中藥指紋圖譜研究方法學(xué)課件

第二章中藥指紋圖譜研究方法學(xué)第二章中藥指紋圖譜研究方法學(xué)1主要內(nèi)容第一節(jié)常用指紋圖譜研究的方法與技術(shù)第二節(jié)指紋圖譜研究常用的儀器與設(shè)備主要內(nèi)容第一節(jié)常用指紋圖譜研究的方法與技術(shù)2第一節(jié)常用指紋圖譜研究的方法與技術(shù)

1光譜法（紅外、紫外光譜）信息量少、少用2色譜法（兼具分離、檢測(cè)功能）信息量大、多用第一節(jié)常用指紋圖譜研究的方法與技術(shù)

1光譜法（紅外、紫外3紫外光譜指紋圖譜紫外光譜指紋圖譜4紅外光區(qū)劃分紅外光譜(0.75~1000m)遠(yuǎn)紅外(轉(zhuǎn)動(dòng)區(qū))(25-1000m)中紅外(振動(dòng)區(qū))(2.5~25m)近紅外(泛頻）(0.75~2.5m)倍頻分子振動(dòng)轉(zhuǎn)動(dòng)分子轉(zhuǎn)動(dòng)分區(qū)及波長(zhǎng)范圍躍遷類型（常用區(qū)）13158~4000/cm-1400~10/cm-14000~400/cm-1紅外光區(qū)劃分紅外光譜遠(yuǎn)紅外(轉(zhuǎn)動(dòng)區(qū))中紅外(振動(dòng)區(qū))近紅外(5紅外光譜特點(diǎn)1）應(yīng)用范圍廣：除單原子分子及單核分子外，幾乎所有有機(jī)物均有紅外吸收；2）分子結(jié)構(gòu)更為精細(xì)的表征：通過IR譜的波數(shù)位置、波峰數(shù)目及強(qiáng)度確定分子基團(tuán)、分子結(jié)構(gòu)；紅外光譜特點(diǎn)6不同丹參粉末的紅外圖譜光譜法不同丹參粉末的紅外圖譜光譜法7柱色譜ColumnChromatography平面色譜PlanarChromatography液相色譜LiquidChromatography(LC)氣相色譜GasChromatography(GC)薄層色譜ThinLayerChromatography(TLC)毛細(xì)管電泳CapillaryElectrophoresis（CE）色譜法柱色譜平面色譜液相色譜氣相色譜薄層色譜毛細(xì)管電泳色譜法8反相高效液相色譜(RP-HPLC)ReversedPhaseHighPerformanceLiquidChromatography●適用范圍廣●分離性能好●分析速度快●流動(dòng)相選擇范圍寬●靈敏度高●色譜柱可多次重復(fù)使用●流出組分可以收集●采用多種檢測(cè)器，可同時(shí)獲取保留值信息和化合物的光譜、值譜信息對(duì)較為復(fù)雜的色譜實(shí)驗(yàn)條件要求比較苛刻，由此帶來不同實(shí)驗(yàn)室之間重現(xiàn)性的難度增大反相高效液相色譜(RP-HPLC)●適用范圍廣9GasChromatography(GC)(氣相色譜)

fingerprintsforsomeherbalmedicinestToppart:(蒼術(shù)揮發(fā)油);Lowerpart:(厚樸揮發(fā)油)

氣相色譜法（gaschromatography簡(jiǎn)稱GC）是色譜法的一種。色譜法中有兩個(gè)相，一個(gè)相是流動(dòng)相，另一個(gè)相是固定相。如果用液體作流動(dòng)相，就叫液相色譜，用氣體作流動(dòng)相，就叫氣相色譜。

氣相色譜儀允許的條件下可以氣化而不分解的物質(zhì)，都可以用氣相色譜法測(cè)定。主要用于揮發(fā)油的分析GasChromatography(GC)(氣相色譜)

