正交試驗法優(yōu)化淫黃顆粒的提取工藝

正交試驗法優(yōu)化淫黃顆粒的提取工藝【摘要】［目的］優(yōu)化淫黃顆粒的提取工藝。［方法］采用正交試驗法，以提取液中淫羊藿苷的含量為考察指標(biāo)，對影響水煎提取效果的加水量、浸泡時間、煎煮時間、次數(shù)等4個因素進(jìn)行研究。［結(jié)果］淫黃顆粒的最佳提取工藝為A2B2C3，即加水量為8倍，提取3次，每次。［結(jié)論］該實驗所優(yōu)選的工藝穩(wěn)定，可行。

【關(guān)鍵詞】淫黃顆?？傸S酮淫羊藿苷提取工藝正交試驗

Abstract:［Objective］OptimisetheextracttechnicalofYinhuangGranules.［Method］Takeorthogonaltest,takecarriincontentinextractasobservationindex,studythe4factorsofwateramount,sippingtime,decoctingtimeandtimesinfluencingthedecoctionextractresult.［Result］ThebestextracttechnicalisA2B2C3,8timesforwater,3timesofextract,/time.［Conclusion］Theexperimentshowsthetechnicalisstableandavailable.

Keywords:YinhuangGranules；totalflavones；icariin；extracttechnical；orthogonaltest

淫黃顆粒系以淫羊藿為君，配伍黃芪而制成的中藥復(fù)方制劑，具有補氣健腎之功效，主要用于腎病綜合征的治療。為確保該制劑的臨床療效，本文采用正交設(shè)計方法，以干膏收率和總黃酮提取率為指標(biāo)，對淫黃顆粒水提取工藝進(jìn)行優(yōu)化研究。

1儀器與材料

TU1800PC型紫外可見分光光度計。淫羊藿苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110737200312。藥材購于杭州康佳醫(yī)藥有限公司，經(jīng)鑒定符合《中國藥典》2005版(二部)［1］規(guī)定。

2方法與結(jié)果

正交試驗設(shè)計

選用L9(34)正交表，以干膏收率和總黃酮提取率為考核指標(biāo)，考察水提取中的加水量、煎煮時間和煎煮次數(shù)三個因素，每個因素設(shè)三水平。其因素水平見表1。表1正交試驗因素水平表

樣品提取液的制備

按處方配比稱取藥材適量，按正交試驗表進(jìn)行水提取，藥液經(jīng)濾紙濾過，濾液濃縮至1∶2，備用。

干膏收率的測定

精密量取上述提取液50ml，濃縮至一定體積，移置于已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥至恒重，計算干浸膏收率。結(jié)果見表2。

總黃酮含量的測定

對照品溶液的制備

精密稱取淫羊藿苷對照品，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

測定波長的選擇

精密量取上述對照品溶液，置10ml容量瓶中，加/L三氯化鋁溶液，混勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，于70℃恒溫水浴中加熱10min，取出后室溫放冷。用TU1800型紫外可見分光光度計，于400～700nm波長范圍內(nèi)掃描，于波長處有最大吸收，故選擇為測定波長。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取對照品溶液0、、、、、、、，分別置10ml容量瓶中，各加/L三氯化鋁溶液，混勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，于70℃恒溫水浴中放置10min，取出后室溫放冷，于的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，（得標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=+(r=)。淫羊藿苷在～/ml濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

重現(xiàn)性試驗

精密量取同一批提取液6份，按含量測定方法制備，并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定吸收度，RSD=%，重現(xiàn)性良好。

加樣回收率試驗

取已知含量的提取液6份，加入不同量的淫羊藿苷對照品，按含量測定方法制備，并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定吸收度，計算加樣回收率，結(jié)果見表3。平均回收率為%，RSD=%表3回收率試驗結(jié)果

含量測定

精密量取正交試驗提取液1ml，置蒸發(fā)皿中，水浴上蒸干后，殘渣加甲醇溶解，移入10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取樣品溶液2ml，置10ml容量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下的方法，自“加/L三氯化鋁溶液”起依法測定吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算黃酮含量和總黃酮提取總量，結(jié)果見表2。

表2正交試驗設(shè)計及干膏收率和總黃酮提取率

5結(jié)果分析

正交試驗結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表4和表5。以干浸膏得率為考察指標(biāo)，表3～2中極差R值大小顯示，各因素作用主次為C＞B＞A；方差分析結(jié)果表明：C因素的影響有極顯著性差異，A因素和B因素則均無顯著性影響，以A3B2C3組合為佳。以總黃酮提取率為考察指標(biāo)，表3～2中極差R值大小顯示，各因素作用主次為C＞A＞B；方差分析結(jié)果表明：A因素和B因素的影響無顯著性差異，而C因素的影響有顯著性差異，以A2B3C3組合為佳。表4浸膏得率方差分析表表5總黃酮提取率方差分析表

6驗證試驗

考慮到總黃酮提取率這一指標(biāo)較重要，同時兼顧省時節(jié)能，故擬確定水提取工藝為：A2B2C3。但從表3、5可見，提取次數(shù)對總黃酮提取率影響較大，故進(jìn)一步比較A2B2C3和A2B2C4。取同一批藥材，根據(jù)處方比例稱取藥材，按A2B2C4和A2B2C3進(jìn)行對比驗證試驗，按上述方法測定浸膏得率及總黃酮含量，結(jié)果見表6。表6驗證試驗結(jié)果

由表6可見，以浸膏得率及總黃酮提取率為指標(biāo)，按A2B2C3和A2B2C4進(jìn)行試驗，結(jié)果顯示兩者幾無差別，故確定水提取工藝為A2B2C3，即加水量為8倍，提取3次，每次。

3討論

方中君藥淫羊藿具有補腎陽、強筋骨、祛風(fēng)濕功效，其主要有效成分是淫羊藿苷和淫羊藿次苷等黃酮類化合物。黃芪為方中輔藥，具有補氣升陽、益衛(wèi)固表、利水消腫、托毒排膿、斂瘡生肌之功效，含皂苷類、多糖類、黃酮類及氨基酸類等，其中皂苷和多糖類被認(rèn)為系主要有效成份。根據(jù)方中各藥的有效成分及其溶解性能，設(shè)計確定采用水提工藝。

淫黃顆粒系復(fù)方制劑，成分復(fù)雜。因此，除以干膏收率為考核指標(biāo)外，同時選擇以淫羊藿苷為對照品，測定總黃酮的含量，以綜合評價工藝的合理性。結(jié)果顯示，本方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏，重現(xiàn)性及回收率均符合要求。

致謝：本文承蒙