手工洗板和洗板機洗板對elisa檢測hiv抗體結果的影響

手工洗板和洗板機洗板對elisa檢測hiv抗體結果的影響

酶聯(lián)免疫吸附法（elisa）用于檢測hiv抗體，操作簡單、敏感。這是衛(wèi)生部推薦的第一種診斷方法。然而，在檢測過程中，它容易受到幾個因素的干擾，影響測試結果的準確性。例如，樣品的溶血、樣品本身的質(zhì)量、樣品的準備、樣品的添加、孵育溫度、浸泡時間、顯色度的長度、顯色度的避免、清洗板的數(shù)量和方法對結果有顯著影響。其中，清潔板是一個極為重要的環(huán)節(jié)。未經(jīng)處理的清潔板很容易使假陽性或假陰性1,2'。在實驗室中,有兩種洗板方式:手工洗板和洗板機洗板［3，4］。現(xiàn)就手工洗板和洗板機洗板對檢測結果的影響進行了比較分析,現(xiàn)報道如下。1材料和方法1.1防艾高危人員血樣的制備收集2010年3月至2010年12月來我院進行體檢的艾滋病高危人員血樣3000份,抽血后離心,吸取血清-20℃保存?zhèn)溆?1NCU/mL質(zhì)控物購自北京康徹思坦生物技術有限公司。1.2抗體檢測試劑人類免疫缺陷病毒HIV(1+2)抗體檢測試劑購自珠海麗珠股份有限公司,儀器為奧地利產(chǎn)MK3酶標儀,MODEL1575洗板機。1.3洗板操作時同一臺酶標儀判讀效果,將同一臺按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》和試劑盒說明書要求規(guī)范操作。洗板機、酶標儀等各項指標在說明書要求范圍內(nèi),為避免人為因素影響,洗板由同一人、同一臺洗板機完成操作,分別用手工洗板、洗板機洗板五次后由同一臺酶標儀判讀結果,對陽性數(shù)、陽性率及OD值進行分析。HIV陽性標本由南京市疾控中心免疫印跡法判定［5，6］。1.4統(tǒng)計分析采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件,t檢驗用于組間比較,χ2檢驗用于計數(shù)資料比較,P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。2結果2.2模型檢測結果手工洗板檢測結果為陽性數(shù)47例,陰性數(shù)2953例,陽性率為1.57%;洗板機洗板檢測結果為陽性50例,陰性2950例,陽性率為1.67%;洗板機洗板檢測結果陽性而手工洗板檢測結果陰性8例;洗板機洗板檢測結果陰性而手工洗板檢測結果陽性5例,經(jīng)配對χ2檢驗,洗板機洗板檢測和手工洗板初篩檢測HIV抗體的陽性率無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。見表1。2.31機洗板后od的變化1NCU/mL質(zhì)控物分別經(jīng)手工洗板后OD=0.68±0.02,經(jīng)洗板機洗板后OD=0.65±0.01,經(jīng)配對t檢驗,P>0.05,兩者差異無統(tǒng)計學意義,見表2。但是從表中我們看出手工洗板所得OD值除了第4次外均低于洗板機洗板,說明在手工洗板過程中,水流的大小,拍板的力度等均可能對結果造成一定的影響。3洗板機洗板的檢測結果本方法的試驗結果師ELSIA是通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質(zhì),以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)來測定特定抗原或者抗體,敏感度可達到0.5ng/mL,但如果不注意規(guī)范、正確的操作,檢測結果的正確性將受到一定的影響［6，7，8，9］。手工洗板人為因素比較大,在洗滌過程中,洗滌液容易溢出到周圍孔,造成交叉污染。手工洗板過程中,每次浸泡時間長短不一,也是影響檢測結果的因素之一。洗滌結束后在吸水紙上輕輕拍干,吸水紙不可多次重復使用、避免在同一位置重復拍板,否則易產(chǎn)生交叉污染。酶結合物對干燥較敏感,尤其在高溫下更容易失去生物學活性,所以拍干后的反應板應盡量避免在空氣中暴露較長時間［11］。洗板機洗板是將手工操作改由洗板機進行,洗板次數(shù)、浸泡時間、嚴格按照設定的程序進行,避免了人為因素造成的洗板次數(shù)不統(tǒng)一,浸泡時間長短的不一致［5］。洗板機洗板過程中,洗滌液不會溢出到周圍孔,不會產(chǎn)生交叉污染。洗板機洗板時病人的血清集中收集在含有消毒片的廢液瓶中,避免了由于檢驗人員手工洗板時操作不當造成的危害。洗板機洗板進行批量工作,提高了工作效率。洗板機要定期保養(yǎng),以達到較好的洗滌效果［12，13］。本次研究由相同檢驗人員,對相同檢測對象利用相同實驗環(huán)境條件進行檢測,采用相同的措施可減少系統(tǒng)誤差和隨機誤差對兩種檢測方法的檢測結果造成的不同影響。本次試驗中,通過用手工洗板和洗板機洗板方法對3000份相同的艾滋病高危人員的血清樣品進行HIV抗體初篩檢測,手工洗板與洗板機洗板法初篩檢測HIV抗體的陽性率無統(tǒng)計學差異(P>0.05),說明手工洗板和洗板機洗板沒有本質(zhì)的差別。通過對1NCU/mL質(zhì)控物分別經(jīng)手工洗板后OD=0.681±0.02,經(jīng)洗板機洗板后OD=0.675±0.01,經(jīng)配對t檢驗,P>0.05,兩者差異無統(tǒng)計學意義,提示手工洗版或者洗板機洗板如果嚴格按照操作說明進行,對于結果不會有影響,但是從試驗結果來看,洗板機洗板總體數(shù)值偏低,由于手工洗板受人為因素較多,不同的人、不同的試驗條件對同樣的樣品就有可能出現(xiàn)誤差,洗板浸泡時間不統(tǒng)一、而且有溢出漏加等現(xiàn)象,容易造成誤差。洗板機洗板浸泡時間可設定,而且注液均勻,受人為因素較少,對實驗室污染較小,對實驗人員幾乎沒有危害［14，15］。綜上所述,E