2020-2021學(xué)年人教版選修1高二生物下學(xué)期期末沖刺06 土壤中分解尿素（解析版）

專(zhuān)題06土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

知識(shí)梳理

i.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

（1）分離原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻倜?這種物質(zhì)在把尿素分解成

無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起到催化作用。

（2）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用稀釋涂布平板法。

（3）實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣T樣品的稀釋T微生物的培養(yǎng)與觀察T細(xì)菌的計(jì)數(shù)。

2、稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物的注意問(wèn)題

用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物時(shí)，要求選擇菌落數(shù)在30?300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。解題時(shí)易出現(xiàn)以下誤解：

（1）只得到1個(gè)菌落數(shù)在30?300的平板是錯(cuò)誤的。錯(cuò)誤的原因是不符合實(shí)驗(yàn)的重復(fù)原則，易受到偶發(fā)因

素的影響。

（2）得到3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)在30?300的平板，也不一定正確，這可能有兩種情況：

①不同平板間差異較大，如得到3個(gè)平板，菌落數(shù)分別為230、34、240,雖然菌落數(shù)均在“30?300”

之間，這也是不正確的，因?yàn)椤?4”與“230”“240”差異太大，應(yīng)重新實(shí)驗(yàn)找出原因。

②不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結(jié)果。

可見(jiàn)，并不是只要得到3個(gè)“菌落數(shù)在30?300的平板”即可，而應(yīng)該是涂布的同一稀釋度的平板均

符合“菌落數(shù)在30?300的平板”且無(wú)較大差異，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作合格，才能按照計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算。

實(shí)戰(zhàn)演練

一、選擇題

I.在“分離以尿素為氮源的微生物''實(shí)驗(yàn)中，下列敘述正確的是（）

A.若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需設(shè)置未接種的LB培養(yǎng)基作對(duì)照

B.在尿素培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌落一定是尿素分解菌

C.尿素可以作細(xì)菌的碳源和氮源

D.如指示劑變紅就能準(zhǔn)確地認(rèn)定該菌能分解尿素

【答案】D

【分析】

1、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成胭酶的微生物才能分解尿素，

以尿素作為氮源。缺乏胭前的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所

以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。

2、方法：能合成胭酶的細(xì)菌才能分解尿素。配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解

尿素的細(xì)菌。

【詳解】

A、若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需設(shè)置接種了的牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基作對(duì)照，若牛肉膏蛋白

腺培養(yǎng)基培養(yǎng)基上的菌落種類(lèi)數(shù)目多于選擇培養(yǎng)基上的菌落類(lèi)型，則說(shuō)明起到了選擇作用，A錯(cuò)誤；

B、以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的不都是尿素分解菌，也有可能是自生固氮菌，B錯(cuò)誤；

C、分離分解尿素的細(xì)菌用的培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，除含碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽外，還應(yīng)含有瓊脂，其

中尿素可以作細(xì)菌的氮源，C錯(cuò)誤；

D、尿素分解菌可以產(chǎn)生胭酶將尿素分解分解為氨，使pH升高，培養(yǎng)基中進(jìn)入酚紅指示劑后，氨可以使指

示劑呈紅色，據(jù)此可以用酚紅指示劑鑒別尿素分解菌，如指示劑變紅就能準(zhǔn)確地認(rèn)定該菌能分解尿素，D

正確。

故選D。

2.幽門(mén)螺桿菌（含有假酶）感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成

菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)。下列有關(guān)敘述不正確的是（）

A.分離純化幽門(mén)螺桿菌時(shí)應(yīng)使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基

B.鑒別幽門(mén)螺桿菌時(shí)應(yīng)在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑和緩沖物質(zhì)

C.可用牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基做對(duì)照證明選擇培養(yǎng)基的選擇作用

D.可采用稀釋涂布平板法對(duì)幽門(mén)螺桿菌進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)

【答案】B

【分析】

1、胭酶可以將尿素分解成二氧化碳和氨氣。

2、分離純化細(xì)菌的方法：平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法。

【詳解】

A、幽門(mén)螺桿菌可以合成腺酶，可以利用尿素，所以分離純化幽門(mén)螺桿菌時(shí)應(yīng)使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)

基，A正確；

B、由于幽門(mén)螺桿菌在分解尿素的過(guò)程中會(huì)合成服酶，胭酶將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，pH升高，

所以可以用檢測(cè)pH的變化的方法來(lái)判斷尿素是否被分解，即在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)

生氨，pH升高，則該菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶，故鑒別幽門(mén)螺桿菌時(shí)應(yīng)在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，但不

能加緩沖物質(zhì)，B錯(cuò)誤；

C、為了證明選擇培養(yǎng)基的選擇作用，可用牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基做對(duì)照，牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基為普通培養(yǎng)基，

不具有選擇性，如果牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基有選擇作用，c正確;

D、稀釋涂布平板法可以用于微生物的分離和計(jì)數(shù)，因此對(duì)幽門(mén)螺桿菌進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)可才用稀釋涂布平板

法，D正確。

故選Bo

3.進(jìn)行垃圾分類(lèi)收集可以減少垃圾處理時(shí)間，降低處理成本?？蒲行〗M欲分離及培養(yǎng)若干種微生物用于對(duì)

濕垃圾（包括剩菜剩飯、骨頭、菜根菜葉、果皮等食品類(lèi)廢物）的處理。下列有關(guān)敘述正確的是（）

A.在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌處理；對(duì)培養(yǎng)基和操作者的

雙手進(jìn)行滅菌

B.培養(yǎng)過(guò)程需要向培養(yǎng)基通入無(wú)菌空氣并進(jìn)行攪拌，目的是使菌體充分接觸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和溶解氧，促進(jìn)細(xì)菌

生長(zhǎng)繁殖

C.科研小組若從生活垃圾中分離分解尿素的微生物，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑；如果有尿素分解菌存

在，則培養(yǎng)基中該菌落的周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)黑色

D.衛(wèi)生紙類(lèi)垃圾可采用焚燒的方式處理，有效減少對(duì)環(huán)境的污染。

【答案】B

【分析】

無(wú)菌技術(shù)包括滅菌和消毒，滅菌使用強(qiáng)烈的物理、化學(xué)手段殺滅物理表面和內(nèi)部的一切微生物及其芽抱，

消毒是用較溫和的手段消滅物體表面絕大多數(shù)的微生物。

【詳解】

A、在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，對(duì)操作者的雙手應(yīng)進(jìn)行酒精消毒，A錯(cuò)誤；

B、培養(yǎng)過(guò)程向培養(yǎng)基通入無(wú)菌空氣并進(jìn)行攪拌，可使菌體充分接觸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和溶解氧,促進(jìn)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖，

