單克隆抗體的原理定義

抗體制備與抗原抗體反應(yīng)及應(yīng)用

抗體的制備（多克隆與單克隆抗體）基因工程抗體的制備主要的抗原抗體反應(yīng)免疫學(xué)在生物學(xué)中的應(yīng)用抗體的制備（多克隆與單克隆抗體）抗原上那部分可以引起機(jī)體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu)，叫做抗原決定簇。一個(gè)抗原上可以有許多不同的抗原決定簇，因而使機(jī)體產(chǎn)生許多不同的抗體。

抗體的制備（多克隆與單克隆抗體）抗原上那部分可以引起機(jī)體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu)，叫做抗原決定簇。一個(gè)抗原上可以有許多不同的抗原決定簇，因而使機(jī)體產(chǎn)生許多不同的抗體。

多克隆抗體具有異質(zhì)性：如何表示？等電聚焦實(shí)驗(yàn)?zāi)芙沂径嗫寺】贵w中的各種抗體具有不同的等電點(diǎn)。等電聚焦實(shí)驗(yàn)：蛋白質(zhì)在pH梯度膠中電泳，每個(gè)分子沿著pH梯度遷移至電荷為中性的相應(yīng)pH位置，并在此點(diǎn)積聚。多克隆抗體通常用兔制備的TheimmuneresponsetoanantigengenerallyinvolvestheactivationofmultipleB-cellsallofwhichtargetaspecificepitopeonthatantigen.Asaresultalargenumberofantibodiesareproducedwithdifferentspecificitiesandepitopeaffinitiestheseareknownaspolyclonalantibodies.用包含多種抗原決定簇的抗原物質(zhì)免疫動(dòng)物，從而刺激多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位的不同抗體。因此，所獲得的免疫血清實(shí)際上是含有多種抗體的混合物，稱為多克隆抗體(polyclonalantibody，pAb)，可以制作“生物導(dǎo)彈”。另一方面，即使是同一個(gè)抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，也稱為多克隆抗體?？寡宓娜毕荩好恳环N抗血清都不同于其他任何的抗血清，即使選用遺傳背景完全相同的動(dòng)物，采用相同的抗原制劑和相同的免疫程序。產(chǎn)生的抗血清只能是有限的數(shù)量，因此同一份血清制劑不可能長(zhǎng)期使用或完成一系列復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)或臨床檢測(cè)。即使是用親和層析技術(shù)純化的抗體也可能包含少量引起交叉反應(yīng)的抗體，干擾對(duì)實(shí)驗(yàn)的分析。發(fā)展一種無(wú)限量能產(chǎn)生結(jié)構(gòu)均一且已知特異性的抗體分子方法。1975年Kǒhler和Milstein首先報(bào)道用細(xì)胞雜交技術(shù)使經(jīng)綿羊紅細(xì)胞（SRBC)免疫的小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,建立起第一個(gè)B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞株,并成功地制得抗SRBC的單克隆抗體（monoclonalantibody,McAb）。迄今世界已研制成數(shù)以千計(jì)的McAb。"fortheoriesconcerningthespecificityindevelopmentandcontroloftheimmunesystemandthediscoveryoftheprincipleforproductionofmonoclonalantibodies"Jerne

KǒhlerMilsteinTheNobelPrizeinPhysiologyorMedicine1984由一種克隆產(chǎn)生的針對(duì)一種細(xì)胞表位的特異性抗體叫做單克隆抗體。MonoclonalantibodiesrepresentasingleBlymphocytegeneratingantibodiestoonespecificepitope.單克隆抗體為單一種B細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的一種均一的免疫球蛋白，是一種獨(dú)特型的抗體。它的特異性是針對(duì)一個(gè)抗原決定簇的。單克隆抗體的原理

骨髓瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)能大量無(wú)限增殖，因此能在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，但不能分泌特異性抗體；

B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生特異性抗體，但在體外不能無(wú)限增殖，因此不能長(zhǎng)期培養(yǎng)。免疫動(dòng)物的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后形成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了兩個(gè)親代細(xì)胞的特性，既具有骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限制增殖的特性，又具有免疫B細(xì)胞合成和分泌特異性抗體的能力。在制備雜交瘤過程中的一個(gè)問題是什么？如何解決？讓未成雜交瘤的骨髓瘤細(xì)胞和脾臟細(xì)胞去死HAT培養(yǎng)基[含有次黃嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)]中進(jìn)行選擇性培養(yǎng)。

