uplc-msms法測定人血漿中亞胺培南的濃度及其藥動學(xué)研究

uplc-msms法測定人血漿中亞胺培南的濃度及其藥動學(xué)研究

氨基丙烯酸苯胺（imp）是一種碳青霉烯類抗生素。其作用特點是具有廣的抗菌譜、強的抗菌活性和對鋯的高度穩(wěn)定。這是治療重癥感染的首選藥物。IMP在體內(nèi)會被腎臟中的腎肽(DHP-1)酶快速代謝,其腎毒性也會因此增加。臨床上,IMP常與DHP-1酶抑制劑西司他丁以1∶1的比例同用接受CRRT的重癥感染患者,因為其病理、生理等多方面的原因,其體內(nèi)藥代動力學(xué)會發(fā)生較大的變化,因此,監(jiān)測患者體內(nèi)IMP的濃度、及時調(diào)整給藥劑量及給藥間隔對于提高臨床治療效果具有非常重要的意義傳統(tǒng)測定IMP濃度的方法多是高效液相色譜(HPLC)法,目前國內(nèi)尚未有報道測定IMP血藥濃度的HPLC-MS/MS法。為研究IMP在接受CRRT的重癥患者體內(nèi)的藥代動力學(xué)以及為IMP的治療藥物濃度監(jiān)測提供方法參考,本實驗擬建立一種靈敏度高、特異性強、操作簡單、穩(wěn)定的UHPLC-MS/MS法。1實驗材料1.1培南對照品、試劑及色譜試驗制劑注射用亞胺培南西司他丁鈉(商品名:俊特,浙江海正藥業(yè)股份有限公司);IMP對照品、內(nèi)標(biāo)美羅培南對照品(純度≥98%)及2-(N-嗎啉基)乙磺酸(MES)(純度≥99%)(美國sigma公司);色譜純乙腈(美國FisherScientific公司);色譜純甲酸及醋酸銨(美國MredaTechnologyInc.公司);蒸餾水(香港屈臣氏公司);其它試劑均為分析純及以上。1.2儀器、設(shè)備和測試超高液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀系統(tǒng):自動進樣器、二元泵、柱溫箱以及控制系統(tǒng)(日本島津公司);API45000三重四極桿質(zhì)譜儀(美國AB公司);v1.6.1Analystsoftware工作站(美國AB公司);Allegra64R高速低溫離心機(美國BeckmanCoulter公司)等。PhenomenexKinetex1.3重癥感染合并急性腎衰竭研究對象為2013年8月至2015年2月間收治于本院ICU中重癥感染合并急性腎衰竭接受CRRT及IMP治療的8例患者,體重(68.1±6.6)kg,血肌酐>195μmol·L2方法和結(jié)果2.1內(nèi)標(biāo)溶液配制精密稱取5.00mg亞胺培南對照品,加水溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中,定容至刻度,得到濃度為1.00mg·mL精密稱取內(nèi)標(biāo)10.03mg于10mL量瓶中,加水溶解并定容至刻度,得到濃度為1.00mg·mL2.2條件1色譜柱為PhenomenexKinetex2.5方法學(xué)的檢驗2.5.1空白基質(zhì)的檢測取空白人血漿與MES混合物100μL,內(nèi)標(biāo)及IMP樣品以等量溶劑代替,其余按“2.4”項下操作,得到空白基質(zhì)樣品色譜圖(圖2-A);按“2.4”項下操作,得到空白基質(zhì)加IMP及內(nèi)標(biāo)色譜圖(圖2-B);取臨床血樣依法操作,得到生物樣品色譜圖(圖2-C)。結(jié)果顯示,IMP及內(nèi)標(biāo)的保留時間分別為4.5min及4.6min,基質(zhì)對測定無干擾。2.5.2建立標(biāo)準(zhǔn)曲線取空白人血漿與MES混合物100μL,加入系列標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液,按“2.4”項下操作,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。以待測物與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比(A/A結(jié)果顯示,本法定量范圍為0.10~80.00μg·mL2.5.3提取回收率及基質(zhì)效應(yīng)按“2.4”項下加入QC工作液操作,結(jié)果顯示,不同濃度IMP的日內(nèi)、日間精密度及準(zhǔn)確度均符合要求。另取空白血漿-MES混合物,取蛋白沉淀后的上清液加入QC工作液,得到提取后添加樣品峰面積,以QC樣品峰面積/提取后添加樣品峰面積(%)表示提取回收率。結(jié)果顯示,方法的提取回收率在86%~92%之間。以溶劑100μL代替上述空白血漿-MES混合物,按“2.4”項下操作,得到標(biāo)準(zhǔn)溶液樣品峰面積;以QC樣品峰面積/標(biāo)準(zhǔn)溶液樣品峰面積(%)表示基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果顯示,方法的基質(zhì)效均小于15%,符合規(guī)定,結(jié)果見表2。2.5.4凍存穩(wěn)定性以及凍融穩(wěn)定性分別考察QC血漿樣品處理前室溫放置4h、-80℃凍存2個月的穩(wěn)定性,樣品處理后自動進樣器放置12h的穩(wěn)定性以及凍融穩(wěn)定性。結(jié)果表明,IMP在各條件下均較穩(wěn)定,RSD小于11%,結(jié)果見表3。2.6藥動學(xué)模型及參數(shù)每名患者接受注射用亞胺培南西司他丁鈉1g(亞胺培南0.5g,西司他丁鈉0.5g)靜脈滴注30min,給藥間隔時間為8h。待達到穩(wěn)態(tài)后,分別于0h(輸注前),0.25、0.5、0.75、1、2、5、8h取血于肝素化離心管中,4℃,3000g離心10min,取上清,立即以1:1的比例加入0.5mol·L采用DAS3.0非房室模型計算IMP的藥動學(xué)參數(shù)。8名患者30min內(nèi)靜脈滴注IMP后的平均血藥濃度-時間曲線見圖3,藥動學(xué)參數(shù)見表4。3亞胺培南的測定方法是否為出現(xiàn)crrt結(jié)果的細(xì)傳統(tǒng)測定IMP血藥濃度的方法HPLC法參考文獻報道IMP水溶液在室溫及4℃都不穩(wěn)定,為了確保IMP對照品濃度的準(zhǔn)確性,本實驗將標(biāo)準(zhǔn)溶液儲備液置于-80℃保存,臨用時才稀釋成工作液對本院ICU患者體內(nèi)藥動學(xué)研究結(jié)果顯示,與文獻報道的健康受試者相比,CRRT患者的t綜上所述,本文建立了一種UPLC-MS/MS法測定人血漿中亞胺培南的濃度,該法快速、靈敏,可用于IMP藥代動力學(xué)研究和臨床治療藥物濃度監(jiān)測。2.3imp定量離子電噴霧