B正確：

C、從生活垃圾中分離分解尿素的微生物，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑；如果有尿素分解菌存在，則培養(yǎng)基

中該菌落的周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)紅色，C錯(cuò)誤；

D、衛(wèi)生紙類(lèi)垃圾采用焚燒的方式處理，其中塑料類(lèi)物質(zhì)燃燒會(huì)增加大氣污染物，D錯(cuò)誤。

故選B。

4.下列是關(guān)于“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)''實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是（）

A.利用稀釋涂布平板法準(zhǔn)確估計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尪?/p>

B.若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置未接種的牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基作為對(duì)照

C.在土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)采用稀釋涂布平板法

D.計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)選擇菌落數(shù)為30-300之間的平板，取平均值進(jìn)行計(jì)數(shù)

【答案】B

【分析】

1、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，需要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，計(jì)數(shù)的關(guān)鍵是

經(jīng)梯度稀釋后的學(xué)生倍數(shù)要合適，計(jì)數(shù)時(shí)通常選擇菌落數(shù)在30-300之間的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

2、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成胭酶的微生物才能分解尿素,

以尿素作為氮源。缺乏服酶的微生物山于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所

以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。

【詳解】

A、利用稀釋涂布平板法準(zhǔn)確估計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尪?，稀釋倍?shù)太低，菌落太多會(huì)長(zhǎng)在一起，

稀釋倍數(shù)太高，平板上菌落數(shù)目過(guò)少，都不易進(jìn)行計(jì)數(shù)，A正確；

B、若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需設(shè)置接種了的沒(méi)有選擇作用的細(xì)菌通用的牛肉膏蛋白陳

培養(yǎng)基作對(duì)照，B錯(cuò)誤；

C、在土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)采用稀釋涂布平板法，C正確；

D、計(jì)數(shù)時(shí)通常選擇菌落數(shù)在30-300之間的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，D正確。

故選B.

5.以下有關(guān)生物技術(shù)實(shí)踐的敘述中，正確的是（）

A.用稀釋涂布平板法測(cè)定某土壤浸出液中活菌數(shù)目時(shí)，測(cè)定值可能比實(shí)際值大

B.以尿素為唯一氮源并加入酚紅指示劑的培養(yǎng)基可分離并鑒定土壤中分解尿素的細(xì)菌

C.啤酒是以大麥為主要原料經(jīng)乳酸菌發(fā)酵制成的

D.市面上流行的“精釀”啤酒比工業(yè)啤酒品發(fā)酵時(shí)間長(zhǎng)、品質(zhì)高、更健康

【答案】B

【分析】

用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)結(jié)果常偏小，用顯微鏡直接計(jì)數(shù)結(jié)果常偏大。

分解尿素的細(xì)菌的鑒定原理：細(xì)菌合成的胭酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng).在以尿素為唯

一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。

【詳解】

A、用稀釋涂布平板法測(cè)定某土壤浸出液中活菌數(shù)目時(shí)，測(cè)定值可能比實(shí)際值小，A錯(cuò)誤；

B、以尿素為唯一氮源并加入酚紅指示劑的培養(yǎng)基，可根據(jù)指示劑是否變紅，分離并鑒定土壤中分解尿素的

細(xì)菌，B正確；

C、啤酒是酵母菌發(fā)酵來(lái)的，C錯(cuò)誤；

D、精釀啤酒保質(zhì)期短，D錯(cuò)誤。

故選Bo

6.某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為105的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上的平均菌落數(shù)為90,涂平板用的稀釋液的體積為0.1mL,

則每克樣品中的菌落數(shù)為（）

A.9xl（）8B.9xl07C.9xl05D.9xl06

【答案】B

【分析】

稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測(cè)樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開(kāi)，成

單個(gè)細(xì)胞存在（否則一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，

使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算

出樣品中的含菌數(shù)。計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c+V）xM,其中c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的

平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL）,M代表稀釋倍數(shù)。

【詳解】

由于平板上菌落數(shù)的平均值為90,稀釋倍數(shù)是105,所取稀釋液的體積為0.1mL,故每克樣品中的菌落數(shù)是

（90+0.1）xl05=9xl07,B正確。

故選B。

7.某興趣小組在校園土壤中取樣，進(jìn)行“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)。小明從稀釋倍數(shù)為106

培養(yǎng)基中篩選出約120個(gè)菌落，而其他同學(xué)只篩選出約40個(gè)菌落。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.小明出現(xiàn)這種結(jié)果的可能原因是和其他同學(xué)取樣的土壤不同

B.要證明培養(yǎng)基是否受到污染，可將小明配制的培養(yǎng)基不加土樣進(jìn)行培養(yǎng)

C.當(dāng)稀釋倍數(shù)太小時(shí)，可能由于菌落重疊而導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏小

D.在牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑可初步鑒定尿素分解菌

【答案】D

【分析】

1、微生物常見(jiàn)的接種的方法：①平板劃線(xiàn)法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線(xiàn)，在

恒溫箱里培養(yǎng)。在線(xiàn)的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形

成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可

形成單個(gè)菌落。

2、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)：（1）實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選：①原理：人為提供有利于目的菌

株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生

物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成胭酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源，缺乏胭酶的

微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分

解尿素的微生物；②方法：能合成胭酶的細(xì)菌才能分解尿素，配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)

的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌。

【詳解】

A、小明篩選出的菌落數(shù)明顯比其他同學(xué)多，出現(xiàn)這種結(jié)果的可能原因是和其他同學(xué)取樣的土壤不同，也有

可能是培養(yǎng)基混入其他氮源或培養(yǎng)基被污染，A正確；

B、要證明培養(yǎng)基是否受到污染，可將小明配制的培養(yǎng)基不加土樣進(jìn)行培養(yǎng)，即進(jìn)行空白對(duì)照，B正確；

C、當(dāng)稀釋倍數(shù)太小時(shí)，兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)菌連在一起時(shí)，培養(yǎng)基上看到的是一個(gè)菌落，可能會(huì)出現(xiàn)菌落重

疊而導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏小，C正確；

D、在尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若培養(yǎng)基變紅色，可初步鑒定尿素分解菌，D錯(cuò)誤。

故選D。

8.下列關(guān)于“分離以尿素為氮源的微生物”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.土樣應(yīng)從有哺乳動(dòng)物排泄物的地方取