5-磷酸核糖焦磷酸尿嘧啶RNADNA

次黃嘌呤（H）

胸腺嘧啶（T）氨基蝶呤（A）合成主要途徑合成替代途徑TKHPGRTHPGRT：次黃嘌呤鳥嘌呤核苷轉(zhuǎn)移酶TK：胸腺嘧啶激酶未融合的脾細(xì)胞因不能在體外長(zhǎng)期存活而死亡；未融合的骨髓瘤細(xì)胞合成核酸的主要途徑被培養(yǎng)基中的氨基蝶呤阻斷，又因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT），不能利用培養(yǎng)基中的次黃嘌呤合成核酸而死亡。

融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾臟細(xì)胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。經(jīng)過克隆選擇，可篩選出能產(chǎn)生特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，在體內(nèi)或體外培養(yǎng)，即可無(wú)限制地大量制備單克隆抗體。未融合的親代脾臟細(xì)胞壽命有限，不久就死亡了。

三、單克隆抗體的制備過程

雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的主要步驟包括：

（1）抗原制備；

（2）免疫動(dòng)物；

（3）免疫脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的制備；

（4）細(xì)胞融合；

（5）雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)；

（6）雜交瘤細(xì)胞的篩選；

（7）雜交瘤細(xì)胞的克隆化；

（8）單克隆抗體的檢定；

（9）分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系的建立；

（10）單克隆抗體的大量制備。1、免疫動(dòng)物免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的過程。一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射?？乖ㄟ^血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官，刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。

2、細(xì)胞融合采用眼球摘除放血法處死小鼠，無(wú)菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨，制備脾細(xì)胞懸液。將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細(xì)胞。3、選擇性培養(yǎng)選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞，一般采用HAT選擇培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，不能利用補(bǔ)救途徑合成核酸而死亡。未融合的脾細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，但其本身不能在體外長(zhǎng)期存活也逐漸死亡。只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次黃嘌呤－鳥嘌呤－磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，并具有骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。4、雜交瘤陽(yáng)性克隆的篩選與克隆化在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞，只有少數(shù)是分泌所需特異性單克隆抗體的細(xì)胞，因此，必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的免疫學(xué)方法，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。經(jīng)過全面鑒定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識(shí)別抗原的表位及其分子量后，及時(shí)進(jìn)行凍存。5、單克隆抗體的大量制備單克隆抗體的大量制備主要采用動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。

（1）體內(nèi)誘生法取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液體石臘或降植烷進(jìn)行預(yù)處理。1-2周后，腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖，并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體。（2）體外培養(yǎng)法將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體，收集培養(yǎng)上清液，離心去除細(xì)胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限。近年來(lái)，各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn)，大大提高了抗體的生產(chǎn)量。鼠單抗也具有一些缺陷，主要是小鼠免疫系統(tǒng)不能識(shí)別某些免疫原。另一方面，由于多克隆抗體識(shí)別的是抗原的多個(gè)抗原決定簇，同時(shí)抗體的親和性要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于鼠來(lái)源的抗體，再加上技術(shù)環(huán)節(jié)的簡(jiǎn)單性，所以一直具有不可取代的優(yōu)勢(shì)，也廣泛應(yīng)用于科研及診斷。如何得到高親和性、強(qiáng)特異性、廣譜識(shí)別性的抗體？

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇：做單抗的動(dòng)物最開始是小鼠，后來(lái)又有像epitomics這樣的公司用兔子的(有特殊的專利)，還有一些人用大鼠神馬的，當(dāng)然其它的動(dòng)物的也有，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，現(xiàn)在能用傳統(tǒng)方法制備單抗的動(dòng)物已經(jīng)有二三十種了。但是最主流的還是小鼠和兔子了。Monoclonalantibodies(mAbs)fromrabbitshavenotbeenavailablebecausenorabbitplasmacytomas(骨髓瘤樣腫瘤),fromwhichahybridomafusionpartnercouldbegenerated,havebeenidentified.1995年，Dr.KatherineKnight在LoyolaUniversityofChicago成功地在在轉(zhuǎn)基因兔中獲得骨髓瘤樣腫瘤(plasmacytoma)。其后幾年里，Dr.RobertPytela和Mr.WeiminZhu在UCSF將此技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn)，使之能高產(chǎn)量的生產(chǎn)兔單克隆抗體。兔單克隆抗體(RabMAbs)：新一代單克隆抗體用于科研、診斷和治療如何獲得骨髓瘤樣腫瘤?在c-myc/v-abl轉(zhuǎn)基因兔身上成功地獲得了兔漿細(xì)胞瘤細(xì)胞系proto-oncogenes(原癌基因)

