基因工程的基本操作程序使用修改

基因工程的基本操作程序使用修改第1頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月基因工程培育抗蟲棉的簡要過程：提取棉花細(xì)胞(含抗蟲基因)蘇云金芽孢桿菌抗蟲基因與運載體DNA拼接導(dǎo)入普通棉花(無抗蟲特性)棉花植株(有抗蟲特性)第2頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月基因工程的基本操作程序（1）目的基因的獲?。?）（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（4）目的基因的檢測與鑒定基因表達(dá)載體的構(gòu)建第3頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月一、目的基因的獲取1、目的基因：主要是編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因也可以是一些具有調(diào)控作用的因子第4頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月補：原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游與RNA聚合酶結(jié)合位點啟動子終止子RNA聚合酶能夠識別調(diào)控序列中的結(jié)合位點，并與其結(jié)合。轉(zhuǎn)錄開始后，RNA聚合酶沿DNA分子移動，并以DNA分子的一條鏈為模板合成RNA。轉(zhuǎn)錄完畢后，RNA鏈釋放出來，緊接著RNA聚合酶也從DNA模板鏈上脫落下來。第5頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月①不能轉(zhuǎn)錄為信使RNA，不能編碼蛋白質(zhì)。：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的信使RNA，能編碼蛋白質(zhì)編碼區(qū)非編碼區(qū)原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)②有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核苷酸序列非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游啟動子終止子與RNA聚合酶結(jié)合位點啟動子、終止子一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片斷，基因的首端，是RNA聚合酶識別和結(jié)合部位，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄——啟動子一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片斷，基因的尾端，使轉(zhuǎn)錄終止——終止子第6頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月補：真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結(jié)合位點內(nèi)含子外顯子能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子啟動子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游內(nèi)含子：外顯子：第7頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列：有調(diào)控作用的核苷酸序列，包括位于編碼區(qū)上游的RNA

聚合酶結(jié)合位點。第8頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月結(jié)構(gòu)基因外顯子內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄、加工修飾mRNA第9頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月原核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點編碼區(qū)是_____的編碼區(qū)是間隔的、_____的相同點都由能夠編碼蛋白質(zhì)的______和具有調(diào)控作用的______

區(qū)組成的原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較思考編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長嗎？連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)非編碼第10頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月一、目的基因的獲取1、目的基因：2、獲取方法：（1）從基因文庫中獲取目的基因；（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因；（3）人工合成：通過DNA合成儀用化學(xué)方法直接合成主要是編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因也可以是一些具有調(diào)控作用的因子第11頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）從基因文庫中獲取目的基因1.什么叫基因文庫？將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫?；蛭膸?/p>

基因組文庫部分基因文庫（cDNA文庫）第12頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月基因組文庫的構(gòu)建模式圖注意：基因文庫中不是直接保管相應(yīng)基因，而是保存受體菌，菌中含基因。第13頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月基因組DNA文庫cDNA文庫基因組DNA文庫與cDNA文庫的比較第14頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月基因組文庫與部分基因文庫的關(guān)系第15頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月基因組文庫和部分基因文庫的比較文庫類型cDNA文庫基因組文庫文庫大小基因中啟動子基因中內(nèi)含子基因多少物種間基因交流小大無有無有某種生物的部分基因某種生物的全部基因可以部分基因可以第16頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月思考：如何從基因文庫中得到所需要的基因？依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。如：根據(jù)基因的核苷酸序列；基因的功能；基因在染色體上的位置；基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA；

基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性。第17頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因第18頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因第19頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月1234522557294時間（min）溫度（℃）PCR反應(yīng)PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點適溫延伸3高溫變性1低溫退火2重復(fù)1~3步25~30輪目的DNA片段擴(kuò)增100萬倍以上DNA雙螺旋DNA單鏈與引物復(fù)性DNA變性形成2條單鏈子鏈延伸DNA加倍第20頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月模板DNA95℃第21頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點50℃引物1引物2DNA引物第22頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點引物1引物2DNA引物72℃Taq酶Taq酶第23頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點72℃第1輪結(jié)束第2輪開始第24頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點95℃50℃72℃TaqTaqTaqTaq第25頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點72℃第2輪結(jié)束第26頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月PCR的基本反應(yīng)步驟變性90-95?C延伸70-75?C退火55-60?CPCR總結(jié)：第27頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月第28頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月Taq

