婦科再造丸對(duì)中波紫外線照射所致豚鼠皮膚色素沉著的抑制作用

婦科再造丸對(duì)中波紫外線照射所致豚鼠皮膚色素沉著的抑制作用【摘要】目的研究婦科再造丸對(duì)皮膚色素沉著的作用，并探討其部分作用機(jī)理。方法應(yīng)用白色豚鼠經(jīng)中波紫外線照射誘導(dǎo)皮膚色素沉著動(dòng)物模型，用HMB45為一抗，以免疫組化方法顯示表皮中的黑色素細(xì)胞，檢測(cè)黑色素細(xì)胞個(gè)數(shù)及其平均灰度值。結(jié)果婦科再造丸高、中、低3個(gè)劑量組與模型組比較，均能減少黑色素細(xì)胞個(gè)數(shù)并增加其平均灰度值。結(jié)論婦科再造丸對(duì)黑色素細(xì)胞增殖有一定的抑制作用。

【關(guān)鍵詞】婦科再造丸;中波紫外線;色素沉著;黑色素細(xì)胞

Abstract：ObjectiveTostudytheinhibitoryeffectofFu-Ke-Zai-ZaoPillonpigmentationinducedbyUVBandinvestigateitsmechanism.MethodsThechangesofnumberandmeangradationofmelanocytesinducedbyUVBwereobservedintheexperimentalhypermelanosismodel(whiteguineapig).ResultsDecreasednumberandincreasedmeangradationofmelanocyteswerefoundinthreegroupsofFu-Ke-Zai-ZaoPillcomparedwithmodelgroup().ConclusionFu-Ke-Zai-ZaoPillcaninhibitmelanocyticproliferation，whichmaybemakeitvalidintreatingskinpigmentation.

Keywords：Fu-Ke-Zai-ZaoPills;UVB;Pigmentation;Melanocyte

皮膚色素沉著是臨床常見疾病，發(fā)病人群廣泛，尤其對(duì)于女性，在影響容貌的同時(shí)還會(huì)造成心理壓力。其發(fā)病機(jī)制主要是由于皮膚中黑色素細(xì)胞增多、合成黑色素能力增強(qiáng)［1］。婦科再造丸為一復(fù)方中藥制劑，由當(dāng)歸、熟地、白芍等四十余味中藥材組成，臨床應(yīng)用已有幾十年之久。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立中波紫外線誘導(dǎo)豚鼠皮膚色素沉著模型，觀察了婦科再造丸對(duì)黑色素細(xì)胞的作用，旨在為該藥的進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1器材與方法1動(dòng)物雌性白色豚鼠，體重g，合格證號(hào)：SCXK2002-0001，由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2試劑婦科再造丸丸劑，維生素C，維生素E膠囊，黑素瘤抗體試劑盒。3儀器

SS-01A型紫外線光療儀〔光譜nm，輻照強(qiáng)度mW/cm2，上海希格瑪高技術(shù)有限公司〕，Biomias99圖像分析系統(tǒng)。4方法［2，3］

豚鼠48只，按體重隨機(jī)分為6組，每組8只：婦科再造丸高、中、低3個(gè)劑量組，陽(yáng)性對(duì)照組［4］，正常對(duì)照組及模型組(蒸餾水6ml·kg-1·d-1)。

除正常對(duì)照組外，其余5組用烏拉坦腹腔注射麻醉，剪凈背部中心被毛，使用紫外光療儀照射每只豚鼠背部中心30min，照射總量達(dá)到5700mJ/cm2。照射次日開始灌胃給藥，連續(xù)3周。3周后處死動(dòng)物，取豚鼠照射區(qū)域去毛皮膚一塊，正常組豚鼠取相應(yīng)區(qū)域去毛皮膚一塊，中性福爾馬林固定。常規(guī)石蠟包埋切片，用黑素瘤鼠抗人單克隆抗體(HMB45)為一抗，采用免疫組化方法顯示表皮中的黑色素細(xì)胞。5檢測(cè)指標(biāo)［5］

