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文檔簡(jiǎn)介
2.2動(dòng)物細(xì)胞工程2.2.1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)知識(shí)體系1.簡(jiǎn)述動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)及條件。(重點(diǎn))2.舉例論證動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用及意義。3.簡(jiǎn)述動(dòng)物核移植的過程及意義。(重點(diǎn)、難點(diǎn))01探新知自主梳理02破重難講練互動(dòng)03固雙基當(dāng)堂達(dá)標(biāo)04課后鞏固提升一、動(dòng)物細(xì)胞工程1.常用技術(shù)手段:
、
、動(dòng)物細(xì)胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體等。2.技術(shù)基礎(chǔ):
。二、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)1.概念從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成
,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞
和
。2.原理:細(xì)胞增殖。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖胰蛋白酶膠原蛋白酶貼壁生長(zhǎng)接觸抑制胰蛋白酶10~50核型4.條件微量元素5.應(yīng)用(1)生產(chǎn)生物制品:如
疫苗、干擾素、
等。(2)應(yīng)用于基因工程:動(dòng)物細(xì)胞是基因工程技術(shù)中常用的
,離不開動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。(3)檢測(cè)
,判斷某種物質(zhì)的毒性。(4)用于
等方面的研究,如篩選抗癌藥物等。病毒單克隆抗體受體細(xì)胞有毒物質(zhì)生理、病理、藥理三、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物1.相關(guān)概念(1)供體:動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的
。(2)受體:去掉細(xì)胞核的
。(3)結(jié)果:形成重組胚胎,發(fā)育成
。2.種類:胚胎細(xì)胞核移植和
。3.原理:動(dòng)物細(xì)胞核具有
、細(xì)胞膜具有一定的
。細(xì)胞核卵母細(xì)胞動(dòng)物個(gè)體體細(xì)胞核移植全能性流動(dòng)性4.過程5.應(yīng)用(1)畜牧生產(chǎn)方面:加速家畜
進(jìn)程,促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育。(2)保護(hù)瀕危物種方面:保護(hù)
,增加瀕危動(dòng)物的存活數(shù)量。(3)醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域①轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物作為
,生產(chǎn)珍貴的
。②轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物的細(xì)胞、組織和器官可作為
的供體。③人的核移植胚胎干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)分化,形成相應(yīng)的組織、器官后,可用于
的移植。(4)了解胚胎發(fā)育及衰老過程。(5)用克隆動(dòng)物做
,使人們更好地追蹤研究疾病的發(fā)展過程和治療疾病。遺傳改良瀕危物種生物反應(yīng)器醫(yī)用蛋白異種移植組織器官疾病模型6.存在問題(1)體細(xì)胞核移植技術(shù)的
非常低。(2)克隆動(dòng)物存在健康問題,表現(xiàn)出
缺陷、遺傳缺陷等。(3)克隆動(dòng)物食品的
問題存在爭(zhēng)議。成功率生理安全性
[預(yù)習(xí)小測(cè)]1.想一想動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)為什么選胚胎或幼齡動(dòng)物的細(xì)胞進(jìn)行?提示:胚胎或幼齡動(dòng)物的細(xì)胞分裂旺盛,細(xì)胞生命力強(qiáng)。2.判一判(1)多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中其培養(yǎng)液所需的適宜pH為~。()(2)培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的第一代(即第一次細(xì)胞增殖)被稱為原代培養(yǎng)。()(3)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)要定期更換培養(yǎng)液,其目的是便于清除代謝產(chǎn)物,防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成傷害。()(4)克隆植物和克隆動(dòng)物都只具備一個(gè)親本的遺傳特性。