感黃瓜枯萎病的病原分離及藥劑防治研究

感黃瓜枯萎病的病原分離及藥劑防治研究

黃瓜萎縮是黃瓜生產(chǎn)中的常見疾病之一。這是一種典型的地面?zhèn)鞑ゼ膊。谌珖?guó)各地都有發(fā)生。尤其是在吉林省、遼寧省、山東省、湖北省和北京省。發(fā)病率通常為10%-30%，嚴(yán)重程度可達(dá)80%-90%。這是限制黃瓜產(chǎn)量和質(zhì)量的重要因素。近年來(lái),隨著張家口地區(qū)大棚蔬菜的迅速發(fā)展,復(fù)種指數(shù)增加,黃瓜枯萎病發(fā)生越發(fā)嚴(yán)重,給黃瓜生產(chǎn)造成極大的損失［１－２］。黃瓜枯萎病菌從植株根部的傷口或根尖侵入,在維管束內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育,堵塞導(dǎo)管,阻礙水分和無(wú)機(jī)鹽的運(yùn)輸,分泌毒素引起植株萎蔫死亡,病情發(fā)展迅速,而且呈逐年加重趨勢(shì)［３］,因此篩選化學(xué)藥劑對(duì)有效防控黃瓜枯萎病具有重要意義。該試驗(yàn)對(duì)張家口市黃瓜枯萎病菌進(jìn)行分離純化,通過(guò)生長(zhǎng)速率法測(cè)定了12種化學(xué)藥劑對(duì)黃瓜枯萎病菌的毒力,并測(cè)定了室內(nèi)抑制效果較好的7種藥劑的盆栽防治效果,以期篩選出有效藥劑,為科學(xué)使用化學(xué)藥劑提供理論依據(jù),并為有效防控黃瓜枯萎病奠定理論基礎(chǔ)。1材料和方法1.1供試“津優(yōu)f”黃瓜種子供試黃瓜枯萎病病株采自河北省張家口市宣化縣黃瓜溫室;供試“津優(yōu)F１”黃瓜種子由寧陽(yáng)縣茂盛良種繁育場(chǎng)生產(chǎn),市售;供試藥劑見表1。供試介質(zhì)為丹麥品氏托普泥炭,由丹麥品氏托普(集團(tuán))公司生產(chǎn),市售。1.2黃瓜枯病菌的分離培養(yǎng)1.2.1黃瓜枯萎病菌的分離與鑒定采用組織分離法分離病原菌。將材料的病健交界處剪成4mm左右的小塊,在75%酒精中浸漬30s后,移入0.1%升汞中處理約2min,然后用無(wú)菌水清洗3次,移至已備好的PSA培養(yǎng)基上,置于25~30℃恒溫培養(yǎng)箱中。培養(yǎng)5d后,在光學(xué)顯微鏡下觀察病原菌的形態(tài)特征進(jìn)行鑒定［４］,并進(jìn)行顯微照相。1.2.2室內(nèi)藥劑篩選采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定供試12種化學(xué)藥劑的抑菌效果。將PDA培養(yǎng)基加熱溶化,待其冷卻至45℃左右加入供試藥劑,制成含藥平板。待含藥平板冷卻后,在超凈工作臺(tái)內(nèi)用打孔器(d=0.5cm)接種同齡黃瓜枯萎病菌菌塊,置于25~30℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。7d后,用十字交叉法測(cè)量菌落直徑,計(jì)算抑菌率。每個(gè)處理5次重復(fù)。抑制率(%)=(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/對(duì)照菌落直徑×100%。1.2.3盆栽試驗(yàn)黃瓜枯萎病菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5d后,將其配制成1×10６個(gè)/mL分生孢子懸浮液,備用。采用藥劑拌土的方法,將供試藥劑與供試介質(zhì)按照質(zhì)量濃度配制成不同濃度的藥土,以不拌藥劑為空白對(duì)照(CK)。共設(shè)7個(gè)處理,處理1:10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1500倍液;處理2:64%噁霜·錳鋅可濕性粉劑1000倍液;處理3:32.5%苯甲·嘧菌酯懸浮劑1500倍液;處理4:62.5%精甲·咯菌腈懸浮劑1500倍液;處理5:36%噁霉·福美雙可濕性粉劑1000倍液;處理6:99%惡霉靈粉劑3000倍液;處理7:80%嘧霉胺水分散粒劑1500倍液,每個(gè)處理30次重復(fù)。挑選飽滿的黃瓜種子,經(jīng)0.1%升汞表面消毒3min,用無(wú)菌水清洗3次后,置于鋪有雙層紗布的無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi),在25℃黑暗恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)催芽。