藥物的體外抗菌技術(shù)-課件

ppt課件1藥物的體外抗菌技術(shù)項目八ppt課件2學(xué)習(xí)目標(biāo)1.熟悉藥物體外抗菌試驗的用途及意義2.掌握體外抗菌試驗的基本方法ppt課件3藥物的體外抗菌試驗：又稱藥敏試驗，是為了檢查藥物的抗菌能力，主要用于篩選抗菌藥物或測定細(xì)菌對藥物的敏感性。藥敏試驗抑菌試驗：殺菌試驗：只能抑制微生物生長，不能殺死微生物?？梢詺⑺牢⑸飌pt課件4藥物的體外抗菌試驗用途：篩選抗菌藥物、測定血藥濃度測定抗菌譜、耐藥譜、效價提取過程中的生物追蹤

ppt課件5優(yōu)點：方法簡便、需時短、用藥量少，不需要動物。缺點：不能根據(jù)體外試驗結(jié)果肯定或否定一個藥物的抗菌作用。藥物的體外抗菌試驗ppt課件6抗菌試驗的影響因素1、試驗菌：用專門的供應(yīng)機(jī)構(gòu)提供的標(biāo)準(zhǔn)菌株。北京衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所菌種保藏中心。試驗菌應(yīng)合理保藏，用前加以純化及生物學(xué)特征鑒定。ppt課件7所用的試驗菌株應(yīng)處于對數(shù)生長期，因此期的微生物對外界因素變化最敏感。試驗結(jié)果的靈敏度在一定程度上與試驗菌的接種量成反比關(guān)系，故應(yīng)選用適宜的接種量。ppt課件8抗菌試驗的影響因素2、培養(yǎng)基抗菌試驗的培養(yǎng)基應(yīng)按試驗菌的需求配制，如鏈球菌常用含血清的肉湯培養(yǎng)基，抗真菌藥物試驗需用沙氏培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的酸堿度、電解質(zhì)、還原性物質(zhì)等均可影響試驗結(jié)果，實驗時應(yīng)盡可能排除各種影響實驗結(jié)果因素的摻入。經(jīng)無菌檢查合格。ppt課件9抗菌試驗的影響因素3、抗菌藥物藥物的濃度、pH及含有的其他成分均可影響試驗結(jié)果，特別是中草藥制劑往往含有色素、雜質(zhì)和鞣質(zhì)等，這些均可造成錯誤結(jié)果，應(yīng)加注意。

ppt課件10抗菌試驗的影響因素4、對照試驗：為精確判斷實驗結(jié)果，試驗時應(yīng)設(shè)各種對照，包括試驗菌對照、已知藥物對照及溶劑和稀釋液對照等。ppt課件11

在實際工作中，往往可見到體外實驗有作用的藥物，進(jìn)入機(jī)體后由于各種原因而失效，有的藥物毒性很大也不能用于臨床。ppt課件12常用的體外抑菌試驗體外抑菌試驗瓊脂擴(kuò)散法平板挖溝法紙片擴(kuò)散法連續(xù)稀釋法液體培養(yǎng)基稀釋法固體培養(yǎng)基稀釋法ppt課件13瓊脂擴(kuò)散法原理：

將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中水分，溶解后不斷向紙片周圍擴(kuò)散形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測試菌的生長被抑制，從而形成無菌生長的透明圈即為抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的MIC呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，即抑菌圈愈大，MIC值愈小。

ppt課件14紙片擴(kuò)散法：制成含菌平板后，將濾紙片蘸取藥液置于平板上，培養(yǎng)后觀察結(jié)果，量取抑菌圈直徑以此判斷試驗藥物抑菌作用的強(qiáng)弱。最常用的方法，適用于多種藥物或一種藥物的不同濃度對同一試驗菌的抑菌試驗，多用于新藥的初篩及臨床的藥敏試驗。