()(5)動(dòng)物體細(xì)胞核移植的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植。()(6)選擇MⅡ期的卵母細(xì)胞作為核移植的受體細(xì)胞的主要原因是該細(xì)胞大,顯微操作方便。()××√×√×(1)以上過程的原理為____________。(2)用____________處理組織塊,可使細(xì)胞分散開,目的是使細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸。不能使用____________分散細(xì)胞,因?yàn)槎鄶?shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為~,此pH下____________不具有活性。(3)劃分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)是以_____界,即配制細(xì)胞懸液后轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中的第一次培養(yǎng)為原代培養(yǎng),分瓶后的培養(yǎng)(無論分瓶多少次)均為傳代培養(yǎng)。(4)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),通常需加入____________,其中含有多種維持細(xì)胞正常代謝和生長(zhǎng)的物質(zhì),如蛋白質(zhì)、氨基酸、未知的促生長(zhǎng)因子等。提示:(1)細(xì)胞增殖(2)胰蛋白酶胃蛋白酶胃蛋白酶(3)分瓶
(4)血清、血漿1.相關(guān)概念的辨析(1)細(xì)胞貼壁和接觸抑制①細(xì)胞貼壁:將細(xì)胞懸液放入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),置于適宜環(huán)境中培養(yǎng),懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上,稱為細(xì)胞貼壁。②接觸抑制:當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。
(2)原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng):區(qū)分兩種“培養(yǎng)”的關(guān)鍵是看用胰蛋白酶處理的對(duì)象。①第一次:用胰蛋白酶對(duì)剪碎的動(dòng)物組織進(jìn)行處理,使其分散成單個(gè)細(xì)胞后進(jìn)行培養(yǎng),為原代培養(yǎng)。②第二次:細(xì)胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)接觸抑制,用胰蛋白酶使其從瓶壁上脫離下來,然后,將其分散到多個(gè)培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),為傳代培養(yǎng)。2.培養(yǎng)條件的分析(1)添加血清、血漿的作用:血清和血漿中含有多種維持細(xì)胞正常代謝和生長(zhǎng)的物質(zhì),如蛋白質(zhì)、氨基酸、未知的促生長(zhǎng)因子等。細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),一般需添加10%~20%的血清或血漿。(2)氣體環(huán)境:CO2調(diào)節(jié)培養(yǎng)液pH,O2維持細(xì)胞有氧呼吸。3.植物組織培養(yǎng)與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)別原理植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖培養(yǎng)基固體或半固體培養(yǎng)基,包括礦質(zhì)元素、蔗糖、維生素、瓊脂、植物激素等液體培養(yǎng)基,包括無機(jī)鹽、葡萄糖、維生素、氨基酸、動(dòng)物血清等細(xì)胞來源離體植物器官、組織或細(xì)胞胚胎或幼齡動(dòng)物組織、器官過程脫分化、再分化原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)結(jié)果獲得新個(gè)體或細(xì)胞產(chǎn)品大量產(chǎn)生細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)區(qū)別用途①快速繁殖名貴花卉和果樹;②培養(yǎng)無病毒植株、轉(zhuǎn)基因植物;③大規(guī)模生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)品,如藥物、食品添加劑、香料、色素等①生產(chǎn)蛋白質(zhì)制品,如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等;②檢測(cè)有毒物質(zhì);③研究生理、藥理、病理相同點(diǎn)①都需要人工條件下的無菌、無毒操作,無菌培養(yǎng);②都進(jìn)行有絲分裂[易錯(cuò)警示](1)培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)沒有脫分化的過程,因高度分化的動(dòng)物細(xì)胞發(fā)育潛能變窄,失去了發(fā)育成完整個(gè)體的能力。(2)不是所有的細(xì)胞增殖過程中都存在接觸抑制。例如,癌細(xì)胞增殖時(shí)不存在接觸抑制,所以在培養(yǎng)瓶中可以形成多層細(xì)胞。1.下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述,不正確的是(
