瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)課件

全球基金瘧疾項(xiàng)目

鏡檢技術(shù)培訓(xùn)（二）戶縣疾病預(yù)防控制中心2012年3月28日全球基金瘧疾項(xiàng)目

鏡檢技術(shù)培訓(xùn)（二）戶縣疾病預(yù)防控制中心瘧原蟲檢驗(yàn)技術(shù)

采集血樣血片制作血片染色瘧原蟲鏡檢瘧原蟲檢驗(yàn)技術(shù)采集血樣采集血樣采血部位：耳垂或無名指，取血方法：通常在耳垂取血，先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指緊捏耳垂上方或無名指指尖，右手持消毒針迅速刺入皮膚，不宜過深或過淺。然后用右手中指輕輕擠壓出血。厚血膜血量約一粒米大小,薄血膜血量為厚血膜的一半或1/3。采集血樣采血部位：耳垂或無名指，厚血膜：用推片的一角，取血一小滴（約4－4.5微升），置于平置的載玻片上，由里向外一個(gè)方向旋轉(zhuǎn)，涂成直徑0.8~1厘米大小圓形厚血膜。薄血膜：以推片一端的中部取血一小滴，使血滴與載玻片接觸，血液沿推片邊緣向兩側(cè)展開，將推片與載玻片保持300-450，均勻而迅速適當(dāng)?shù)赜昧ο蚯巴瞥缮嘈伪⊙ぁＱ谱鳎ㄒ唬┖裱け⊙ず裱ぃ河猛破囊唤?，取血一小滴（約4－4.5微升），置于平血片制作（二）標(biāo)準(zhǔn)的瘧疾厚薄血膜片：把載玻片分成六等份，把厚血膜涂在從右到左的第三格中央，薄血膜涂在第四格前緣至第六格中部，第一、二格備貼標(biāo)簽編號(hào)用。厚、薄血膜間用蠟筆劃線分開厚血膜血量不宜過多或過少薄血膜平整,無皺折和空泡.顯微鏡下紅細(xì)胞單層排列血片制作（二）標(biāo)準(zhǔn)的瘧疾厚薄血膜片：血片制作（三）不同血片涂布法：標(biāo)準(zhǔn)血片門診發(fā)熱病人血片居民普查血片血片制作（三）不同血片涂布法：血片染色（一）染色方法:吉氏染色法瑞氏染色法

WHO推薦使用吉氏染色法血片染色（一）染色方法:血片染色（二）吉氏原液的配制：吉氏染粉(AzureBtype)１g甘油(純)

50ml甲醇

(純)

50ml把吉氏粉置于研缽中，加少量甘油充分研磨,

然后邊加邊磨，直至50ml甘油完全加入，倒入棕色瓶中。然后在研缽中加入少許甲醇清洗研缽，洗液倒入棕色瓶中，再放入甲醇清洗，反復(fù)數(shù)次，直至甲醇用完。蓋好瓶蓋，充分搖勻，置于65℃溫箱中24小時(shí)，或室溫陰暗處1-2周后過濾，備用。整個(gè)染色液配制時(shí)間不能少于5個(gè)小時(shí)時(shí)間越長(zhǎng)染色效果越好。血片染色（二）吉氏原液的配制：吉氏染粉(AzureB血片染色（三）吉氏染液的配制：把吉氏原液用PH7.0±0.2緩沖液稀釋，比例約為1:15～20，稀釋后方可用于厚薄血片染色。吸取原液時(shí)，不要晃動(dòng)瓶子,以免沉淀物泛起影響染色效果.血片染色（三）吉氏染液的配制：血片染色（四）血膜固定：血膜充分晾干后，用甲醇固定薄血膜。厚血膜上滴加蒸餾水進(jìn)行溶血，到血膜呈灰白色時(shí)，將水倒去，晾干后再用甲醇固定。注意：①薄血膜固定時(shí)，甲醇不可觸碰未溶血的厚血膜。

