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血清丙氨酸氨基轉移酶（ALT）活力測定實驗時間：2021.4.14實驗目的：1.了解ALT活力變化的意義2.掌握ALT活力測定的方法實驗原理：1.以丙氨酸和a-酮戊二酸為底物，在ALT的作用下，生成丙酮酸和谷氨酸，丙酮酸能與2,4-二硝基苯肼結合，生成丙酮酸二硝基苯腙。后者在堿性溶液中呈現棕色，可借此比色測定。a-酮戊二酸也能與2,4-二硝基苯肼結合生成相應的苯腙二干擾比色結果。但是，后者在堿性溶液中的吸收光譜與丙酮酸二硝基苯腙有所不同，在520nm比色時，a-酮戊二酸二硝基苯腙的光吸收遠較丙酮酸二硝基苯腙為低。在反應后，a-酮戊二酸減少而丙酮酸增多，使干擾減少。故520nm處吸光度增加之程度與反應體系中丙酮酸含量的增加基本呈線性關系。實驗儀器：恒溫水浴箱分光光度計試管試劑：2mmol/L丙酮酸標準液，底物溶液，0.1mmol/L磷酸緩沖液（pH7.4）,2,4-二硝基苯肼，0.4mol/LNaOH實驗步驟：標準曲線制作取大使管6支編號，按下表加試劑：ALT與其吸光度的標準曲線繪制（用量：ml)試劑對照123452mmol/L丙酮酸標準液00.050.100.150.200.25底物溶液0.500.450.400.350.300.250.1mol/L磷酸緩沖液0.10.10.10.10.10.1混勻，至于37攝氏度水浴保溫5分鐘，然后加入2,4二硝基苯肼2,4-二硝基苯肼0.50.50.50.50.50.5混勻，至于37攝氏度水浴中20分鐘，然后各管加入0.4mol/LNaOH0.4mol/LNaOH5.05.05.05.05.05.0相當于活力單位0285797150200混勻，10分鐘后對照管調零，用520nm波長比色，讀取各管之吸光度，然后以吸光度為縱坐標，各管相應的轉氨酶單位為橫坐標，繪制標準曲線。2.酶活性測定取2支試管，編號，按下表操作：試劑對照測定血清-0.10.1mol/L磷酸緩沖液0.1-底物溶液0.50.5混勻，置于37攝氏度水浴中保溫30分鐘，然后各管加入2,4-二硝基苯肼2,4-二硝基苯肼0.50.5混勻，再置于37攝氏度水浴中20分鐘，然后各管分別加入0.4mol/LNaOH0.4mol/LNaOH5.05.0用520nm波長比色，以對照管調零，讀取測定管吸光度。由標準曲線查知ALT酶活力單位。實驗注意事項：1.加入堿液后，要注意及時搖勻，以使酶變性失活，并使反應產物顏色均一2.涉及

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