血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳及其定量-實驗報告_第1頁
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生物化學實驗報告姓名：學號：專業(yè)年級：組別：生物化學與分子生物學實驗教學中心實驗名稱血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳及其定量實驗日期實驗地點合作者指導老師評分教師簽名批改日期實驗?zāi)康?.1.學習醋酸纖維薄膜電泳的基本原理和操作方法；1.2.了解電泳技術(shù)的一般原理；1.3.掌握電泳分離血清蛋白質(zhì)及其定性定量的方法。二、實驗原理2.1.血清中各種蛋白質(zhì)的等電點不同，一般都低于pH7.4。它們在pH8.6的緩沖液中均解離帶負電荷，在電場中向正極移動。由于血清中各種蛋白質(zhì)分子大小、形狀及所帶的電荷量不同，在醋酸纖維素薄膜上電泳的速度也不同。因此可以將它們分離為清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5條區(qū)帶。2.2.血清中不同蛋白質(zhì)的等電點、分子量及含量血清蛋白質(zhì)等電點分子量占總蛋白的％清蛋白4.6469,00057～72α1－球蛋白5.06200,0002～5α2－球蛋白5.06300,0004～9β－球蛋白5.1290,000～150,0006.5～12γ－球蛋白6.85～7.3156,000～950,00012～20緩沖液pH=8.6，pI＜pH。血清蛋白帶負電荷，在電場中向正極移動。四、結(jié)果與討論：圖一染色后的膜條4.1.結(jié)果分析本次實驗得到的圖譜只能夠清晰的看出清蛋白和γ－球蛋白的區(qū)帶，其余無法區(qū)別。原因可能如下：①醋酸纖維薄膜質(zhì)量不足②③點樣太少，區(qū)帶顯色不明顯。④電泳時間不足。⑤薄膜在緩沖液中浸泡的時間不足。⑤取出電泳后的薄膜過程中曾不慎將薄膜掉到地上。⑥4.2.課后思考題電泳時，點樣端置于電場的正極還是負極？為什么？答：點樣端置于電場的負極。因為人體血清的蛋白質(zhì)會因電槽中溶質(zhì)呈堿性而帶負電，要成功分離出各類各類蛋白質(zhì)，理應(yīng)將點樣端置于電場的負極。電泳后各區(qū)帶應(yīng)明顯分開,如分離不清或不整齊,試分析其可能存在的原因。答：①醋酸纖維薄膜質(zhì)量不足；②③點樣太少，區(qū)帶顯色不明顯；④染色時，醋酸纖維薄膜不是一張一張放入染色液的，在染色固定

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