槲寄生抗實(shí)驗(yàn)性心律失常的實(shí)驗(yàn)研究

槲寄生抗實(shí)驗(yàn)性心律失常的實(shí)驗(yàn)研究

ektomykorriza是zelu科的一個(gè)成員，有各種活性成分。因此，可以分離出揮發(fā)油、黃酮、脂肪酸等小分子化合物，以及多孔、蛋白質(zhì)糖等高分子化合物。槲寄生作為一種常用中藥,具有抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、抗骨質(zhì)疏松、降血壓、降血糖等藥理作用,且不良反應(yīng)少,藥源廣泛,是一種非常有開(kāi)發(fā)價(jià)值的藥物。本課題主要通過(guò)建立心律失常動(dòng)物模型來(lái)探討槲寄生的抗心律失常作用,并初步探討其作用機(jī)制。1材料和方法1.1拉帕米注射液槲寄生,淡黃色液體,6mg/ml,由本實(shí)驗(yàn)室提供;維拉帕米注射液,5ml/支,批號(hào)5E12006,由上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn);氯仿,批號(hào)20010331,由北京化工廠生產(chǎn)。氯化鋇,批號(hào)113-3,由北京紅星化工廠生產(chǎn)。1.2wist大鼠ICR小鼠,雌雄各半,體重25～35g。清潔級(jí)Wistar大鼠150只,雌雄各半,180～250g。由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供,質(zhì)量合格證號(hào):SCXK(吉)2003-0001。1.3儀器心電圖機(jī),上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司;HX-200動(dòng)物呼吸機(jī),成都泰盟科技有限公司。1.4組不同給藥劑量及小劑量10.ICR小鼠40只,隨機(jī)分為4組,每組10只,分別為模型組、陽(yáng)性藥維拉帕米組(10mg/kg)、槲寄生大劑量組(30mg/kg)、槲寄生小劑量組(15mg/kg)。分別腹腔注射給藥15min后,將鼠移入浸有3～4ml氯仿棉球的倒置1000ml燒杯中,待小鼠呼吸停止,立即取出,迅速連接Ⅱ?qū)?lián)心電圖,觀察心室顫動(dòng)發(fā)生的百分率。1.5水合氯醛用量組、模型組、陽(yáng)性藥拉多給予大鼠導(dǎo)聯(lián)心電圖調(diào)查健康Wistar大鼠50只,隨機(jī)分為槲寄生大劑量組(30mg/kg)、槲寄生中劑量組(20mg/kg)、槲寄生小劑量組(10mg/kg)、模型組(等容量的生理鹽水)、陽(yáng)性藥維拉帕米組(10mg/kg)。腹腔分別注射給藥15min后,腹腔注射10%水合氯醛300mg/kg麻醉,仰臥位固定,以針形電極插入四肢皮下,記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖。然后,舌靜脈注射BaCl24mg/kg(0.4%,3s內(nèi)注完),記錄各組動(dòng)物心律失常的發(fā)生時(shí)間、持續(xù)時(shí)間。1.6心律失常類(lèi)型健康Wistar大鼠50只,隨機(jī)分為槲寄生大劑量組(30mg/kg)、槲寄生中劑量組(20mg/kg)、槲寄生小劑量組(10mg/kg)、模型組(等容量的生理鹽水)、陽(yáng)性藥維拉帕米組(10mg/kg)。腹腔注射10%水合氯醛300mg/kg麻醉后,將大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上,用針形電極插入四肢皮下,連續(xù)記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖。然后頸部正中切口,氣管插管,接動(dòng)物呼吸機(jī)。于胸骨左側(cè)2mm,第4、5肋間切口開(kāi)胸,并立即打開(kāi)人工呼吸機(jī)進(jìn)行人工呼吸,頻率為60次/min,呼吸比率為3∶1,通氣量20ml/kg。