光鏡觀察HMB45染色陽(yáng)性的黑色素細(xì)胞密度及著色深淺，并通過(guò)Biomias99圖象分析系統(tǒng)，檢測(cè)切片上黑色素細(xì)胞個(gè)數(shù)及平均灰度值。采用Excel2003統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行組間T-test分析。

2結(jié)果

光鏡觀察正常對(duì)照組豚鼠表皮的基底層細(xì)胞間，可見到較少的HMB45標(biāo)記陽(yáng)性的黑色素細(xì)胞，著色不是很深。模型組HMB45標(biāo)記陽(yáng)性的黑色素細(xì)胞明顯增多，成簇分布于表皮基底層細(xì)胞間，并且著色很深，呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)。婦科再造丸3個(gè)劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組中黑色素細(xì)胞數(shù)均有減少，著色變淺，其中以婦科再造丸高劑量組尤為明顯，見圖3。

對(duì)豚鼠皮膚中黑色素細(xì)胞個(gè)數(shù)及平均灰度的作用結(jié)果顯示，正常對(duì)照組豚鼠表皮基底層細(xì)胞間，HMB45染色陽(yáng)性的黑色素細(xì)胞較少，著色也較淺；而模型組豚鼠表皮基底層細(xì)胞間HMB45染色陽(yáng)性的黑色素細(xì)胞量多密集，并且著色較深。灰度反映物體顏色的深淺度，顏色越淺，灰度值越高。與模型組比較，婦科再造丸高、中、低3個(gè)劑量組均能不同程度的減少黑色素細(xì)胞個(gè)數(shù)并增加其平均灰度值。結(jié)果見表1。表1黑色素細(xì)胞個(gè)數(shù)及平均灰度

3討論

色素沉著誘因很多，如長(zhǎng)期日曬、遺傳、內(nèi)分泌失調(diào)等。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，中波紫外線能引起黑色素細(xì)胞數(shù)目增多、黑色素合成增加等細(xì)胞功能狀態(tài)的變化，是引起皮膚色素沉著增加的根本原因［6］。在黑色素的生成中，酪氨酸酶起著至關(guān)重要的作用，是黑色素合成過(guò)程中的限速酶，其表達(dá)和活性決定著黑色素生成的量和速度。因此如果酪氨酸酶的活性受到抑制，就能使黑色素的合成減少，就能在一定程度上預(yù)防和治療色素沉著。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，婦科再造丸組方中的當(dāng)歸、熟地、黃芪、白芍、川芎、益母草、茯苓及山藥等多味中藥均有抑制酪氨酸酶活性的作用［4］。因此我們建立了UVB誘導(dǎo)豚鼠皮膚色素沉著模型，研究了婦科再造丸對(duì)黑色素細(xì)胞的作用。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，婦科再造丸各劑量組均能減少HMB45標(biāo)記陽(yáng)性的黑色素細(xì)胞個(gè)數(shù)并增加其平均灰度值，其中以婦科再造丸高劑量組效果最好。提示婦科再造丸對(duì)UVB照射引起的色素沉著有一定的治療作用，其作用機(jī)制可能與組方中藥物抑制酪氨酸酶活性有關(guān)。

【參考文獻(xiàn)】

［1］HalabanR,TyrrellL,LongleyJ,etal.PigmentationandprolifertionofhumanmelanocytesandtheeffectsofmelanocytestimulatinghormoneandultravioletBlight［J］.AnnNyAcadSci.1993,680:290.

［2］ImokawaG,KawaiM,MishimaY,etal.DifferentialanalysisofexperimentalhypermelanosisinducedbyUVB,PUVA,andallergiccontactdermatitisusingabrownishguineapigmodel［J］.ArchDermatolRes,1986,278:352.

［3］李洪武，朱文元，夏明玉.白術(shù)等對(duì)UVB誘導(dǎo)豚鼠皮膚色素沉著的抑制作用［J］.中華皮膚科雜志，2000，33：386.

［4］王福興,陳前進(jìn).具抑制酪氨酸酶活性祛斑增白藥物［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，1999，19:479.

［5］過(guò)偉峰，徐立，項(xiàng)曉人，等.建立小鼠黃褐斑實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的初步研究［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)