DNA聚合酶（thermusaquaticus)酶活性(%)溫度(℃)40506070809010010080604020第29頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月①概念：PCR全稱為_______________，是一項在生物____復(fù)制___________的核酸合成技術(shù)。③前提條件：_______________________；原料：___________、___________、__________________、________________。②原理：__________④方式：以_____方式擴(kuò)增，即____（n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）⑤結(jié)果：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外特定DNA片段DNA復(fù)制已知基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸DNA引物熱穩(wěn)定DNA聚合酶指數(shù)2n使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴(kuò)增模板DNA第30頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月

過程：變性、退火、延伸三步曲變性：加熱至90～95℃雙鏈DNA解鏈成為單鏈DNA退火：冷卻至55～60℃部分引物與模板的單鏈DNA的特定互補部位相配對和結(jié)合延伸：加熱至70～75℃以目的基因為模板，合成互補的新DNA鏈變性退火延伸第31頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月⑥過程：a、DNA變性（90℃-95℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，_____斷裂，形成___________b、退火（復(fù)性55℃-65℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，從引物的5′端→3′端延伸，合成與模板互補的________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈第32頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月思考？1個DNA分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增,循環(huán)4次，理論上至少需要幾個引物？2×（2n-1）(n為循環(huán)次數(shù))（24-1）×2=30第33頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月PCR技術(shù)擴(kuò)增與DNA復(fù)制的比較PCR技術(shù)DNA復(fù)制相同點原理原料條件不同點解旋方式場所酶結(jié)果堿基互補配對四種脫氧核苷酸模板、能量、酶DNA在高溫下變性解旋解旋酶催化體外復(fù)制細(xì)胞核內(nèi)熱穩(wěn)定的DNA聚合酶細(xì)胞內(nèi)的DNA聚合酶大量的DNA片段形成整個DNA分子第34頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月

根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測出相應(yīng)的mRNA序列，然后按照堿基互補配對原則，推測出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列推測推測目的基因化學(xué)合成（三）化學(xué)方法人工合成目的基因第35頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月人工合成(基因比較小)DNA合成儀第36頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月從基因文庫中獲取利用PCR技術(shù)擴(kuò)增利用化學(xué)方法人工合成歸納：獲取目的基因的方法第37頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月用一定的_________切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切口，露出____________。用_____________切斷目的基因，使其產(chǎn)生_________________。將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的______處，再加入適量___________，形成了一個重組

DNA分子（重組質(zhì)粒）限制酶黏性末端同一種限制酶相同的黏性末端切口DNA連接酶1.過程:二、構(gòu)建表達(dá)載體——核心第38頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月質(zhì)粒DNA分子限制酶處理兩個切口獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種一個切口兩個黏性末端復(fù)制原點+啟動子+目的基因+終止子+標(biāo)記基因過程:第39頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月2.基因表達(dá)載體的目的（1）使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并可以遺傳給下一代；（2）使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。第40頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月科學(xué)家在培育抗蟲棉時，經(jīng)歷了多次失敗，才獲得成功。起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達(dá)。然后在插入抗蟲基因的質(zhì)粒中插入啟動子(抗蟲基因首端)，導(dǎo)入棉花受精卵，長成的棉花植株還是沒有抗蟲能力。科學(xué)家又在有啟動子、抗蟲基因的質(zhì)粒中插入終止子(抗蟲基因末端)，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長的植株，有了抗蟲能力。資料:第41頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月思考：作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？（P15）