剪開(kāi)心包膜,輕壓胸壁,擠出心臟,在冠狀動(dòng)脈左心支發(fā)出后的2mm處,于左心耳下緣進(jìn)針,肺動(dòng)脈圓錐處出針,將1號(hào)絲線穿過(guò)冠狀動(dòng)脈前降支下,然后將線穿入自制的尖端球形冠狀動(dòng)脈阻斷塑料管,將心臟復(fù)位,穩(wěn)定5min后,腹腔給藥。對(duì)照組給等容量的生理鹽水,15min后拉緊絲線,以塑料管球端壓迫冠狀動(dòng)脈造成心肌缺血,冠狀動(dòng)脈阻斷10min后,松開(kāi)結(jié)扎線,恢復(fù)被阻斷的冠狀動(dòng)脈循環(huán),再灌注15min,在此期間連續(xù)記錄心電圖(ECG)。實(shí)驗(yàn)中觀察心律失常出現(xiàn)的類(lèi)型,室性早搏(VP):連續(xù)出現(xiàn)5個(gè)以下的室性異位搏動(dòng);室性心動(dòng)過(guò)速(VT):連續(xù)出現(xiàn)5個(gè)以上的室性早搏;心室顫動(dòng)(VF):QRS波及T波消失,代之一系列大小、形狀不同的不規(guī)則波動(dòng)。記錄再灌注15min內(nèi)的VP數(shù)目,VP、VT、VF的出現(xiàn)時(shí)間及心率變化。1.7組患者小劑量、模型組、陽(yáng)性藥拉貝米組10.健康雄性Wistar大鼠50只,隨機(jī)分為5組,即槲寄生大劑量組(40mg/kg)、槲寄生中劑量組(30mg/kg)、槲寄生小劑量組(20mg/kg)、模型組、陽(yáng)性藥維拉帕米組(10mg/kg)。腹腔注射給藥后15min后用20%烏拉坦(5mg/kg)麻醉,描記心電圖。然后舌背靜脈注射0.04%烏頭堿(60μg/kg),觀測(cè)VP的發(fā)生時(shí)間,并統(tǒng)計(jì)VT、VF的發(fā)生時(shí)間以及動(dòng)物死亡數(shù)。1.8統(tǒng)計(jì)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以ˉx±s表示,組間差異采用方差分析,百分率的比較采用χ2檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1組vf陽(yáng)性率比較陽(yáng)性藥維拉帕米組VF陽(yáng)性率10%(1/10),模型組VF陽(yáng)性率為70%(7/10),槲寄生30mg/kg組VF陽(yáng)性率為10%(1/10),15mg/kg組VF陽(yáng)性率為20%(2/10),與模型組比較有顯著性差異(P<0.05,P<0.01),且具有劑量依賴性。2.2兩組患者延長(zhǎng)心律失常的時(shí)間和持續(xù)時(shí)間比較與模型組比較,槲寄生三個(gè)劑量組和陽(yáng)性藥組能明顯延長(zhǎng)心律失常的出現(xiàn)時(shí)間及持續(xù)時(shí)間,有顯著性差異(P<0.05,P<0.01),具有明顯的劑量依賴性。見(jiàn)表1。2.3心律失常時(shí)間與模型組比較,槲寄生三個(gè)劑量組和陽(yáng)性藥組能明顯縮短心律失常的時(shí)間,有顯著性差異(P<0.05,P<0.01);槲寄生大劑量組和陽(yáng)性藥組能明顯減少VP發(fā)生頻率,有顯著性差異(P<0.01)。見(jiàn)表2。2.4組vf的比較與模型組比較,槲寄生三個(gè)劑量組和陽(yáng)性藥組能明顯延長(zhǎng)VP、VT的出現(xiàn)時(shí)間,差異有顯著性(P<0.05,P<0.01);槲寄生大、中劑量組和陽(yáng)性藥組能明顯延長(zhǎng)VF的出現(xiàn)時(shí)間,差異有顯著性(P<0.05,P<0.01);且有明顯的劑量依賴關(guān)系。見(jiàn)表3。2.5旅行生殖器對(duì)大腿骨扎后心率變化的影響與模型組比較,槲寄生大、中劑量組和陽(yáng)性藥組能明顯降低心率變化幅度,有顯著性差異(P<0.05,P<0.01)。