B.在尿素固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌，都是以尿素為氮源的

C.將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37。恒溫培養(yǎng)24-48h

D.取IO,、1。5的土壤稀釋液0.1ml,分別涂布于尿素固體培養(yǎng)基上

【答案】B

【分析】

“分離土壤中以尿素為氮源的微生物”實(shí)驗(yàn)的原理：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上，能分解尿素的微生物能

以尿素為氮源生長(zhǎng)，其他不能利用尿素的微生物由于缺乏氮源無(wú)法生長(zhǎng)。選擇培養(yǎng)基是否起到選擇作用，

要有對(duì)照，對(duì)照組是全營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)基。

【詳解】

A、哺乳動(dòng)物排泄物中含有尿素，故土樣應(yīng)從有哺乳動(dòng)物排泄物的地方取，A正確；

B、在尿素固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌，不一定都是以尿素為氮源的，可能利用空氣中的氮?dú)猓珺錯(cuò)誤；

C、將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24~48h,C正確；

D、測(cè)定土壤中分解尿素的細(xì)菌總數(shù)，利用稀釋涂布平板法，即取10,if倍的土壤稀釋液各o」mL,分別

涂布于尿素固體培養(yǎng)基匕D正確。

故選B。

9.下表是某同學(xué)培養(yǎng)微生物時(shí)配制的培養(yǎng)基，關(guān)于此培養(yǎng)基的說(shuō)法中，錯(cuò)誤的是（）

葡萄糖尿素瓊脂

KH2Po4NaHPO4MgSO4-7H2O

1.4g2.lg0.2g10g1g15g

A.培養(yǎng)基中的KH2P04和Na2Hp04可作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定

B.葡萄糖可被微生物分解丙酮酸，丙酮酸為該菌生長(zhǎng)提供碳源和能源

C.此固體培養(yǎng)基可用于土壤中分解尿素細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

D.培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑后，生成的菌落周?chē)赡軙?huì)變紅

【答案】B

【分析】

1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以

及氧氣的要求。

2、選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微牛.物的生長(zhǎng)，有利于所

需微生物的生長(zhǎng)。

3、能分解尿素的細(xì)菌能合成胭酶，胭酶將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，pH升高，所以可以用檢測(cè)

pH的變化的方法來(lái)判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，pH升高，

指示劑變紅。

【詳解】

A、無(wú)機(jī)鹽可以作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定，所以培養(yǎng)基中KH2PCh和NazHPCh的作用之一是

作為緩沖劑保持pH穩(wěn)定，A正確；

B、葡萄糖作為碳源，可被微生物分解成丙酮酸，丙酮酸可為該菌的生長(zhǎng)提供能量和合成其他物質(zhì)的原料，

B錯(cuò)誤；

C、此固體培養(yǎng)基以尿素作唯一的氮源，可用于土壤中分解尿素細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)，C正確；

D、尿素分解菌將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基pH升高，加入酚紅指示劑后，生成的菌落周?chē)赡軙?huì)變紅，D

正確。

故選B。

10.實(shí)驗(yàn)室從土壤中分離得到了能夠分解尿素的細(xì)菌M,并分別研究了培養(yǎng)液中Ni2+、MM+和尿素濃度對(duì)

細(xì)菌MIR能產(chǎn)量的影響（說(shuō)明：研究某一項(xiàng)時(shí)其他條件相同且適宜），結(jié)果如下表。下列說(shuō)法正確的是（）

Ni2+濃度（％）00.00050.00010.0050.010.05

第一組

腺酶產(chǎn)量（u/mL）0.020.0560.0670.280.360.08

M"+濃度(%)00.00050.0010.0050.010.05

第二組

版酶產(chǎn)量（u/mL）0.0310.210.280.310.370.085

尿素濃度（％）00.20.40.60.81.0

第三組

版酶產(chǎn)量（u/mL）01.151.601.731.450.28

A.分離出能夠分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)使用以尿素作為唯一碳源的培養(yǎng)基

B.實(shí)驗(yàn)表明培養(yǎng)液中Ni2+和Mi?+對(duì)胭酶的影響為低濃度促進(jìn)，高濃度抑制

C.細(xì)菌M合成胭酶需要尿素誘導(dǎo)，尿素的最適誘導(dǎo)濃度在0.4%-0.8%之間

D.本實(shí)驗(yàn)遵循了對(duì)照性原則，但沒(méi)有遵循單一變量原則

【答案】C

【分析】

分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，與對(duì)照組相比（離子濃度為0的一組），培養(yǎng)液中Ni?+和Mi?+對(duì)胭酶的影響都是促進(jìn)生

成，只是低濃度促進(jìn)作用顯著，高濃度促進(jìn)作用減弱：表中數(shù)據(jù)中尿素濃度在尿素濃度為0.6%時(shí)版酶產(chǎn)量

最高，說(shuō)明尿素的最適濃度在0.4%~0.8%之間。

【詳解】

A、要分離出能夠分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)該以尿素作為唯一氮源，A錯(cuò)誤；

B、與對(duì)照組相比（離子濃度為0的一組），培養(yǎng)液中Ni2+和ME+對(duì)版酶產(chǎn)量都是促進(jìn)作用，沒(méi)有體現(xiàn)抑制

作用，B錯(cuò)誤；

C、尿素濃度為。時(shí)，版酸產(chǎn)量為0,說(shuō)明細(xì)菌M合成麻酶需要尿素；表中數(shù)據(jù)中尿素濃度在尿素濃度為

0.6%時(shí)胭酶產(chǎn)量最高，說(shuō)明尿素的最適濃度在0.4%~0.8%之間，C正確；

D、本實(shí)驗(yàn)研究某一項(xiàng)時(shí)其他條件相同且適宜，遵循了對(duì)照性原則和單一變量原則，D錯(cuò)誤。

故選C。

11.下列有關(guān)“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)''的敘述，正確的是（）

A.該培養(yǎng)基中應(yīng)加入伊紅美藍(lán)，獲得的菌落呈現(xiàn)紅色

B.分解尿素的細(xì)菌能產(chǎn)生麻酶，將尿素分解產(chǎn)生氮?dú)?/p>

C.可以設(shè)置對(duì)照，以排除非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，提高可信度

D.10mL樣品稀釋106倍后，取0.1mL進(jìn)行涂布，測(cè)得菌落數(shù)分別為18、234、276,則10mL樣品中細(xì)

菌數(shù)為2.55x108個(gè)

【答案】C

【分析】

1＞分解尿素的細(xì)菌的鑒定原理：細(xì)菌合成的胭醐將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng).在以尿素為

唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。

2、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法

（1）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品

中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)；③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。