不可以。因為目的基因在表達(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。

第42頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月（1）生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自身基因的啟動子才能比較有利于基因的表達(dá)；（2）通過cDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄；（3）目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；（4）為了增強目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強子（增強基因啟動子工作效率的順式作用序列，能夠在相對于啟動子的任何方向和任何位置(上游或下游)上都發(fā)揮作用。）等；（5）有時需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么部位，往往要加上可以標(biāo)識存在部位的基因（或做成目的基因與標(biāo)識基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等。第43頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月3.基因表達(dá)載體的組成：它們有什么作用？a、目的基因b、啟動子c、終止子d、標(biāo)記基因第44頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月調(diào)節(jié)基因操縱基因結(jié)構(gòu)基因RNA聚合酶半乳糖苷酶酶酶

RNA聚合酶啟動子RNA聚合酶啟動子：位于基因首端的一段特殊的DNA片斷，它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得蛋白質(zhì)。第45頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月思考1：

表達(dá)載體為什么一定要有啟動子？（1）生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自身基因的啟動子才能有利于基因的表達(dá)；（2）通過cDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼序列導(dǎo)入受體細(xì)胞無法轉(zhuǎn)錄。第46頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月思考2：終止子的作用是什么？

終止子是位于基因尾端的一段特殊的DNA片斷，能終止mRNA的轉(zhuǎn)錄。是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來。思考3：標(biāo)記基因有什么作用？第47頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月①載體與表達(dá)載體的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點兩部分DNA片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動子、終止子三部分結(jié)構(gòu)。注意②用到的工具酶：既用到限制酶切割載體，又用到DNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵。③啟動子、終止子對于目的基因表達(dá)必不可少。④目的基因不能單獨進(jìn)入受體細(xì)胞，必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。第48頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月基因工程技術(shù)路線第49頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞常用的受體細(xì)胞：有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動植物細(xì)胞等。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的原理：借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。（一）轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入_________內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持_____和_____的過程受體細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)第50頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）方法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法——顯微注射法——感受態(tài)細(xì)胞第51頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月1.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法第52頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月（1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法①特點：

易感染雙子葉植物和裸子植物，對大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力②原理：

Ti質(zhì)粒上的T-DNA可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。第53頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月③轉(zhuǎn)化過程:Ti質(zhì)粒目的基因構(gòu)建表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞插入植物細(xì)胞染色DNA表達(dá)新性狀轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌第54頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月基因槍法又稱微彈轟擊法，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體DNA打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。（2）基因槍法適用于單子葉植物第55頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月（3）花粉通道法植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管還未愈合前，剪去柱頭，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞。適用于被子植物第56頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月胚珠花藥花絲柱頭花柱子房壁子房雄蕊雌蕊第57頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月2.將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞（1）方法：顯微注射法（將基因表達(dá)載體提純，用顯微儀注射到受精卵中）思考：為什么要用受精卵而不用體細(xì)胞？第58頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）操作程序:提純含目的基因表達(dá)載體取受精卵顯微注射移植到子宮受精卵發(fā)育新性狀動物第59頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月常用法：Ca2+處理常用菌：大腸桿菌微生物作受體細(xì)胞原因：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對少過程：Ca2+處理大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA3.將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞思考：為什么要用Ca2+處理受體細(xì)胞？用Ca2＋處理，增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性第60頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月受體生物植物動物微生物受體細(xì)胞導(dǎo)入方法受精卵體細(xì)胞受精卵細(xì)胞/個體農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法顯微注射技術(shù)用Ca2+處理成感受態(tài)細(xì)胞采用基因工程的方法培育抗蟲棉，下列導(dǎo)入目的基因的作法正確的是（）

A.將毒素蛋白注射到受精卵中

B.將編碼毒素蛋白的DNA序列，與質(zhì)粒重組，導(dǎo)入細(xì)菌，用該細(xì)菌感染棉的體細(xì)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng)

