Coombs操作說明專業(yè)知識講座

2023-08-08新生兒溶血癥Coobms試驗

第1頁Coobms試驗標(biāo)本要求：嬰兒父母，嬰兒各1-2ml抗凝血。檢測項目：ABO血型，Rh(D)，直抗，放散，游離試驗。記費標(biāo)準(zhǔn)：200元。第2頁一．試驗前準(zhǔn)備：1．1%標(biāo)準(zhǔn)A，B，O型紅細(xì)胞懸液（三人以上混合，洗滌一次）。2.1%不完全抗體篩選細(xì)胞（O型紅細(xì)胞）Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，0.2M巰基乙醇應(yīng)用液。3．打開37℃Diana孵育器，56℃水浴箱，各離心機電源。第3頁二．新生兒及其父母血型卡、

直抗試驗1：1．離心抗凝血標(biāo)本，取壓積紅細(xì)胞1ul加1ml生鹽配成1%紅細(xì)胞懸液（可不洗滌）。2．血型卡上寫好姓名，8孔中加入患者1%紅細(xì)胞懸液50ul。3．不孵育，將卡放到Dianafuge離心機中離心。4．觀測血型、直抗試驗成果。注：IgG：兔多克隆抗-IgGAHG：多克隆抗人球蛋白第4頁

二．新生兒及其父母血型卡、

直抗試驗2：姓名離心觀測血型、直抗試驗成果患者1%紅懸50ul第5頁三．放散試驗1：1．取新生兒壓積紅細(xì)胞200ul洗滌三次。2．加200ul生鹽混勻在56℃水浴箱10分鐘（中間輕輕振蕩幾次），2500轉(zhuǎn)/分離心3分鐘。3．Coombs卡上做好標(biāo)識，取上述上清液50ul加到Coombs卡孔上。第6頁三．放散試驗2：4．加入對應(yīng)1%標(biāo)準(zhǔn)A，B，O型紅細(xì)胞懸液50ul。

標(biāo)準(zhǔn)：新生兒血型為A型，加標(biāo)準(zhǔn)A，O型紅懸2孔；新生兒血型為B型，加標(biāo)準(zhǔn)B，O型紅懸2孔；新生兒血型為AB型，加標(biāo)準(zhǔn)A，B，O型紅懸3孔；新生兒血型為O型，加標(biāo)準(zhǔn)O型紅懸1孔；5.37℃下孵育15分鐘，離心。6.觀測放散試驗成果。第7頁三．放散試驗：新生兒壓積紅懸200ul洗滌三次壓積紅:生鹽=1:156℃,10min2500rpm,3min+1%標(biāo)準(zhǔn)A，B，O型紅細(xì)胞懸液50ulAO放散姓名離心觀測放散試驗成果37℃,15min上清50ul第8頁四．游離試驗：1．Coombs卡上做好標(biāo)識，加入50ul新生兒血漿。2．加入對應(yīng)1%標(biāo)準(zhǔn)A，B，O型紅細(xì)胞懸液50ul。

標(biāo)準(zhǔn)：新生兒血型為A型，加標(biāo)準(zhǔn)A，O型紅懸2孔；新生兒血型為B型，加標(biāo)準(zhǔn)B，O型紅懸2孔；新生兒血型為AB型，加標(biāo)準(zhǔn)A,B,O型紅懸3孔；新生兒血型為O型，加標(biāo)準(zhǔn)O型紅懸1孔；4.37℃下孵育15分鐘，離心。5.觀測放散試驗成果。第9頁五．直接抗人球蛋白試驗(Cooms)：在Coombs卡AHG下做好標(biāo)識。加入1%被檢紅懸50ul。3.不孵育，將卡放到Dianafuge離心機中離心。4.觀測血型、直抗試驗成果。注：AHG：多克隆抗人球蛋白第10頁六．IgG抗體效價檢測：1.Coombs卡上做好標(biāo)識。2.取200ul孕婦血漿與200ul巰基乙醇應(yīng)用液等量混勻，37℃水浴1小時，破壞IgM抗A/B抗體。3.2500轉(zhuǎn)/分離心3分鐘，取上清100ul，用生理鹽水等比稀釋至1：512。4.在Coombs卡4孔上加入稀釋好第5-8孔50ul，再加入對應(yīng)1%標(biāo)準(zhǔn)A，B，O型紅細(xì)胞懸液50ul。5.37℃下孵育15分鐘，離心。6.觀測放散試驗成果。第11頁七．IgG抗體效價檢測：1.Coombs卡上做好標(biāo)識。2.主側(cè)：患者血漿50ul＋供者紅懸50ul。3.次側(cè)：供者紅懸50ul＋患者血漿50ul。4.37℃下孵育15分鐘，離心。5.觀測放散試驗成果。第12頁八．抗體篩查：1.Coombs卡上做好標(biāo)識。2.患者血漿50ul＋1%不完全抗體篩選細(xì)胞各50ul。3.37℃下孵育15分鐘，離心。4.觀測放散試驗成果。第13頁九．注意事項