調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的正常細(xì)胞基因。突變后轉(zhuǎn)化成為致癌的癌基因myc轉(zhuǎn)錄因子Burkitt淋巴瘤、肺癌、早幼粒白血病Abl-1:非受體酪氨酸激酶慢性髓性白血病美國(guó)Epitomics公司成立于2001年9月，與加州大學(xué)舊金山分校(UCSF)及芝加哥LOYOLA大學(xué)聯(lián)手開發(fā)出新型雜交瘤技術(shù)，擁有兔單克隆抗體(RabMabs)技術(shù)的全球?qū)＠菄?guó)際上唯一一家擁有兔類單抗技術(shù)的生物技術(shù)公司。

2012年3月6日英國(guó)上市公司Abcam宣布將以1.7億美元收購(gòu)全球唯一兔單株抗體蛋白生物技術(shù)公司Epitomics(F-宜佰)Epitomics由于兔脾臟較大，可以進(jìn)行更多的融合實(shí)驗(yàn)，使得高通量篩選融合細(xì)胞成為可能。預(yù)期后10年數(shù)百種治療性抗體將被開發(fā)用于許多疾病的治療。鼠單克隆抗體與兔單克隆抗體的比較親和力更高:可以比鼠抗血清識(shí)別更多種類的表位

識(shí)別表位更多:能夠識(shí)別許多小鼠中不產(chǎn)生免疫的抗原

特異性更高、檢測(cè)靈敏度更高、應(yīng)用范圍更廣、背景本底更低漿細(xì)胞腫瘤基因工程抗體的制備生物導(dǎo)彈的原理:生物導(dǎo)彈是免疫導(dǎo)向藥物的形象稱呼，它由單克隆抗體與藥物、酶或放射性同位素配合而成，因帶有單克隆抗體而能自動(dòng)導(dǎo)向，在生物體內(nèi)與特定目標(biāo)細(xì)胞或組織結(jié)合，并由其攜帶的藥物產(chǎn)生治療作用。

單克隆抗體具有高度專一性，能夠識(shí)別細(xì)胞表面抗原、各種受體、各種體液成分及細(xì)胞內(nèi)和組織內(nèi)的各種成分，能精確地瞄準(zhǔn)和捕獲靶細(xì)胞，特異性地與靶目標(biāo)發(fā)生反應(yīng)，因而有“生物導(dǎo)彈”之稱。

單抗體引導(dǎo)藥物或毒素到達(dá)抗原存在部位使藥物或使毒素發(fā)揮更有效的作用.從而減少藥物、毒素、同位素和酶在腫瘤治療過程中引起嚴(yán)重的副作用,大大提高治療腫瘤的效果。用鼠單克隆抗體制備的生物導(dǎo)彈有什么問題？雜交瘤是鼠來(lái)源的，因此產(chǎn)生的抗體也是鼠源的蛋白，對(duì)于人體而言是一種異種蛋白。異種蛋白在人體內(nèi)可能會(huì)引起免疫反應(yīng)（哮喘、蕁麻疹/風(fēng)疹塊，產(chǎn)生抗體等）或被排斥，有時(shí)會(huì)引起嚴(yán)重的致死性反應(yīng)，因此自1980年代以來(lái)，如何解決生物導(dǎo)彈的這個(gè)問題，一直是生物導(dǎo)彈在人體內(nèi)應(yīng)用的重要問題。FR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4V區(qū)抗體基因的改造將鼠源抗體的V區(qū)與人源抗體C區(qū)基因重組，獲得的嵌合體（chimericalantibody),可保留鼠抗體對(duì)抗原的高親和性，又減弱鼠抗原對(duì)人的免疫原性，提高治療性抗體的效果。解決方法鼠單抗恒定區(qū)人源化鼠單抗恒定區(qū)人源化如何得到親和力高、特異性強(qiáng)的抗體克??？通過遺傳工程技術(shù)改造與生產(chǎn)抗體抗體基因文庫(kù)將不同的重鏈和輕鏈基因隨機(jī)組合，克隆到合適的表達(dá)載體（噬菌體）中，在原核細(xì)胞表達(dá)不同的抗體，形成一個(gè)抗體庫(kù)。從這個(gè)抗體庫(kù)中，用抗原可以篩選到相應(yīng)的抗體基因。優(yōu)點(diǎn)：一是從不適合進(jìn)行人工免疫的物種獲得單克隆抗體，如人源單克隆抗體；二是可快速方便獲得親和力高、特異性強(qiáng)的克隆抗體。主要的抗原抗體反應(yīng)抗體效價(jià)的測(cè)定血清：血液凝固析出的淡黃色透明液體，在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無(wú)纖維蛋白原?？贵w效價(jià)(滴度，titer)：通過血清學(xué)方法能顯示一定反應(yīng)的抗血清(或抗體)的最高稀釋倍數(shù)(或稀釋度的倒數(shù))。如終點(diǎn)稀釋度為1/100，則血清的效價(jià)(每1ml的血清中抗體效價(jià))為100抗體單位的高低是衡量血清中抗體水平的一項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)。