)A.傳代培養(yǎng)時(shí)需要用胰蛋白酶處理貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞B.細(xì)胞的癌變發(fā)生于原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡過程中C.癌細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中不會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一般需要使用CO2培養(yǎng)箱解析:由原代培養(yǎng)換瓶進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí),需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,A項(xiàng)正確;細(xì)胞的癌變一般發(fā)生于50代后的細(xì)胞培養(yǎng)過程中,B項(xiàng)錯(cuò)誤;癌細(xì)胞膜上糖蛋白減少,細(xì)胞黏著性降低,失去了接觸抑制,容易分散和轉(zhuǎn)移,C項(xiàng)正確;動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的場(chǎng)所是CO2培養(yǎng)箱,培養(yǎng)箱內(nèi)含有95%的空氣和5%的CO2的混合氣體,為動(dòng)物細(xì)胞提供適宜的氣體環(huán)境,D項(xiàng)正確。答案:B2.如圖所示是某動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),培養(yǎng)液中活細(xì)胞和死亡細(xì)胞密度統(tǒng)計(jì)結(jié)果,下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(
)A.實(shí)驗(yàn)中要控制胰蛋白酶溶液濃度和處理時(shí)間,以免損傷細(xì)胞B.培養(yǎng)液中應(yīng)適當(dāng)加入青霉素、鏈霉素,以避免雜菌污染C.曲線bc段變化的主要原因是培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不足及有害代謝產(chǎn)物積累等D.培養(yǎng)至第6d時(shí),新產(chǎn)生的細(xì)胞數(shù)等于死細(xì)胞數(shù)解析:實(shí)驗(yàn)中要控制胰蛋白酶溶液濃度和處理時(shí)間,以免損傷細(xì)胞,A正確;培養(yǎng)液中應(yīng)適當(dāng)加入青霉素、鏈霉素等一定量的抗生素,以避免雜菌污染,B正確;曲線bc段表示活細(xì)胞密度減少,而此時(shí)間段內(nèi)死細(xì)胞密度增加,產(chǎn)生這種變化的主要原因是培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不足及有害代謝產(chǎn)物積累等,C正確;培養(yǎng)至第6d時(shí),活細(xì)胞數(shù)等于死細(xì)胞數(shù),D錯(cuò)誤。答案:D(1)以上過程的原理是_________________________________________________________________________________________________________________。(2)由于控制毛色的基因位于細(xì)胞核中,因此“多利”的面部毛色應(yīng)與________相同,即為________色。(3)若甲、乙兩只綿羊分別為雄性、雌性個(gè)體,則克隆羊“多利”的性別為________。提示:(1)動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性(2)核供體白(3)雄性1.核移植時(shí)供體和受體的選擇(1)供體:一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞,因?yàn)?0代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型,保證了供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)。(2)受體:減Ⅱ中期的卵母細(xì)胞。一方面細(xì)胞大,易于操作;卵黃多,營(yíng)養(yǎng)豐富,為發(fā)育提供充足的營(yíng)養(yǎng)。另一方面細(xì)胞質(zhì)中含有能刺激融合后重組細(xì)胞進(jìn)行分裂分化并形成重組胚胎的物質(zhì)。2.克隆動(dòng)物的特點(diǎn)(1)克隆動(dòng)物的性狀與核供體生物的性狀基本相同,但不是完全相同,原因是:①克隆動(dòng)物的細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)來自受體卵母細(xì)胞;②生物的性狀不僅與遺傳物質(zhì)有關(guān),還受環(huán)境影響。(2)核基因是供體核基因的100%的復(fù)制。(3)克隆動(dòng)物是一種無性繁殖方式。3.判斷有性生殖與無性生殖的兩種方法(1)從概念上判斷:①有性生殖是指經(jīng)兩性生殖細(xì)胞結(jié)合而成的合子或有性配子直接發(fā)育成個(gè)體的生殖方式;②無性生殖是指不經(jīng)過生殖細(xì)胞的結(jié)合而由親本直接產(chǎn)生子代的生殖方式。(2)從培養(yǎng)細(xì)胞的種類上判斷:①組織培養(yǎng)中培養(yǎng)的不是體細(xì)胞而是有性配子或合子時(shí),才屬于有性生殖;②植物組織培養(yǎng)、植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞核移植都屬于無性生殖。