（2）間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源

于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。③計(jì)算公

式：每克樣品中的菌株數(shù)=（C-V）XM,其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布

平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL）,M代表稀釋倍數(shù)。

【詳解】

A、分解尿素的細(xì)菌產(chǎn)生的嘛酶能將尿素分解為氨，氨使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高.在該培養(yǎng)基中應(yīng)加

入酚紅，獲得的菌落呈現(xiàn)紅色，A錯(cuò)誤；

B、分解尿素的細(xì)菌能產(chǎn)生版酶，將尿素分解產(chǎn)生氨，B錯(cuò)誤；

C、分離微生物時(shí)，需要設(shè)置不接種的培養(yǎng)基與實(shí)驗(yàn)組一起培養(yǎng)做空白對(duì)照，以排除非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

的干擾，提高可信度，C正確；

D、對(duì)10mL土樣稀釋1。6倍后，取0.1mL進(jìn)行涂布，測(cè)得的菌落數(shù)分別為18、234、276,為了保證結(jié)果準(zhǔn)

確，一般選擇菌落數(shù)在30?300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，則該10mL土樣中分解尿素的細(xì)菌數(shù)為（234+276）

4-2x106-?0.1x10mL=2.55x10'°^,D錯(cuò)誤。

故選C。

12.尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，土壤中的某些細(xì)菌能合成胭酶，可以將尿素分解成氨和CO2,然后被植

物利用。下列有關(guān)土壤中尿素分解菌的分離和培養(yǎng)的敘述，正確的是（）

A.為了防止雜菌污染應(yīng)將采集的土樣進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

B.若涂布的3個(gè)平板中的1組數(shù)據(jù)結(jié)果與另外兩組相差太遠(yuǎn)，則需舍棄此數(shù)據(jù)

C.本實(shí)驗(yàn)采用稀釋涂布平板法進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)，用酚紅試劑進(jìn)行檢測(cè)鑒定

D.從反芻動(dòng)物的瘤胃中與從土壤中分離尿素分解菌的實(shí)驗(yàn)條件和培養(yǎng)方法相同

【答案】C

【分析】

常用的接種微生物的方法有稀釋涂布平板法和平板劃線(xiàn)法，稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀

釋?zhuān)缓髮⒉煌♂尪鹊木和坎嫉焦腆w瓊脂培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，將聚集在

一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，獲得由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的菌落。

【詳解】

A、采集的土樣中含有欲分離的尿素分解菌，不能進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，A錯(cuò)誤；

B、若滿(mǎn)足有兩組數(shù)據(jù)在30~300之間，則可以取符合要求的數(shù)據(jù)求平均值，若不滿(mǎn)足有兩組數(shù)據(jù)處于30?

300之間，則需要重新實(shí)驗(yàn)，B錯(cuò)誤；

C、分離土壤中尿素分解菌實(shí)驗(yàn)可以采用稀釋涂布平板法進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)，由于尿素分解產(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基

pH升高，可用酚紅試劑進(jìn)行檢測(cè)鑒定，C正確；

D、反芻動(dòng)物的瘤胃中酸性較大，而土壤中尿素分解菌能使培養(yǎng)基呈堿性，因此兩組分離尿素分解菌的實(shí)驗(yàn)

條件不同，D錯(cuò)誤。

故選C。

【點(diǎn)睛】

本題以分離和培養(yǎng)尿素分解菌為情境材料，考查微生物培養(yǎng)中的滅菌、計(jì)數(shù)以及微生物的分離和檢測(cè)等知

識(shí)，考查知識(shí)獲取能力群和實(shí)踐操作能力群，涉及生物核心素養(yǎng)的生命觀念、科學(xué)思維和科學(xué)探究。

13.下列關(guān)于“分離以尿素為氮源的微生物”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.從有哺乳動(dòng)物排泄物的地方取土樣，分離到目的微生物的概率高

B.實(shí)驗(yàn)中所用LB固體培養(yǎng)基，與分離大腸桿菌所用LB培養(yǎng)基成分有不同

C.對(duì)尿素固體培養(yǎng)基滅菌的方法是G6玻璃砂漏斗過(guò)濾

D.在尿素固體培養(yǎng)基生長(zhǎng)的微生物不一定都能分泌胭酶

【答案】C

【分析】

1、微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以

及氧氣的要求。

2、微生物常見(jiàn)的接種的方法：①平板劃線(xiàn)法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線(xiàn)，在

恒溫箱里培養(yǎng)。在線(xiàn)的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形

成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可

形成單個(gè)菌落。

【詳解】

A、在含哺乳動(dòng)物排泄物的土壤中有較多尿素且含腺酶的細(xì)菌數(shù)量更多，從有哺乳動(dòng)物排泄物的地方取樣，

獲得目的菌種幾率很高，A正確；

B、”分離以尿素為氮源的微生物"中以尿素作為唯一氮源，含胭酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)，其它微生

物在該培養(yǎng)基上因缺乏氮源而不能生長(zhǎng)，可用于分離含服酶的微生物，該實(shí)驗(yàn)中需用全營(yíng)養(yǎng)LB固體培養(yǎng)基

作對(duì)照，通過(guò)對(duì)照可以判斷選擇培養(yǎng)基的選擇作用，因此該培養(yǎng)基與分離大腸桿菌所用LB培養(yǎng)基成分有不

同，B正確；

C、在“分離以尿素為氮源的微生物”的實(shí)驗(yàn)中，配制好的尿素固體培養(yǎng)基加上封口膜后用高壓蒸汽滅菌方法

滅菌，冷卻后加入用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾的尿素溶液，C錯(cuò)誤；

D、有的微生物可能可以利用目的菌的分解產(chǎn)物從而在該培養(yǎng)基上生存，故在尿素固體培養(yǎng)基生長(zhǎng)的微生物

不一定都能分泌胭酶，還需進(jìn)一步篩選，D正確。

故選C。

14.某興趣小組從校園土壤取樣，進(jìn)行“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)''實(shí)驗(yàn)。小明從稀釋度為106培

養(yǎng)基中篩選出約120個(gè)菌落，而其他同學(xué)只篩選出約40個(gè)菌落。下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.小明出現(xiàn)這種結(jié)果的可能原因是和其他同學(xué)取樣的土壤不同

B.要證明培養(yǎng)基是否受到污染，可將小明配制的培養(yǎng)基不接種進(jìn)行培養(yǎng)

C.當(dāng)稀釋倍數(shù)太小時(shí)，可能由于菌落重疊導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏小

D.其他同學(xué)土樣的細(xì)菌懸液中分解尿素的細(xì)菌數(shù)量約為4x108個(gè)

【答案】D

【分析】

1、微生物常見(jiàn)的接種的方法（1）平板劃線(xiàn)法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線(xiàn)，