試管凝集實(shí)驗(yàn)（tubeagglutinationtest）原理：大分子顆粒性抗原（細(xì)菌、紅細(xì)胞）與其相應(yīng)的抗體相結(jié)合，在適量的電解質(zhì)存在及一定的溫度下，經(jīng)過一定的時(shí)間可出現(xiàn)肉眼可見的凝聚團(tuán)塊。一般以標(biāo)準(zhǔn)抗原測(cè)得免疫血清或患者血清中抗體的效價(jià)。不加免疫血清＋＋＋＋、＋＋＋、＋＋、＋：凝聚強(qiáng)度＋：出現(xiàn)凝聚－：無(wú)凝聚抗體與多價(jià)抗原結(jié)合的濃度帶現(xiàn)象抗體稀釋度應(yīng)根據(jù)：①抗體效價(jià)高，溶液中特異性抗體濃度越高，工作稀釋度越高；②一般講，應(yīng)用的抗體稀釋度越大，溫育時(shí)間越長(zhǎng)。③抗體中非特異性蛋白含量、只有高稀釋度時(shí)才能防止非特異性背景染色；抗體的稀釋主要是指第一抗體，因?yàn)榈谝豢贵w中特異性抗體合適的嘗試是關(guān)鍵,應(yīng)用高稀釋度第一抗體僅顯示主親和力的特異性染色反應(yīng),減少或消除其中交叉抗體反應(yīng)。三、常見免疫分析方法利用抗原與抗體特異性反應(yīng)的特性對(duì)抗原或抗體進(jìn)行量和質(zhì)的測(cè)定分析。這類分析方法具有特異、靈敏和快速的特點(diǎn)。免疫沉淀1.環(huán)狀沉淀實(shí)驗(yàn)：是溶液中的沉淀反應(yīng)。在體外當(dāng)抗體與相應(yīng)抗原二者濃度比例恰當(dāng)時(shí)，會(huì)發(fā)生免疫沉淀。免疫監(jiān)測(cè)免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)分離蛋白人絨毛膜促性腺激素（HCG）的免疫監(jiān)測(cè)尿液膠乳胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生大量的人絨毛膜促性腺激素，可通過孕婦血液循環(huán)而排泄到尿中人絨毛膜促性腺激素的免疫監(jiān)測(cè)-陰性對(duì)照Co-IP工作示意圖Co-immunoprecipitationbinding

wash

elutionYYYYY免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)分離蛋白Identifyingspecificproteininteractionpartnersusingquantitativemassspectrometryandbeadproteomes2.免疫雙擴(kuò)散抗原抗體在半透明的半固相介質(zhì)中進(jìn)行沉淀實(shí)驗(yàn)。雙擴(kuò)散是在瓊脂板中抗原和抗體分別從相鄰的孔中向四周擴(kuò)散，在抗原孔和抗體孔之間二者比例合適的部位形成沉淀線。當(dāng)兩個(gè)抗原完全一致時(shí)，兩條沉淀線完全融合；如果兩個(gè)抗原無(wú)共同抗原決定簇時(shí)，沉淀線互不干擾；當(dāng)兩個(gè)抗原只是部分抗原決定簇相同，還有其他不同的抗原決定簇，則沉淀線在后者一方形成突出的小刺3.免疫電泳利用蛋白質(zhì)在凝膠中電泳遷移率不同能被分離開來(lái)的特點(diǎn)與免疫擴(kuò)散結(jié)合一起進(jìn)行分析的方法。1、血清免疫電泳:雙擴(kuò)散2、火箭電泳：為加速度的單向免疫擴(kuò)散(抗原擴(kuò)散,抗體不擴(kuò)散)與電泳結(jié)合的一種方法在含抗體的瓊脂板一端打一排抗原孔；加入待測(cè)標(biāo)本后，將抗原置陰極端，抗原泳向陽(yáng)極，在抗原抗體比例恰當(dāng)處發(fā)生結(jié)合沉淀。隨著泳動(dòng)抗原的減少，沉淀逐漸減少，形成峰狀的沉淀區(qū)，狀似火箭。抗體濃度保持不變，峰的高度與抗原量呈正比，用標(biāo)本中的抗原含量。常用于標(biāo)記抗原的放射性同位素有3H、125I、131I、14C等。3H可以置換有機(jī)化合物中的氫，不影響原有化學(xué)性質(zhì)，且半衰期長(zhǎng)和能量低，便于防護(hù)。125I的敏感度約比14C大3900倍。又因?yàn)?25I有合適的半衰期，低能量的γ射線易于標(biāo)記，標(biāo)記物。