[易錯(cuò)警示](1)動(dòng)物核移植技術(shù)可以分為胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植,因?yàn)榕咛ジ杉?xì)胞的全能性比體細(xì)胞大,所以胚胎細(xì)胞核移植更容易實(shí)現(xiàn)。(2)克隆的層次①分子水平:如DNA復(fù)制;②細(xì)胞水平:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng);③個(gè)體水平:克隆羊“多利”的誕生。1.下列對(duì)動(dòng)物核移植技術(shù)的描述,不正確的是(
)A.動(dòng)物體細(xì)胞核移植的難度明顯高于胚胎細(xì)胞的B.體細(xì)胞核移植的過程中可通過顯微操作去核法去除卵母細(xì)胞中的核C.細(xì)胞核移植的供體細(xì)胞一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞D.通過體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物是對(duì)供體100%的復(fù)制解析:早期胚胎細(xì)胞作細(xì)胞核的供體細(xì)胞時(shí)妊娠成功率最高,體細(xì)胞核移植的難度高于胚胎細(xì)胞核移植的;在核移植前一般要先用顯微操作法去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核,獲得卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì);核移植時(shí)作供核一方的一般是傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞,原因是此種細(xì)胞能保持正常的二倍體核型,遺傳物質(zhì)不發(fā)生改變;通過細(xì)胞核移植方法獲得的重組細(xì)胞,細(xì)胞核遺傳物質(zhì)來自供體核,細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)來自受體的細(xì)胞質(zhì),所以用核移植的方法得到的動(dòng)物不是對(duì)供體動(dòng)物100%的復(fù)制。答案:D2.如圖為哺乳動(dòng)物(羊)的生殖過程,下列敘述不正確的是(
)A.個(gè)體2為克隆動(dòng)物,c為高度分化的體細(xì)胞B.個(gè)體2的遺傳性狀與提供c細(xì)胞的羊不完全相同C.產(chǎn)生動(dòng)物個(gè)體1與動(dòng)物個(gè)體2的生殖方式是不同的D.e細(xì)胞為完成減數(shù)分裂的卵細(xì)胞解析:在核移植過程中,去核受體細(xì)胞一般選用處于減數(shù)第二次分裂中期的次級(jí)卵母細(xì)胞,而不是完成減數(shù)分裂的卵細(xì)胞。答案:D[夯實(shí)生命觀念]1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理是細(xì)胞增殖。2.細(xì)胞在培養(yǎng)過程中會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞貼壁(生長(zhǎng))和細(xì)胞接觸抑制現(xiàn)象。3.動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。4.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件包括:無菌、無毒的環(huán)境,適宜的營(yíng)養(yǎng)、溫度和pH及氣體環(huán)境。5.動(dòng)物細(xì)胞核移植的原理是動(dòng)物細(xì)胞核的全能性。6.哺乳動(dòng)物核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植。7.在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中CO2的作用是維持培養(yǎng)液的pH。
[注重思維表達(dá)]1.將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的方法是什么?為什么要先剪碎組織?提示:先將動(dòng)物組織塊剪碎,然后用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理一段時(shí)間即可分散成單個(gè)細(xì)胞。剪碎的目的是增大胰蛋白酶或膠原蛋白酶與細(xì)胞的接觸面積。2.在進(jìn)行核移植時(shí),為何一般不選用生殖細(xì)胞作為供核細(xì)胞?提示:因?yàn)樯臣?xì)胞與正常體細(xì)胞相比遺傳物質(zhì)減半。3.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前,為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核?