②厚血膜溶血時(shí)，蒸餾水不可觸碰薄血膜。血片染色（四）血膜固定：血膜充分晾干后，用甲醇固定薄血膜。厚血片染色（五）血片染色：1.吉氏染色法：把吉氏染液滴加于已固定的厚、薄血膜上，室溫染色30分鐘，用緩沖液沖洗干凈。血片晾干后鏡檢。2.快速吉氏染色法：取吉氏原液1ml，加緩沖液5ml，混勻后，滴加于厚、薄血膜上染色5分鐘，用緩沖液沖洗，晾干后鏡檢。血片染色（五）血片染色：血片染色（六）3.成批血片染色：將已固定的血片插入染色缸，加入吉氏染液浸沒血片，對(duì)厚、薄血膜同時(shí)染色30分鐘。注意：如果吉氏染液是從市場(chǎng)上購(gòu)置的成品試劑，請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書操作。血片染色（六）3.成批血片染色：將已固定的血片插入染色缸，加血片染色（七）血片染色結(jié)果：染色質(zhì)量好的血片：顯微鏡下核呈紅色，胞漿呈藍(lán)色，薄血膜平整，紅細(xì)胞單層排列。如果血片偏紅,說明染液偏酸性如果血片偏藍(lán),說明染液偏堿性

吉氏染色血片外觀血片染色（七）血片染色結(jié)果：吉氏染色血片外觀血片染色（八）血片制作與染色注意事項(xiàng)：１、載玻片必須清潔無油污；２、固定薄血膜時(shí)，甲醇不要觸碰到厚血膜；３、厚血膜在染色之前先用清水滴加在上面進(jìn)行溶血，以防厚血膜染色后顏色發(fā)黑，影響鏡檢；４、血片充分干燥后方可染色，防止沖洗染液時(shí)厚血膜脫落。5、未染色血膜的放置時(shí)間夏天不宜超過48小時(shí)，冬天不宜超過72小時(shí)，否則厚血膜會(huì)自然固定，影響鏡檢。血片染色（八）血片制作與染色注意事項(xiàng)：瘧原蟲鏡檢（一）

厚血膜

薄血膜

優(yōu)點(diǎn)血量多，面積小，原蟲較為集中。原蟲檢出率高血量少，面積大，干燥快紅細(xì)胞完整，原蟲形態(tài)極少變形。用于觀察原蟲形態(tài)與鑒別蟲種。缺點(diǎn)原蟲在干燥過程中皺縮，紅細(xì)胞消失，原蟲變形較大，原蟲鑒定困難血量比厚血膜少許多，但面積是厚血膜的8-10倍。檢查費(fèi)時(shí)，原蟲檢出率較低用途用于瘧疾病人檢查蟲種、蟲期鑒定及初學(xué)者教學(xué)標(biāo)本瘧原蟲厚、薄血膜鏡檢優(yōu)缺點(diǎn)瘧原蟲鏡檢（一）血量多，面積小，原蟲較為集中。原蟲檢出率高顯微鏡下厚血膜讀片順序瘧原蟲鏡檢（二）讀片順序：顯微鏡鏡下按由上而下、之字形順序讀片顯微鏡下厚血膜讀片順序瘧原蟲鏡檢（二）瘧原蟲鏡檢（三）鏡檢瘧原蟲結(jié)果判斷：陰性血片：①檢查全部厚血膜視野未查見瘧原蟲；②最少檢查100個(gè)厚血膜視野未查見瘧原蟲（臨床病人）。陽(yáng)性血片：檢出各期瘧原蟲（環(huán)狀體、裂殖體、配子體）。混合感染：在一個(gè)血膜上有2種以上瘧原蟲感染稱為混合感染，較常見的是間日瘧原蟲與惡性瘧原蟲混合。鏡檢判斷P.v+P.f混合感染：必須是看到P.v各期原蟲和P.f的配子體。瘧原蟲鏡檢（三）鏡檢瘧原蟲結(jié)果判斷：間日瘧和惡性瘧的鑒定要點(diǎn)瘧原蟲鏡檢（四）間日瘧和惡性瘧的鑒定要點(diǎn)瘧原蟲鏡檢（四）瘧原蟲鏡檢（五）瘧原蟲形態(tài)特征：間日瘧（P.vivax）鑒定要點(diǎn)紅細(xì)胞通常漲大薛氏點(diǎn)明顯成熟環(huán)狀體粗大滋養(yǎng)體胞漿有阿米巴樣偽足血片中可見各期的原蟲形態(tài)成熟裂殖體約含12-24個(gè)裂殖子