見(jiàn)表4。2.6出現(xiàn)時(shí)間:顯著性差異顯著性差異pb與模型組比較,槲寄生三個(gè)劑量組和陽(yáng)性藥組能明顯延長(zhǎng)VT、VF的出現(xiàn)時(shí)間,有顯著性差異(P<0.05,P<0.01);槲寄生大、中劑量組和陽(yáng)性藥組能明顯延長(zhǎng)VP的出現(xiàn)時(shí)間,并能明顯減少動(dòng)物死亡數(shù),差異有顯著性(P<0.05,P<0.01)。見(jiàn)表5。3心肌缺血再灌注損傷機(jī)制心肌缺血、缺血后再灌注損傷、感染、藥物中毒、神經(jīng)體液調(diào)節(jié)等許多因素均可導(dǎo)致心律失常的發(fā)生。心肌細(xì)胞損傷,鈣離子大量?jī)?nèi)流引起細(xì)胞內(nèi)鈣超載,亦可通過(guò)誘導(dǎo)原癌基因異常表達(dá)而導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡。這些損傷或凋亡的心肌細(xì)胞往往構(gòu)成心肌電活動(dòng)的功能性障礙,或破壞各層心肌電活動(dòng)的協(xié)調(diào)性,誘發(fā)致命性心律失常。氯仿可以增加心臟對(duì)內(nèi)源性兒茶酚胺的敏感性,兒茶酚胺興奮β-腎上腺素受體,導(dǎo)致心肌細(xì)胞自律性升高,促進(jìn)鈣離子內(nèi)流,導(dǎo)致心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子超負(fù)荷而致VF。研究發(fā)現(xiàn),槲寄生對(duì)氯仿誘發(fā)的小鼠VF有明顯的對(duì)抗作用;而且大劑量時(shí),VF發(fā)生率明顯降低。提示槲寄生可抑制交感神經(jīng)系統(tǒng)活性和心臟β-受體功能,即抑制內(nèi)源性兒茶酚胺的釋放,使鈣離子內(nèi)流減弱,心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度下降,最終引起抗心律失常和心肌保護(hù)作用。鋇離子是鉀離子通道的開(kāi)放阻斷劑,鋇離子與鉀離子競(jìng)爭(zhēng)同一結(jié)合位點(diǎn),且通道對(duì)鋇離子不通透,抑制了鉀離子的流出,從而阻斷內(nèi)向整流的鉀離子(IKi)電流,使細(xì)胞內(nèi)的正電位提高,與閾電位的差值減小,導(dǎo)致自律性升高,引起心律失常。本實(shí)驗(yàn)表明槲寄生能夠?qū)孤然^誘發(fā)的心律失常,在給予槲寄生后動(dòng)物出現(xiàn)各種心律失常的時(shí)間明顯延遲。冠狀動(dòng)脈血栓消除、血管成形術(shù)、搭橋術(shù)后及冠狀動(dòng)脈痙攣解除后會(huì)發(fā)生缺血再灌注損傷,心肌缺血再灌注損傷的機(jī)制與氧自由基、鈣超載、心肌纖維能量代謝、血管內(nèi)皮細(xì)胞、一氧化氮、中性粒細(xì)胞、細(xì)胞黏附分子和細(xì)胞凋亡等因素有關(guān)。心肌缺血再灌注損傷的主要表現(xiàn)為再灌注心律失常、心功能下降和心肌壞死面積擴(kuò)大,其中所致嚴(yán)重的心律失常是猝死的主要原因。心肌缺血再灌注后,細(xì)胞內(nèi)鈣超載。心肌缺血部位腎上腺素能受體上調(diào),腎上腺素受體興奮可導(dǎo)致鈣離子內(nèi)流增加,能延遲大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎誘發(fā)的VP、VT、VF出現(xiàn)時(shí)間和減少前后心率變化的幅度。烏頭堿能夠激活心肌細(xì)胞的快鈉離子通道,促使鈉離子通道開(kāi)放,加速心肌細(xì)胞鈉離子的內(nèi)流,促使細(xì)胞膜去極化,加速了起搏點(diǎn)的自律性,還能夠提高心房傳導(dǎo)組織和房室束-普肯野系統(tǒng)等快反應(yīng)細(xì)胞的自律性,從而形成一源性或多源性異位節(jié)律,縮短