表現(xiàn)型O型紅細(xì)胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)譜紅細(xì)胞的反應(yīng)格局一般可以鑒定常見的抗體。方法：在鹽水法基礎(chǔ)上、靈活應(yīng)用白蛋白介質(zhì)法、酶技術(shù)及抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)。第23頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三交叉配血主側(cè)：受血者血清+供者紅細(xì)胞檢測(cè)對(duì)供者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體次側(cè)：受血者紅細(xì)胞+供者血清檢測(cè)對(duì)受者紅細(xì)胞起反應(yīng)的抗體自身對(duì)照：受血者紅細(xì)胞+受血者血清排除自身抗體、直接抗球蛋白試驗(yàn)陽性及紅細(xì)胞緡錢狀凝集第24頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三緡錢狀凝集也稱串錢狀凝集，是一種假凝集，紅細(xì)胞像許多錢幣堆積在一起。血漿球蛋白異常，如高球蛋白血癥、巨球蛋白血癥。使用大分子右旋糖酐或羥乙基淀粉擴(kuò)容。將血清適當(dāng)稀釋。第25頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗篩和配血結(jié)果分析主側(cè)交叉配血不相合的原因：

①病人或供血者ABO血型錯(cuò)誤②病人血清中存在同種抗體或自身抗體，與供血者紅細(xì)胞上的相應(yīng)抗原反應(yīng)。③供血者紅細(xì)胞上已經(jīng)包被了抗體，導(dǎo)致抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。④病人血清異常，如白蛋白／球蛋白比例不正常引起緡錢狀假凝集，血清中存在高分子聚合物的血漿擴(kuò)容劑引起假陽性（用鹽水添加試驗(yàn)來解決）。⑤試驗(yàn)系統(tǒng)被污染。

第26頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗篩和配血結(jié)果分析主側(cè)：+，自身對(duì)照：-，抗篩：-

①患者或供血者ABO血型錯(cuò)誤→重新定型②患者血清中可能含ABO抗體→檢查病人亞型、輸血史及移植史③患者血清中有抗體，但篩選細(xì)胞上無相應(yīng)抗原→對(duì)患者血清進(jìn)行抗體鑒定

④供血者紅細(xì)胞直抗試驗(yàn)陽性→檢查供血者直抗試驗(yàn)第27頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗篩和配血結(jié)果分析主側(cè)：+，自身對(duì)照：-，抗篩：+

患者血清中的同種抗體與供血者紅細(xì)胞上相應(yīng)抗原反應(yīng)→對(duì)患者血清進(jìn)行抗體鑒定，選擇無相應(yīng)抗原的血第28頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗篩和配血結(jié)果分析主側(cè)：+，自身對(duì)照：+，抗篩：+

①病人血清中可能同時(shí)存在自身抗體和同種抗體→對(duì)病人血清進(jìn)行抗體吸收及鑒定，用吸收后血清配血②病人血清不正常：白/球比不正常、血漿擴(kuò)容物→鹽水添加試驗(yàn)

③試驗(yàn)系統(tǒng)污染→重新抽樣檢測(cè)第29頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三抗篩和配血結(jié)果分析次測(cè)交叉配血不相合的原因：

①供血者血漿中存在針對(duì)患者紅細(xì)胞抗原的抗體。②病人與供血者的ABO血型不相合。③病人的紅細(xì)胞已經(jīng)包被了抗體，直抗試驗(yàn)陽性。第30頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三案例分析案例1：患者女，85歲，因重度貧血，申請(qǐng)輸注紅細(xì)胞懸液3u。交叉配血結(jié)果為：患者血型為A型Rh陽性，抗篩（+），自身對(duì)照（-），交叉配血時(shí)主側(cè)凝集程度為（+），次側(cè)不凝集。問：如何處理？第31頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三案例分析案例2：患者，女，