瘧原蟲鏡檢（五）瘧原蟲形態(tài)特征：間日瘧（P.vivax）瘧原蟲鏡檢（六）瘧原蟲形態(tài)特征：惡性瘧（P.falciparum）鑒定要點(diǎn)：紅細(xì)胞不漲大小滋養(yǎng)體（環(huán)狀體）纖細(xì),常有多重感染，環(huán)狀體內(nèi)可有2個(gè)核

環(huán)狀體可貼在紅細(xì)胞邊緣

血片中沒有其他發(fā)育期的大滋養(yǎng)體配子體呈新月形或臘腸形成熟裂殖體約含16-32個(gè)裂殖子可出現(xiàn)茂氏點(diǎn)瘧原蟲鏡檢（六）瘧原蟲形態(tài)特征：惡性瘧（P.falcipar鏡檢示教以下血片采自現(xiàn)癥病例瘧原蟲鏡檢（七）鏡檢示教以下血片采自現(xiàn)癥病例瘧原蟲鏡檢（七）瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)課件瘧疾血檢技術(shù)培訓(xùn)課件間日瘧環(huán)狀體間日瘧環(huán)狀體2.Intermittentfever;arrivedfromIndia2monthsago.間日瘧滋養(yǎng)體2.Intermittentfever;arrived3.HistoryofroundtheworldsafariincludingS.America,AsiaandAfrica.Generalmalaise.惡性瘧雄配子體3.Historyofroundtheworld4.Unspecifiedoverseastravel.Presentedwithtemperature38.4C三日瘧裂殖體4.Unspecifiedoverseastravel5.MalerecentlyreturnedtoAustraliaafterbackpackingthroughAsia.Historyofflulikesymptoms.白細(xì)胞5.MalerecentlyreturnedtoA6."NewAustralian"previouslyfromMalaysia.Intermittenttemperaturesandheadaches.白細(xì)胞6."NewAustralian"previously7.Achesandpains,withfever.?GlandularFever,?malaria.間日瘧裂殖體7.Achesandpains,withfever惡性瘧環(huán)狀體惡性瘧環(huán)狀體18.RecenttriptoSouthernIndia-headachesandvaguelyunwell.間日瘧裂殖體18.RecenttriptoSouthernIn19.PatienthasbeenholidayingintheDominicanRepublic,nowfeverish.惡性瘧雄配子體19.Patienthasbeenholidayin21.AmemberoftheUNforcesinEastTimor.Presentedwithhightemperature.惡性瘧雌雄配子體21.AmemberoftheUNforces間日瘧裂殖體間日瘧裂殖體惡性瘧雌配子體惡性瘧雌配子體間日瘧裂殖體間日瘧裂殖體血檢質(zhì)量考核

實(shí)驗(yàn)室條件血檢工作要求考核標(biāo)準(zhǔn)血檢質(zhì)量考核實(shí)驗(yàn)室條件實(shí)驗(yàn)室條件人員：各單位至少有1名專職或兼職的經(jīng)過瘧原蟲檢驗(yàn)技術(shù)培訓(xùn)的人員。熟悉瘧疾血片的制作，瘧原蟲的鏡下特征，能承擔(dān)瘧疾血檢工作。環(huán)境：實(shí)驗(yàn)室相對(duì)獨(dú)立，可做瘧疾血檢。設(shè)備：顯微鏡、玻片、玻片架、玻片合、染色缸。試劑：吉氏染液、甲醇、二甲苯、鏡油。實(shí)驗(yàn)室條件人員：血檢工作要求制定《瘧原蟲鏡檢實(shí)驗(yàn)室管理制度》、《瘧原蟲鏡檢操作規(guī)程》對(duì)血檢對(duì)象進(jìn)行認(rèn)真登記，填寫《瘧原蟲鏡檢登記表》，按接樣順序編號(hào)。編號(hào)：醫(yī)院名稱代碼＋序號(hào)。保留鏡檢過的所有血片，以備上級(jí)抽樣復(fù)查，經(jīng)上一級(jí)機(jī)構(gòu)同意后方可清洗。陽(yáng)性血片須專人管理。血液標(biāo)本有潛在生物危害，在實(shí)驗(yàn)室血檢工作、標(biāo)本保存中應(yīng)嚴(yán)格遵守《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》。血檢工作要求制定《瘧原蟲鏡檢實(shí)驗(yàn)室管理制度》、《瘧原蟲鏡檢操