ppt課件15(二)培養(yǎng)基和抗菌藥物紙片1．抗菌藥物紙片選擇直徑為6.35mm，吸水量為20μl的專用藥敏紙片，用逐片加樣或浸泡方法使每片含藥量達(dá)規(guī)定要求。含藥紙片密封貯存于2℃-8℃，且不超過1周。2．培養(yǎng)基水解酪蛋白（M-H）培養(yǎng)基是兼性厭氧菌和需氧菌藥敏試驗標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，4℃保存。ppt課件16試驗程序ppt課件171.用接種環(huán)分別在瓊脂平板上挑取形態(tài)相似的大腸桿菌菌落4～5個，接種于3～5mL肉湯管中2.35℃溫箱培養(yǎng)2～8h，與標(biāo)準(zhǔn)比濁管比較，若菌液濃度太濃時，可用肉湯或生理鹽水稀釋至與0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管濁度相同3.在15min內(nèi)，用無菌棉簽蘸取菌液，并在管壁上擠去多余的菌液后涂布于M-H瓊脂平板上（注意：涂布要均勻、致密），待干（三）試驗步驟ppt課件184.用鑷子蘸取95%乙醇并通過火焰，待燒干后再蘸取乙醇重復(fù)上述操作，共三次即可達(dá)到滅菌的效果。待冷卻后，用此無菌鑷子夾取不同藥敏紙片，按一定間隔貼在平板的不同區(qū)域，即兩紙片間距不小于24mm，紙片距平板邊緣不小于15mm。5.35℃溫箱培養(yǎng)18～24h觀察結(jié)果。ppt課件19紙片法的原理ppt課件20（四）結(jié)果判斷和報告用精確度為1mm的游標(biāo)卡尺量取抑菌圈直徑。根據(jù)NCCLS標(biāo)準(zhǔn)，作出“敏感”、“耐藥”和“中介”的判斷。幾種抗生素抑菌環(huán)解釋標(biāo)準(zhǔn)及相應(yīng)的最低抑菌濃度≤4≥8≥1513～14≤1210IU慶大霉素GEN≤0.5≥8≥2314～22≤1315IU紅霉素ERY≤0.1≥2921～28≤2010IU青霉素GP-G敏感耐藥敏感中介耐藥相應(yīng)的MIC（μg/ml）抑菌環(huán)直徑（mm）紙片含藥量抗生素代號ppt課件21（五）藥物敏感試驗結(jié)果解釋

“敏感”（susceptible，S）：表示測試菌可被測定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制；“耐藥”（resistant，R）：表示測試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制，臨床治療無效。“中介”（intermediate，I）：表示測試菌對常規(guī)用藥體液或組織中的藥物濃度的反應(yīng)率低于敏感株，使用高于正常給藥量有療效。ppt課件22挖溝法：1、在瓊脂平板上挖溝，溝兩邊垂直劃線接種各種試驗菌，溝內(nèi)加入藥液。2、培養(yǎng)后，根據(jù)溝兩邊所生長的試驗菌離溝的距離來判斷藥物對試驗菌的抗菌作用強(qiáng)弱。適用于在一個平板上試驗一種藥物對幾種不同試驗菌的抗菌作用。ppt課件23ppt課件24

瓊脂擴(kuò)散法具有方法簡便，技術(shù)要求不高，易掌握操作的特點。但精確度不高，一般能用于定性或初步判斷其作用的強(qiáng)弱。液體稀釋法是一種測定藥物的抗菌作用定量方法，較瓊脂擴(kuò)散法精確，因而運用較普遍。

ppt課件25凡能抑制試驗菌生長的最高藥物稀釋度為該藥的最低抑菌濃度（Minimalinhibitoryconcentration，MIC）。

以培養(yǎng)后無細(xì)菌生長的最高藥物稀釋度為最小殺菌濃度（Minimalbactericidalconcentration，MBC）。ppt課件26液體連續(xù)稀釋法

1、在一系列的試管中用液體培養(yǎng)基將試驗藥物作連續(xù)對倍稀釋，使藥物的濃度沿試管順序成倍遞減。2、再于各管中加入等量的實驗菌，經(jīng)16～24h培養(yǎng)后，與陰性及陽性對照管進(jìn)行對照觀察。3、將未長細(xì)菌的培養(yǎng)液取出，分別轉(zhuǎn)種瓊脂平皿。如培養(yǎng)后重新長出試驗菌，說明該藥僅有抑菌作用。如無菌生長則可以認(rèn)為該藥物有殺菌作用。ppt課件27MIC及MBC的測定不含藥的平板MBCppt課件28

在測定中草藥煎劑時，由于有些煎劑顏色較深，肉眼不易分辨是否有效；需再于每管中取數(shù)環(huán)移種于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后觀察有無細(xì)菌生長而決定之。ppt課件29體外殺菌試驗技術(shù)殺菌試驗是用來評價藥物對微生物的致死活性1.最低殺菌濃度測定（MBC）2.活菌計數(shù)法每毫升的活菌=菌落數(shù)*稀釋倍數(shù)/稀釋液用量致死率=（總菌數(shù)-活菌數(shù)）/總菌數(shù)*100%ppt課件30體外殺菌試驗技術(shù)3.化學(xué)消毒劑的效力測定標(biāo)準(zhǔn)：苯酚酚系數(shù)=消毒劑的殺菌稀釋度/苯酚的殺菌稀釋度酚系數(shù)越大，化學(xué)消毒劑的效力越高ppt課件31聯(lián)合抗菌試驗