在恒溫箱里培養(yǎng)。在線(xiàn)的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能

形成單個(gè)菌落。（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)

后可形成單個(gè)菌落。

2、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)：（1）實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選①原理：人為提供有利于目的菌株

生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物

的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成服前的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源，缺乏胭酶的微

生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解

尿素的微生物②方法：能合成胭酶的細(xì)菌才能分解尿素，配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)的細(xì)

菌就是能分解尿素的細(xì)菌。

【詳解】

A、小明篩選出的菌落數(shù)明顯比其他同學(xué)多，出現(xiàn)這種結(jié)果的可能原因是和其他同學(xué)取樣的土壤不同，也有

可能是培養(yǎng)基混入其他氮源或培養(yǎng)基被污染，A正確；

B、要證明培養(yǎng)基是否受到污染，可將小明配制的培養(yǎng)基不加土樣進(jìn)行培養(yǎng)，即進(jìn)行空白對(duì)照，B正確；

C、當(dāng)稀釋倍數(shù)太小時(shí)，兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)菌連在一起時(shí)，培養(yǎng)基上看到的是一個(gè)菌落，可能會(huì)出現(xiàn)菌落重

疊而導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏小，C正確；

D、其他同學(xué)選出約40個(gè)菌落，所以土樣的細(xì)菌懸液中分解尿素的細(xì)菌數(shù)量約為40x106=4xIO7個(gè)，口錯(cuò)

誤。

故選D。

15.下圖所示為分離某種以尿素為氮源的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)過(guò)程，下列敘述錯(cuò)誤的是（）

0.1mL?OOO一給

各盛有各種濃度做三個(gè)培養(yǎng)皿

4.5mL

無(wú)菌水OOO-0

0.1mL

A.土樣從有哺乳動(dòng)物尿液的地方取，獲得目的菌種幾率很高

B.為驗(yàn)證尿素固體培養(yǎng)基具有選擇作用，可用牛肉膏蛋白腺固體培養(yǎng)基做對(duì)照

C.將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組37c恒溫培養(yǎng)24至48h時(shí)，需將平板倒置

D.在尿素固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌都是以尿素為氮源的細(xì)菌

【答案】D

【分析】

分離某種以尿素為氮源的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)過(guò)程：土壤取樣一樣品的稀釋一將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培

養(yǎng)基上一挑選能生長(zhǎng)的菌落一鑒定。

【詳解】

A、在含哺乳動(dòng)物排泄物的土壤中有較多含胭酶的細(xì)菌，因此土樣從有哺乳動(dòng)物排泄物的地方取，獲得目的

菌種幾率很高，A正確；

B、取不同稀釋倍數(shù)的土壤稀釋液各0.1mL,分別涂布于牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基、尿素固體培養(yǎng)基上，其

中牛肉膏蛋白陳固體培養(yǎng)基是對(duì)照，B正確；

C、將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組37c恒溫培養(yǎng)24至48h時(shí)，需將平板倒置，C正確：

D、在尿素固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌大多數(shù)是以尿素為氮源的細(xì)菌，還有一些利用空氣中氮的微生物等，D

錯(cuò)誤。

故選D。

16.某些土壤細(xì)菌可將尿素（CH4N2O）分解為CO?和NH3供植物吸收和利用，但分解產(chǎn)物CO2不能為該

菌提供營(yíng)養(yǎng)。若欲篩選出該種土壤細(xì)菌，僅考慮碳源和氮源，下列培養(yǎng)基設(shè)置合理的是（）

A.僅尿素B.尿素+葡萄糖

C.僅葡萄糖D.牛肉膏蛋白陳

【答案】B

【分析】

1、選擇培養(yǎng)基的概念是：在微生物學(xué)中，將允許特定微生物種類(lèi)生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生

長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱(chēng)為選擇培養(yǎng)基，由于分解尿素的細(xì)菌都能合成胭酶，服酶能催化尿素水解，因此在以尿素

為唯一氮源的培養(yǎng)基上，分解尿素的菌能以尿素為氮源生長(zhǎng)，而不能分解尿素的菌因缺乏氮源而無(wú)法生長(zhǎng)。

2、常用的接種微生物的方法有稀釋涂布平板法和平板劃線(xiàn)法，稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度

稀釋?zhuān)缓髮⒉煌♂尪鹊木和坎嫉焦腆w瓊脂培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，將聚集

在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，獲得由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的菌落。

3、尿素分解菌可以產(chǎn)生胭酶將尿素分解分解為氨，使pH升高，培養(yǎng)基中進(jìn)入酚紅指示劑后，氨可以使指

示劑呈紅色，據(jù)此可以用酚紅指示劑鑒別尿素分解菌。

【詳解】

根據(jù)題意：“某些土壤細(xì)菌可將尿素（CH4N2O）分解為CO2和N%供植物吸收和利用，但分解產(chǎn)物CO2

不能為該菌提供營(yíng)養(yǎng)”說(shuō)明該土壤細(xì)菌是異養(yǎng)型，需要含碳有機(jī)物作為碳源，以尿素作為氮源，B正確。

故選B。

17.某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3,供植物吸收和利用。下列關(guān)于土壤中分解尿素的細(xì)菌分離

和計(jì)數(shù)的敘述，正確的是（）

A.尿素為分解尿素的細(xì)菌提供碳源

B.配制培養(yǎng)基時(shí)，需要在酒精燈火焰旁操作

C.分離分解尿素的細(xì)菌使用的選擇培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基

D.涂布平板操作時(shí)，用接種環(huán)將菌夜均勻涂布在培養(yǎng)基表面

【答案】C

【分析】

配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌；分解尿素的細(xì)菌能合成胭酶將

尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變

紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。

【詳解】

A、尿素為分解尿素的細(xì)菌提供碳源和氮源，A錯(cuò)誤；

B、配制培養(yǎng)基時(shí)，不需要在酒精燈火焰旁操作，配制完成后再進(jìn)行滅菌，B錯(cuò)誤；

C、分離分解尿素的細(xì)菌時(shí)，使用的選擇培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，可在培養(yǎng)基的表面得到單個(gè)菌落，C正確;

D、涂布平板操作時(shí)，用涂布器將菌夜均勻涂布在培養(yǎng)基表面，D錯(cuò)誤。

故選C。

18.在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，為了提高農(nóng)作物的產(chǎn)量，人們會(huì)向農(nóng)田中施用大量的化學(xué)肥料。農(nóng)田中化肥殘留過(guò)多