縣（市/區(qū)）全球基金瘧疾項(xiàng)目發(fā)熱病人瘧原蟲血檢登記表

血檢單位：、

序號(hào)姓名年齡性別居住地址外出史及地點(diǎn)職業(yè)發(fā)病日期體溫（oC)臨床初診血檢日期血檢方法血檢結(jié)果檢驗(yàn)人簽名血樣編號(hào)鏡檢RDT陰性PfPvPmPo混合1234合計(jì)縣（市/區(qū)）全球基金瘧疾項(xiàng)目發(fā)熱瘧原蟲血檢考核標(biāo)準(zhǔn)(1)項(xiàng)目檢查內(nèi)容質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考核分值好分值中分值差分值血片制作厚血膜(25分）血量（5分）4～5цl5略多或略少3過多或過少1位置（5分）玻片右1/35稍偏右4偏右過多3直徑（5分）0.8～1.0cm50.7～0.8或1.0～1.2cm3<0.7或>1.2cm1外觀(10分)圓形厚膜均勻,邊緣整齊10圓形稍不均不整齊8厚薄不勻影響著色5薄血膜(25分）血量（5分）1～1.5цl5略多或略少3過多或過少1位置（5分）直徑（5分）外觀(10分）玻片1/2～1/3處5稍偏右或偏左4偏右或偏左過多32.5～2.0cm5稍大或稍小3過多或過少1舌狀厚薄均勻10舌狀稍不均5厚薄不勻呈波浪型3考核標(biāo)準(zhǔn)瘧原蟲血檢考核標(biāo)準(zhǔn)(1)項(xiàng)目檢查內(nèi)容質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考核好分中分差分瘧原蟲血檢考核標(biāo)準(zhǔn)（2）項(xiàng)目檢查內(nèi)容質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考核分值好分值中分值差分值血片染色質(zhì)量(15分)外觀（5分）藍(lán)紫色5深藍(lán)色3紅色或灰白色2鏡下(10分)白細(xì)胞、瘧原蟲胞漿藍(lán)色，核紅色10染色過深，原蟲胞漿與核均呈深藍(lán)色8染色過淺，胞漿藍(lán)色不易顯見，核淡紅5血片清潔度(10分)外觀（5分）光潔無油灰5稍有油污2油灰粘連2鏡下（5分）無沉渣5稍有沉渣2沉渣多或有雜菌2瘧原蟲血檢考核標(biāo)準(zhǔn)（2）項(xiàng)目檢查質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考核分值好分中分差分瘧原蟲血檢考核標(biāo)準(zhǔn)（3）項(xiàng)目檢查內(nèi)容使用標(biāo)準(zhǔn)扣分標(biāo)準(zhǔn)考核分值顯微鏡使用（25分）使用前（10分）顯微鏡干凈，有綢布遮蓋，接物鏡不與聚光器對(duì)接顯微鏡稍有灰（-2分），無綢布遮蓋（-4分），接物鏡與聚光器對(duì)接（-4分）鏡檢時(shí)（10分）打開光源，調(diào)節(jié)亮度，聚光器上升至最高位置，油鏡與聚光器對(duì)接，放入待檢血片，鏡臺(tái)上升直至油鏡與血膜接觸，然后鏡臺(tái)徐徐下降，出現(xiàn)視野用微調(diào)調(diào)節(jié)聚光器未上升至最高位置即放血片（-2分），鏡臺(tái)上升或下降過快（-3分），壓破玻片（-10分）使用后（5分）擦拭干凈油鏡，物鏡轉(zhuǎn)離聚光器，綢布遮蓋未擦拭油鏡（-1分），物鏡未轉(zhuǎn)離聚光器（-2分），未用綢布遮蓋（-2分）合計(jì)100分瘧原蟲血檢考核標(biāo)準(zhǔn)（3）項(xiàng)目檢查使用標(biāo)準(zhǔn)扣分標(biāo)準(zhǔn)考核分值顯微謝謝大家謝謝大家1、有時(shí)候讀書是一種巧妙地避開思考的方法。9月-239月-23Tuesday,September5,20232、閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。12:07:1212:07:1212:079/5/202312:07:12PM3、越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。9月-2312:07:1212:07Sep-2305-Sep-234、越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯(cuò)兒。12:07:1212:07:1212:07Tuesday,September5,20235、知人者智，自知者明。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。9