C.將編碼毒素蛋白的DNA序列，與質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精卵

D.將編碼毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中BC第61頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月四、目的基因的檢測與鑒定檢測:是否插入目的基因是否轉(zhuǎn)錄是否翻譯鑒定:分子水平鑒定個體生物學(xué)水平鑒定第62頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月1、檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因①首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA；（1）方法:DNA分子雜交（2）過程:②將含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作標(biāo)記,以此做探針；③使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交,若顯示出雜交帶,表明染色體已插入染色體DNA中。（一）檢測第63頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月基因探針：是一段帶有檢測標(biāo)記，且序列已知的，與目的基因互補的核酸序列。基因探針通過分子雜交與目的基因結(jié)合，產(chǎn)生雜交信號，能從浩翰的基因組中把目的基因顯示出來。第64頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月DNA分子雜交示意圖采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的DNA分子的單鏈放在一起，如果這兩個單鏈具有互補的堿基序列，那么，互補的堿基序列就會結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。第65頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）鑒定（個體生物學(xué)水平）2、檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA3、檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等①方法:分子雜交方法:抗原-抗體雜交②過程:用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的mRNA雜交,若出現(xiàn)雜交帶,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNA。第66頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月提?。?）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)方法——抗原-抗體雜交蘇云金桿菌Bt毒素蛋白將Bt毒蛋白注射小鼠體內(nèi)從小鼠血管抽出血液分離出抗Bt毒素的抗體抗體蛋白質(zhì)

出現(xiàn)雜交帶脫分化組織培養(yǎng)第67頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月若不能表達(dá)，要對抗蟲基因再進(jìn)行修飾。怎樣檢驗抗蟲基因在棉細(xì)胞內(nèi)是否表達(dá)呢？沒有抗蟲基因的棉植株有抗蟲基因的棉植株棉鈴蟲蟲沒有死蟲被殺死沒有表達(dá)目的基因表達(dá)第68頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月類型步驟檢測內(nèi)容方法結(jié)果顯示分子檢測第一步目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞DNA分子雜交（DNA和DNA之間）是否成功顯示出雜交帶第二步目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA分子雜交技術(shù)（DNA和mRNA之間）是否成功顯示出雜交帶第三步目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)抗原—抗體雜交是否成功顯示出雜交帶個體水平鑒定

包括抗蟲、抗病的接種實驗，以確定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的活性比較，以確定功能是否相同等。目的基因的表達(dá)和檢測第69頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月提示：

①DNA分子雜交技術(shù)首先提取受體細(xì)胞中的DNA，然后高溫解成單鏈，再與同位素標(biāo)記的DNA探針雜交；

②抗原－抗體雜交所用到的抗體是用表達(dá)出的蛋白質(zhì)注射動物進(jìn)行免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并提取出而來的。第70頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月第71頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月第72頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月歸納:基因工程的基本操作程序獲取目的基因從基因文庫利用PCR化學(xué)方法人工合成構(gòu)建基因表達(dá)載體目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因?qū)⒛康幕驅(qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化法（微生物）、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（植物）、顯微注射法（動物）目的基因的檢測與鑒定檢測：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯第73頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月為什么要構(gòu)建基因文庫？直接從含有目的基因的生物體內(nèi)提取不行嗎？構(gòu)建基因文庫是獲取目的基因的方法之一，并不是唯一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通過PCR方式從含有該基因的生物的DNA中，直接獲得，也可以通過反轉(zhuǎn)錄，用PCR方式從mRNA中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想從一種生物體內(nèi)獲得許多基因，或者想知道這種生物與另一種生物之間有多少基因不同，或者想知道一種生物在個體發(fā)育的不同階段表達(dá)的基因有什么不同，或者想得到一種生物的全基因組序列，往往就需要構(gòu)建基因文庫。第74頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。尋根問底：第75頁，課件共82頁，創(chuàng)作于2023年2月根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機理,你能分析出農(nóng)桿菌不能將目的基因不能導(dǎo)入單子