標(biāo)記方法簡(jiǎn)便，多肽、蛋白質(zhì)與小分子半抗原均可進(jìn)行碘標(biāo)記。一些不能直接用碘標(biāo)記的半抗原，通過接上一個(gè)酪氨酸亦可用碘標(biāo)記之。氯胺T直接標(biāo)記法。氯胺T是一種氧化劑。在偏堿溶液中（pH7.5），氯胺T將125I的I－氧化為I+，I+取代蛋白質(zhì)酪氨酸苯環(huán)的氫，形成二碘酪氨酸。發(fā)光免疫分析用發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗體。根據(jù)發(fā)光物的來(lái)源不同,有化學(xué)發(fā)光(chemiluminessence)和生物發(fā)光(bioluminescence)：化學(xué)發(fā)光供能反應(yīng)為一般化學(xué)反應(yīng)。指某種物質(zhì)分子吸收化學(xué)能而產(chǎn)生的光輻射。例如化學(xué)發(fā)光劑如熒光醇（luminol）發(fā)生高能化學(xué)反應(yīng)，形成處于電子激發(fā)態(tài)的分子，當(dāng)回到基態(tài)時(shí)，伴隨光子的釋放，發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。用于標(biāo)記的酶的種類:堿性磷酸酶(alkalinephosphatase)辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase)b-半乳糖苷酶(b-galactosidase)廣泛使用,因酶促反應(yīng)使測(cè)定的結(jié)果被放大,反應(yīng)靈敏度高b.間接法:用酶標(biāo)第二抗體來(lái)檢查第一抗體是否與抗原結(jié)合,避免了用酶標(biāo)記每一種抗原或抗體的復(fù)雜過程。a.直接法:用酶標(biāo)第一抗體來(lái)檢查第一抗體是否與抗原結(jié)合。酶聯(lián)免疫分析法生物發(fā)光是指生物體發(fā)光或生物體提取物在實(shí)驗(yàn)室中發(fā)光的現(xiàn)象。它不依賴于有機(jī)體對(duì)光的吸收，而是一種特殊類型的化學(xué)發(fā)光，化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)楣饽艿男蕩缀鯙?00%。也是氧化發(fā)光的一種。生物發(fā)光的一般機(jī)制是：由細(xì)胞合成的化學(xué)物質(zhì)，在酶的作用下，使化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能：蟲熒素（luciferin）在蟲熒酶（lucifase）的催化下，有ATP，Mg2＋及O2存在時(shí)，發(fā)生瞬時(shí)發(fā)光反應(yīng)。

PrincipleofWesternblottingwithEnhancedChemiluminescence(ECL)detectionsystem免疫學(xué)在生物學(xué)中的應(yīng)用Indirectdetectionmethod化學(xué)發(fā)光(chemiluminescent)原理發(fā)光液A和B分別是Luminol和過氧化氫，在辣根過氧化物酶（HRP）的催化作用下,Luminol與過氧化氫反應(yīng)生成一種過氧化物，過氧化物不穩(wěn)定隨即分解，形成一種能發(fā)光的電子激發(fā)中間體,當(dāng)后者由激發(fā)態(tài)返回至基態(tài)，就會(huì)產(chǎn)生熒光。在發(fā)光過程中不需要消耗HRP,HRP只是起催化作用，所以只要HRP沒降解失活,是可以重復(fù)加發(fā)光液的。但HRP作為一種蛋白酶,在室溫放置時(shí)間過長(zhǎng),是會(huì)降解的；同時(shí)在發(fā)光過程中有什么物質(zhì)(比如顯影液)污染了膜的話,也有可能滅活膜上的HRP。LumigenPS3:化學(xué)發(fā)光檢測(cè)中與辣根過氧化物酶結(jié)合的底物

,producesamoreintenselightemissionoflingerduration樣品1樣品2電泳遷移率：在特定介質(zhì)中單位電場(chǎng)強(qiáng)度的帶電顆粒電泳移動(dòng)速度。電泳遷移率與顆粒所帶電荷量成正比，與顆粒的半徑和介質(zhì)黏度成反比。實(shí)際工作中常用相對(duì)電泳遷移率，即兩種帶電顆粒在同一介質(zhì)、同一電場(chǎng)中泳動(dòng)距離之比。一般情況下電泳中蛋白質(zhì)