10薄層色譜ThinLayerChromatography(TLC)●可在同板同時(shí)分析多達(dá)18個(gè)樣品，時(shí)效高●所用的是正相展開劑，其組成變化靈活，可適應(yīng)多種成分的分離●離線操作，即可直觀比較圖譜，又可掃描得到輪廓圖和處理數(shù)據(jù)●占機(jī)時(shí)間短●具有色彩參數(shù)，可獲得色彩豐富的色譜圖像，直觀性強(qiáng)；同時(shí)輔以功能團(tuán)顯色劑還可提示成分的類別，提高鑒別的專屬性?！裾咕嗑窒拊?0cm~20cm，‘柱效’相對(duì)較低，對(duì)復(fù)雜組分不提高分離度則難以提取指紋特征的藥材受到限制?！耖_放系統(tǒng)，對(duì)環(huán)境溫度、相對(duì)濕度要求較高薄層色譜●可在同板同時(shí)分析多達(dá)18個(gè)樣品，時(shí)效高●展距局限在11TLCTLC12主要內(nèi)容第一節(jié)常用指紋圖譜研究的方法與技術(shù)第二節(jié)指紋圖譜研究常用的儀器與設(shè)備主要內(nèi)容第一節(jié)常用指紋圖譜研究的方法與技術(shù)13第二節(jié)指紋圖譜研究常用的儀器與設(shè)備3聯(lián)用色譜儀器1光譜儀器2色譜儀器第二節(jié)指紋圖譜研究常用的儀器與設(shè)備3聯(lián)用色譜儀器1光譜儀141光譜儀器紫外分光光度計(jì)：主要由光源、單色器、樣品池（吸收池）、檢測(cè)器及放大器和記錄顯示系統(tǒng)所組成。鎢燈絲適宜使用的范圍是360nm~1000nm；氫燈或氘燈適宜使用的范圍是150nm~360nm。1光譜儀器紫外分光光度計(jì)：主要由光源、單色器、樣品池（吸收池15通常在紫外分光光度計(jì)中，裝置有紫外光源-氘燈及可見光源-鹵鎢燈，只需切換光源，就可以用來用來測(cè)定可見吸收光譜。因此也稱為紫外-可見分光光度計(jì)。通常在紫外分光光度計(jì)中，裝置有紫外光源-161光譜儀器紅外光譜又稱分子振動(dòng)轉(zhuǎn)動(dòng)光譜，屬分子吸收光譜。紅外光譜儀：儀器組成：光源，吸收池，單色器，檢測(cè)器以及記錄顯示裝置。T(%)1光譜儀器紅外光譜又稱分子振動(dòng)轉(zhuǎn)動(dòng)光譜，屬分子吸收光譜。T(172色譜儀器HPLC2色譜儀器HPLC18中藥指紋圖譜研究方法學(xué)課件19實(shí)驗(yàn)條件的選擇：1、色譜柱的選擇：C18反相柱（ODS柱）、C8反相柱、正相分配色譜柱(氨基柱等）。2、流動(dòng)相的選擇：反相鍵合相為例（1）部分含水溶劑：以水為基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量可與水互溶的有機(jī)極性調(diào)節(jié)劑（如甲醇、乙腈等）。甲醇-水、乙腈-水系統(tǒng)。適用于中等極性、弱極性的藥物。（2）緩沖溶液：適用于可溶于水并具可解離特性的藥物（弱酸、弱堿、蛋白質(zhì)、肽類等）。常用緩沖液：磷酸鹽、醋酸鹽等。（3）非水溶劑：用于非極性物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)條件的選擇：20洗脫方式：（1）等度洗脫：在同一分析周期內(nèi)流動(dòng)相的組成保持恒定。適用于組分?jǐn)?shù)較少、性質(zhì)差別不大的樣品。（2）梯度洗脫：在同一分析周期內(nèi)程序控制流動(dòng)相的組成（溶劑極性、pH值等）適用于組分?jǐn)?shù)多、性質(zhì)差別大的復(fù)雜混合物樣品。洗脫方式：21檢測(cè)器：（1）紫外檢測(cè)器（UV）：應(yīng)用最普遍。靈敏度高、噪音低、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。只能用于檢測(cè)有紫外吸收的藥物?？勺儾ㄩL(zhǎng)型、二極管陣列檢測(cè)器（色譜、紫外光譜圖）（2）蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）：通用型檢測(cè)器。主要用于糖類、生物堿類、三萜類、甾提類等揮發(fā)性低的物質(zhì)。靈敏度稍低，流動(dòng)相中不能含緩沖鹽。（3）示差折光檢測(cè)器（RID）：通用型，利用組分與流動(dòng)相折射率之差進(jìn)行檢測(cè)。（用于糖類物質(zhì)）檢測(cè)器：22薄層色譜薄層色譜的實(shí)驗(yàn)成本低、流動(dòng)相的更換與選擇方便、薄層掃描儀的使用效率高。另外，它提供色彩豐富、直觀易認(rèn)的可見光或熒光色譜圖像，尤其適合日常分析檢驗(yàn)和現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)。選擇薄層掃描法對(duì)中藥進(jìn)行指紋圖譜質(zhì)量控制具有廣闊的應(yīng)用前景。薄層色譜薄層色譜的實(shí)驗(yàn)成本低、流動(dòng)相的更換與選擇方便、薄層掃23實(shí)驗(yàn)儀器CAMAGLinomat5半自動(dòng)點(diǎn)樣儀CAMAGScanner3薄層色譜掃描儀CAMAG數(shù)碼攝像系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)儀器CAMAGLinomat5半自動(dòng)點(diǎn)樣儀CAM24TLCS-3D-FP在監(jiān)控藥材質(zhì)量方面的應(yīng)用TLCS-3D-FP在監(jiān)控藥材質(zhì)量方面的應(yīng)用25甘草聚酰胺薄層掃描圖譜聚酰胺薄層甘草聚酰胺薄層掃描圖譜聚酰胺薄層26氣相色譜氣相色譜27Getmoredata/informationHPLC-DAD3DchromatogramHPLCchromatogramofnucluesideofCordycepsSinensis(冬蟲草)atonewavelengthHyphenatedInstrument(聯(lián)用儀器)Getmoredata/informationHPLC28HyphenatedInstrument(聯(lián)用儀器)GCinstrumentGCchromatogramof

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