會(huì)影響土壤的理化性質(zhì)。利用微生物分解殘留化肥的效果較好，為了篩選并保存高效分解尿素的微生物，

研究人員配制了兩份培養(yǎng)基如下表所示。下列相關(guān)敘述不正確的是（）

編號(hào)成分

甲KH2Po4、Na2HPO4.MgSCU、葡萄糖、尿素、瓊脂和蒸儲(chǔ)水

乙牛肉膏、蛋白陳、NaCl、瓊脂、蒸儲(chǔ)水

A.尿素分解菌可直接以尿素作為氮源

B.分離出尿素分解菌可用乙培養(yǎng)基進(jìn)行長(zhǎng)期保臧

C.可用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)土壤樣品中分解尿素的活菌數(shù)量

D.平板劃線(xiàn)法時(shí)，滅菌后的接種環(huán)需每次在上次劃線(xiàn)的末端劃線(xiàn)

【答案】B

【分析】

土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻倜?，胭酶在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起到催化

作用。篩選能分解尿素的細(xì)菌所利用的培養(yǎng)基中，尿素是唯一的氮源，尿素分解細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以

將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度升高。統(tǒng)計(jì)菌數(shù)目一般用稀釋涂布平板法。

【詳解】

A、尿素分解菌能合成胭酶，把尿素分解成氨，可直接以尿素作為氮源，A正確；

B、頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法，將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，低溫保藏。需要

長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法，B錯(cuò)誤；

C、稀釋涂布平板法可對(duì)活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，所以統(tǒng)計(jì)土壤樣品中分解尿素的活菌數(shù)量可用稀釋涂布平板法，C

正確；

D、平板劃線(xiàn)法時(shí)，滅菌后的接種環(huán)需每次在上次劃線(xiàn)的末端劃線(xiàn)，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線(xiàn)次數(shù)的增加而

逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落，D正確。

故選B。

19.分解尿素的微生物廣泛存在于農(nóng)田等土壤中，下列關(guān)于對(duì)分解尿素的微生物進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)的操作正

確的是（）

A.分解尿素的微生物含有腺酶，因此配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)選擇包括尿素在內(nèi)的多種物質(zhì)作為氮源

B.培養(yǎng)基中添加酚紅作為指示劑，培養(yǎng)后，培養(yǎng)基PH會(huì)降低，可使指示劑變紅色

C.在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時(shí)間，目的是檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格

D.計(jì)數(shù)時(shí)，在同一稀釋度下，任取3個(gè)平板對(duì)其中的菌落數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，取其均值即可

【答案】C

【分析】

1、由于細(xì)菌分解在尿素的過(guò)程中合成胭醐，麻能將尿素分解成氨，會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，pH升高，所以

可以用檢測(cè)pH的變化的方法來(lái)判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨,

pH升高，指示劑變紅。

2、檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)，可以看出采用的計(jì)數(shù)方法是稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)。用稀釋涂布平板法測(cè)定同

一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)時(shí)，在每一個(gè)梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30?300的進(jìn)行記

數(shù)，求起平均值，再通過(guò)計(jì)算得出土壤中細(xì)菌總數(shù)。

【詳解】

A、分解尿素的微生物含有胭酶，配制分解尿素的培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)以尿素作為唯一氮源，A錯(cuò)誤：

B、培養(yǎng)基中添加酚紅作為指示劑，培養(yǎng)后，細(xì)菌合成的胭酶將尿素分解為氨，培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升

高，可使指示劑變紅色，B錯(cuò)誤；

C、在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先培養(yǎng)一段時(shí)間，目的是檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，若滅

菌后的空白平板培養(yǎng)一段時(shí)間后沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基平板滅菌合格，C正確；

D、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。

故選C。

①制備土壤②在選擇培養(yǎng)③篩選、純化分④細(xì)菌分解尿索能

浸出液基中培養(yǎng)解尿素的細(xì)菌力的鑒定和比較

A.在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)注意防止雜菌污染

B.純化分解尿素的細(xì)菌的原理是獲得單細(xì)胞菌落

C.步驟③采用稀釋涂布平板法接種，并需向牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基中加入尿素

D.步驟④應(yīng)挑?、壑胁煌木浞謩e接種，比較細(xì)菌分解尿素的能力

【答案】C

【分析】

微生物常見(jiàn)的接種的方法

①平板劃線(xiàn)法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線(xiàn)，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線(xiàn)的開(kāi)始部

分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

【詳解】

A、微生物培養(yǎng)的關(guān)鍵是防止雜菌污染，在配制培養(yǎng)基時(shí)，也要主要防止雜菌污染，A正確；

B、步驟③純化分解尿素的原理是將聚集的細(xì)菌分散，可以獲得單細(xì)胞菌落，B正確；

C、要篩選出能高效分解尿素細(xì)菌，所選用的培養(yǎng)基要以尿素為唯一氮源,但牛肉膏和蛋白陳中都含有氮源，

因此步驟③所用的培養(yǎng)基中不能含有牛肉膏蛋白陳，C錯(cuò)誤；

D、步驟④挑?、壑胁煌N的菌落分別接種，比較細(xì)菌分解尿素的能力，D正確。

故選C。

21.分離土壤中尿素分解菌的實(shí)驗(yàn)操作中，無(wú)法分離得到尿素分解菌的原因最可能是（）

A.制備浸出液的土壤取自土壤的表層

B.涂布前涂布器未在酒精燈外焰上灼燒滅菌

C.使用牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基并在其中添加了尿素

D.未對(duì)土壤樣液進(jìn)行稀釋就進(jìn)行涂布培養(yǎng)

【答案】C

【分析】

從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株，該過(guò)程中需

要用尿素作為唯一碳源制成培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)。

【詳解】

A、制備浸出液的土壤取自土壤的表層與分離得到的尿素分解菌的單菌落有關(guān)，但影響不大，與題意不符，

A錯(cuò)誤；

B、涂布器未在酒精燈外焰上灼燒滅菌可能會(huì)造成污染，與分離得到的尿素分解菌的單菌落有關(guān)，但影響不

大，與題意不符，B錯(cuò)誤；

C、該培養(yǎng)基必須以尿素為唯一的氮源，不能使用牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基，該操作對(duì)實(shí)驗(yàn)影響最大，與題意相

符，C正確；

D、未對(duì)土壤樣液進(jìn)行稀釋就進(jìn)行涂布培養(yǎng)與分離得到的尿素分解菌的單菌落有關(guān)，但影響不大，與題意不

符，D錯(cuò)誤。

故選C。

22.某同學(xué)計(jì)劃用選擇培養(yǎng)基篩選尿素分解菌，關(guān)于實(shí)驗(yàn)方案下列說(shuō)法正確的是（）

A.進(jìn)行梯度稀釋的時(shí)候每次吸取的菌液量是隨意的

B.從燒杯取出涂布器在火焰上灼燒后要放回?zé)羞M(jìn)行冷卻

C.選擇培養(yǎng)基能允許特定種類(lèi)微生物生長(zhǎng)并抑制其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)