提示:為使核移植產(chǎn)生的胚胎或動(dòng)物的遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價(jià)值的動(dòng)物提供的體細(xì)胞,在供體細(xì)胞的細(xì)胞核移至受體細(xì)胞之前,必須將受體細(xì)胞的細(xì)胞核去掉或?qū)⑵淦茐摹=馕觯杭走^程表示獲取實(shí)驗(yàn)小鼠的組織細(xì)胞,需要對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行消毒處理,選項(xiàng)A正確;乙表示用胰蛋白酶處理皮膚組織,使其分散成單個(gè)皮膚細(xì)胞,選項(xiàng)B正確;丙過程表示原代培養(yǎng),形成的細(xì)胞株遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變,具有正常的二倍體核型,選項(xiàng)C錯(cuò)誤;丁是傳代培養(yǎng)過程,該過程部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能發(fā)生了變化而失去貼壁黏附性,選項(xiàng)D正確。答案:C2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)是(
)①細(xì)胞貼壁②有絲分裂③分散生長(zhǎng)④接觸抑制⑤減數(shù)分裂⑥傳代培養(yǎng)一般傳至10代就不易傳下去A.①②④⑥ B.②③④⑤C.①③④⑥ D.③④⑤⑥解析:培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)懸液中分散的細(xì)胞只有貼附在光滑無毒的瓶壁上才會(huì)生長(zhǎng)增殖,稱為細(xì)胞貼壁,在懸液中不會(huì)分散生長(zhǎng),①對(duì)、③錯(cuò);動(dòng)物體細(xì)胞增殖的方式是有絲分裂,沒有減數(shù)分裂,②對(duì)、⑤錯(cuò);當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂,這叫接觸抑制,④對(duì);傳代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳到10代以后就不易傳下去了,⑥對(duì)。答案:A3.某研究小組對(duì)某種動(dòng)物的肝腫瘤細(xì)胞(甲)和正常肝細(xì)胞(乙)進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下列有關(guān)說法正確的是(
)A.在利用兩種肝組織塊制備肝細(xì)胞懸液時(shí),也可用胃蛋白酶處理B.細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO2和95%O2的混合氣體的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行C.為了防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中細(xì)菌的污染,可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素D.在相同適宜條件下培養(yǎng)等量的甲、乙細(xì)胞,一段時(shí)間后,乙細(xì)胞數(shù)量比甲多解析:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為~,而在這樣的環(huán)境中胃蛋白酶會(huì)變性失活,因此在利用兩種肝組織塊制備肝細(xì)胞懸液時(shí),不可用胃蛋白酶處理,應(yīng)用胰蛋白酶處理,A錯(cuò)誤;細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO2和95%空氣的混合氣體的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行,B錯(cuò)誤;為了防止培養(yǎng)過程中雜菌的污染,可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素,C正確;甲(肝腫瘤細(xì)胞)失去接觸抑制,而乙(正常肝細(xì)胞)具有接觸抑制,因此一段時(shí)間后,甲細(xì)胞數(shù)量比乙多,D錯(cuò)誤。答案:C4.下列為克隆羊“多利”的培育過程示意圖。下列各項(xiàng)有關(guān)表述錯(cuò)誤的是(
)A.克隆羊“多利”的主要性狀與甲羊一致,因其細(xì)胞核基因來自甲羊B.克隆羊“多利”的培育過程中采用的生物技術(shù)有核移植和胚胎移植C.乙羊的去核卵母細(xì)胞為重組細(xì)胞基因表達(dá)提供了細(xì)胞內(nèi)的環(huán)境條件D.此過程說明高度分化的動(dòng)物細(xì)胞具有全能性解析:生物的性狀主要由細(xì)胞核中的基因控制,此過程中培育成的早期胚胎需要移植到第三只羊的子宮內(nèi)完成發(fā)育過程,此實(shí)驗(yàn)只能說明高度分化的動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性,而不能證明動(dòng)物細(xì)胞的全能性。答案:D5.某生物興趣小組對(duì)一種抗癌新藥進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),以動(dòng)物肝癌細(xì)胞為材料,測(cè)定抗癌藥物對(duì)體
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