D.涂布不同稀釋倍數(shù)菌液的平板的培養(yǎng)時(shí)間應(yīng)隨菌液濃度的增大而增加

【答案】C

【分析】

1、篩選目的微生物時(shí)應(yīng)該使用只有目的微生物能夠生存，而其他微生物不能生存的選擇培養(yǎng)基；

2、基礎(chǔ)培養(yǎng)基是用人工方法配制而成的，專(zhuān)供微生物生長(zhǎng)繁殖的混合營(yíng)養(yǎng)物制品。

【詳解】

A、進(jìn)行梯度稀釋的時(shí)候每次吸取的菌液量是計(jì)算好的，A錯(cuò)誤；

B、從燒杯取出涂布器在火焰上灼燒后不可放回?zé)?，避免引燃杯中酒精，B錯(cuò)誤；

C、選擇培養(yǎng)基是指在微生物學(xué)中，將允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的

培養(yǎng)基，使用選擇培養(yǎng)基可以富集篩選目的微生物，c正確；

D、涂布不同稀釋倍數(shù)菌液的平板的培養(yǎng)時(shí)間應(yīng)該一致，D錯(cuò)誤。

故選C。

23.下列有關(guān)培養(yǎng)基和菌種鑒定的敘述正確的是（）

A.可利用固體培養(yǎng)基上菌落的特征來(lái)判斷和鑒別細(xì)菌的類(lèi)型

B.利用剛果紅培養(yǎng)基上是否形成透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌

C.在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑鑒定尿素分解菌

D.動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)常用的都是液體培養(yǎng)基

【答案】ABC

【分析】

菌落是指山一個(gè)微生物細(xì)胞或一堆同種細(xì)胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)繁殖到一定程度，形成肉眼

可見(jiàn)的子細(xì)胞群落。菌落形態(tài)包括菌落的大小、形狀、邊緣、光澤、質(zhì)地、顏色和透明程度等，每一種細(xì)

菌在一定條件下形成固定的菌落特征。不同種或同種在不同的培養(yǎng)條件卜，菌落特征是不同的。這些特征

對(duì)菌種識(shí)別、鑒定有一定意義。

【詳解】

A、每一種細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上形成固定的菌落特征，這些特征對(duì)菌種識(shí)別、鑒定有一定意義，A正確；

B、當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅-纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為

中心的透明圈，可通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌，B正確；

C、在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑可用來(lái)鑒定尿素分解菌，C正確；

D、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)常用液體培養(yǎng)基，植物細(xì)胞培養(yǎng)常用固體培養(yǎng)基，可以為植物生長(zhǎng)提供支撐作用，D錯(cuò)誤。

故選ABC。

24.如圖表示研究者從土壤中篩選分解尿素的細(xì)菌并計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)，據(jù)圖分析相關(guān)敘述正確的是（）

I號(hào)培養(yǎng)基

土壤樣品

II號(hào)培養(yǎng)基

A.①過(guò)程所用的培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源

B.配制培養(yǎng)基時(shí)，要先進(jìn)行滅菌再調(diào)解pH

C.③操作過(guò)程需在酒精燈火焰旁進(jìn)行

D.I號(hào)培養(yǎng)基和n號(hào)培養(yǎng)基均可用于尿素分解菌的計(jì)數(shù)

【答案】AC

【分析】

1.分離菌株的思路：（1）自然界中目的菌株的篩選①依據(jù)：根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋

找。②實(shí)例：PCR技術(shù)過(guò)程中用到的耐高溫的TaqDNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來(lái)的Taq細(xì)菌中提取

出來(lái)的。（2）實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選①原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度。

pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，

只有能合成服酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏服酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮

源而不能牛.長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微牛.物②方法：能合成服

酶的細(xì)菌才能分解尿素。配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌。

2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法：（1）稀釋涂布平板法（間接）①當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的'

個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。②通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)來(lái)推測(cè)樣品中大約含有的活菌數(shù)。（2）

利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)。

【詳解】

A、①過(guò)程表示富集培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌，所用的培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源，A正確；

B、配制培養(yǎng)基時(shí)，要先調(diào)pH再進(jìn)行滅菌，B錯(cuò)誤；

C、③操作是平板劃線(xiàn)法，需在酒精燈火焰旁進(jìn)行，C正確；

D、I號(hào)培養(yǎng)基用稀釋涂布平板法，可用于尿素分解菌的計(jì)數(shù)，［1號(hào)培養(yǎng)基是平板劃線(xiàn)法，無(wú)法對(duì)尿素分解

菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。

故選AC,

25.如圖為“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)''實(shí)驗(yàn)中樣品稀釋示意圖。據(jù)圖分析正確的是（）

mLQml

有無(wú)菌"（＞168個(gè)菌落

。175個(gè)菌落

。167個(gè)菌落

A.用移液管吸取菌液進(jìn)行梯度稀釋時(shí)，可用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻

B.對(duì)4號(hào)試管中的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)必然為5號(hào)試管的10倍

C.5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1.7x109

D.該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目要低

【答案】ACD

【分析】

從土壤中分離尿素分解菌的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株。圖中5

支試管為梯度稀釋?zhuān)詈蠼?jīng)稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù)。

【詳解】

A、用移液管稀釋菌液時(shí)，吹吸三次的目的是使菌液與水充分混勻，防止對(duì)后續(xù)的稀釋過(guò)程造成影響，A正

確；

B、4號(hào)中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，稀釋倍數(shù)比5號(hào)的低10倍，如果稀釋倍數(shù)適當(dāng)，得到的菌落平均數(shù)可能是

5號(hào)的10倍，B錯(cuò)誤；

C、分析圖解可知，菌液一共稀釋倍，每克土壤中的菌株數(shù)為（168+175+167）+3+0.1x106=17x109個(gè)，

C正確；

D、稀釋涂布平板得到的菌落可能存在兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌細(xì)胞長(zhǎng)成一個(gè)菌落，使該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往

往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目要低，D正確。

故選ACD。

26.下列有關(guān)“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)的敘述，不正確的是（）

A.實(shí)驗(yàn)中采集的土樣經(jīng)高溫滅菌后，可以用于制取土壤稀釋液

B.分離土壤中能分解尿素的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)選擇以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基

C.測(cè)定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

D.接種土壤微生物稀釋液時(shí)，平板劃線(xiàn)法通過(guò)連續(xù)劃線(xiàn)的操作使微生物均勻分布

【答案】ACD

【分析】

土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)：（1）分離原理：土壤中的尿素分解菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗?/p>

們能合成腺酶，版醐能將尿素分解成二氧化碳和氨。（2）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用稀釋涂

布平板法。（3）實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣一樣品的稀釋T微生物的培養(yǎng)與觀察T細(xì)菌的計(jì)數(shù)。

【詳解】

A、在分離土壤中的尿素分解菌實(shí)驗(yàn)中，采集的土樣經(jīng)高溫滅菌后，土樣中的微生物被殺死，再制取土壤稀

釋液接種并培養(yǎng)，不會(huì)得到菌落，A錯(cuò)誤；

B、尿素分解菌能分解尿素，篩選分解尿素的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，B正確；

C、測(cè)定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用活菌計(jì)數(shù)法，即稀釋涂布平板法，C錯(cuò)誤；

D、接種土壤微生物稀釋液時(shí)，稀釋涂布平板法是通過(guò)涂布器的操作使微生物均勻分布，D錯(cuò)誤。

故選ACD。

28.尿素分解菌產(chǎn)生的服酶能夠把尿素分解為氨使pH升高，為自身生命活動(dòng)提供能量，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是

()

A.培養(yǎng)尿素分解菌的關(guān)鍵是防止雜菌污染

B.培養(yǎng)基中加入尿素為唯一氮源的原因是只有尿素分解菌能分解尿素為生命活動(dòng)供能

C.尿素分解菌的代謝類(lèi)型是自養(yǎng)需氧型，所以實(shí)驗(yàn)中需要振蕩培養(yǎng)，為其提供更多的氧氣

D.稀釋涂布平板法和平板劃線(xiàn)法都能分離尿素分解菌獲得單菌落

【答案】BC

【分析】

土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，需要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，計(jì)數(shù)的關(guān)鍵是經(jīng)

梯度稀釋后的倍數(shù)要合適，計(jì)數(shù)時(shí)通常選擇菌落數(shù)在30-300之間的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

【詳解】

A、微生物培養(yǎng)的關(guān)鍵是防止菌污染，A正確；

B、培養(yǎng)基中加入尿素為唯一氮源的原因是只有尿素分解菌能分解尿素為生命活動(dòng)提供N源，B錯(cuò)誤：

C、尿素分解菌的代謝類(lèi)型是異養(yǎng)需氧型，C錯(cuò)誤：

D、稀釋涂布平板法和平板劃線(xiàn)法都能分離微生物獲得單菌落，D正確。

故選BCo

29.牛奶消毒及細(xì)菌檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的過(guò)程如下圖所示，下列相關(guān)敘述正確的是()

5mL生牛奶1mL1mL1mL1mL

培養(yǎng)

計(jì)數(shù)

牛肉音

無(wú)菌恒溫水浴鍋冷9mL9mL9mL翼旦暨

試管80ct15min為無(wú)菌水無(wú)菌水無(wú)菌水培養(yǎng)基

①②③

A.步驟①為巴氏消毒法，這種消毒法的特點(diǎn)是既能殺死牛奶中的微生物，又不破壞牛奶中的營(yíng)養(yǎng)成分

B.實(shí)驗(yàn)中對(duì)試管、培養(yǎng)皿的滅菌可采用的方法是干熱滅菌，這種方法適用的是能耐高溫且需要保持干燥的

物品

C.實(shí)驗(yàn)中的培養(yǎng)基適宜的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌

D.實(shí)驗(yàn)中采用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏高

【答案】ABC

【分析】

1、實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法：

①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層

灼燒，可以迅速?gòu)氐椎販缇关巴?，在接種過(guò)程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過(guò)火焰

灼燒來(lái)滅菌。

②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用

這種方法滅菌。

③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達(dá)到良好的滅菌效果，一般在壓

力為lOOkPa,溫度為1210c的條件下，維持15?30min。

2、分析題圖：圖中①為巴氏消毒的過(guò)程，②為梯度稀釋?zhuān)蹫橥坎计桨褰臃N。

【詳解】

A、步驟①為巴氏消毒法，是指70-75℃煮30分鐘或80℃煮15分鐘，使用這種方法對(duì)生鮮牛奶進(jìn)行消毒的

好處是牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞，A正確；

B、能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用干熱滅菌法，

B正確；

C、實(shí)驗(yàn)中的培養(yǎng)基一般用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌，C正確；

D、實(shí)驗(yàn)中采用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏低，原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)計(jì)數(shù)的

是一個(gè)菌落，D錯(cuò)誤。

故選ABCo

30.圓褐固氮菌和巨大芽抱桿菌組合可以將有機(jī)廚余垃圾迅速分解成水和二氧化碳，減輕環(huán)境污染。為制

備分解有機(jī)廚余垃圾的微生物菌劑，某科研小組對(duì)兩菌種進(jìn)行了最佳接種量比的探究實(shí)驗(yàn)，并得出下圖的

實(shí)驗(yàn)結(jié)果。下面敘述正確的是（）

■硼褐固氮菌

□巨大芽抱桿菌

2:1兩種菌種

按種量比例

氮菌泡桿菌

A.巨大芽抱桿菌生長(zhǎng)過(guò)程中需要氮源，圓褐固氮菌生長(zhǎng)過(guò)程中不需要氮源

B.要統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)量可采用平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法

C.可根據(jù)菌落形態(tài)特征區(qū)分圓褐固氮菌和巨大芽抱桿菌

D.該實(shí)驗(yàn)無(wú)法確定處理該類(lèi)廚余垃圾廢液時(shí)兩菌種的最佳接種量比例

【答案】CD

【分析】

1、各種微生物在一定條件下形成的菌落特征，如大小、形狀、邊緣、表面、質(zhì)地、顏色等，具有一定的穩(wěn)

定性，是衡量菌種純度、辨認(rèn)和鑒定菌種的重要依據(jù)。

2、微生物常用接種方法有平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法。稀釋涂布平板法可用于活菌計(jì)數(shù)。

【詳解】

A、微生物的生長(zhǎng)需要碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽等物質(zhì)，圓褐固氮菌生長(zhǎng)過(guò)程中也需要氮源，但是因?yàn)槠渚哂泄?/p>

氮能力，可以利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈矗恍枰谂囵B(yǎng)基中添加氮源，A錯(cuò)誤；

B、要統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)量可采用稀釋涂布平板法。劃線(xiàn)法不能用于計(jì)數(shù)只能用于分離純化，B錯(cuò)誤；

C