待黃瓜種子胚根長(zhǎng)至1cm左右時(shí),加入1×10６個(gè)/mL分生孢子懸浮液中浸泡20min,取出播于盛有藥土的塑料花盆中(20cm×18cm),在溫室中培養(yǎng),溫度為16~25℃。待空白對(duì)照充分發(fā)病后,依據(jù)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(表2)進(jìn)行病情調(diào)查,并計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。病情指數(shù)=∑(各級(jí)病葉數(shù)×相對(duì)級(jí)數(shù)的代表值)/(調(diào)查總?cè)~數(shù)×4)×100%,防治效果(%)=(對(duì)照平均病情指數(shù)-處理平均病情指數(shù))/對(duì)照平均病情指數(shù)×100%。2結(jié)果與分析2.1小球物及其他細(xì)胞利用組織分離法獲得病原菌純培養(yǎng)物,25℃下,在PDA培養(yǎng)基上,菌落生長(zhǎng)均勻,粉色,菌絲絨毛狀;小型分生孢子無(wú)色,單胞,長(zhǎng)橢圓形;大型分生孢子無(wú)色,鐮刀形,多為3個(gè)隔膜(圖1)。根據(jù)分離純化病原菌的菌絲形態(tài)、大型分生孢子和小型分生孢子的形態(tài)特征及回接試驗(yàn)的癥狀等進(jìn)行鑒定,該病原菌為尖鐮孢菌(Fusariumoxysporum)。2.2分散粒劑和惡霉靈粉劑的抑制率,有符合現(xiàn)有監(jiān)管制度下的主流調(diào)由圖2可知,供試藥劑對(duì)黃瓜枯萎病菌的抑制效果不同。抑制效果最好的藥劑是36%噁霉·福美雙可濕性粉劑1000倍液,抑制率為93.92%;其次是10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1500倍液、62.5%精甲·咯菌腈懸浮劑1500倍液和99%惡霉靈粉劑3000倍液,抑制率均在80%以上,分別為85.48%、81.20%和80.45%;抑制效果最差的是72.2%霜霉威鹽酸鹽水劑800倍液,抑制率為1.09%;其次是60%硫磺·敵磺鈉可濕性粉劑1000倍液,抑制率為1.72%。2.37治療前后的病情指數(shù)從表3可以看出,采用藥劑拌土的方式,施用供試藥劑對(duì)黃瓜枯萎病均有一定的防治效果,除80%嘧霉胺水分散粒劑和99%惡霉靈粉劑2個(gè)處理的病情指數(shù)差異不顯著外,其它處理的病情指數(shù)均有顯著差異。施用80%嘧霉胺水分散粒劑1500倍液的防治效果最高,達(dá)93.61%,其次是99%惡霉靈粉劑3000倍液和32.5%苯甲·嘧菌酯懸浮劑1500倍液,防治效果分別為89.27%和79.48%,因此以上3種藥劑均可作為土壤處理劑防治黃瓜枯萎病,而且在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中,未見各處理藥劑對(duì)黃瓜產(chǎn)生藥害。3結(jié)論和討論3.1黃瓜枯渙病病原菌分離純化該試驗(yàn)通過(guò)對(duì)張家口市溫室黃瓜的觀察發(fā)現(xiàn),初期病株葉片從下向上逐漸萎蔫,類似缺水狀,中午尤為明顯,早晚尚能恢復(fù),經(jīng)數(shù)日后整株葉片枯萎下垂,莖蔓基部縊縮縱裂,在潮濕環(huán)境下,病部表面產(chǎn)生白色或粉紅色霉層,將病莖縱切剖視,維管束變褐,與典型的黃瓜枯萎病癥狀相同。通過(guò)對(duì)病原菌的分離純化培養(yǎng)以及形態(tài)觀察,參照陸家云［４］對(duì)黃瓜枯萎病菌的形態(tài)描述,確定分離的病原物為尖鐮孢菌(F.oxysporum),這與阮華芳等［５］和陳霞等［６］的研究結(jié)果一致。經(jīng)回接試驗(yàn)證實(shí),該病原菌是引起張家口市黃瓜枯萎病的病原。3.2黃瓜枯景觀病的防治效果黃瓜枯萎病是典型的土傳病害,防治困難。近年來(lái),已有相關(guān)報(bào)道建議選育抗病品種、嫁接技術(shù)、堆肥、生物熏蒸、生防菌株以及植物提取液抑制黃瓜枯萎病菌［７－１４］,但一旦大規(guī)模嚴(yán)重發(fā)病,仍缺乏有效的防治藥劑。為此,該試驗(yàn)對(duì)張家口市黃瓜枯萎病菌進(jìn)行了分離純化,并篩選獲得了有效的防治藥劑。供試藥劑對(duì)黃瓜枯萎病菌均表現(xiàn)出一定的抑制效果,但不同藥劑間抑菌效果不同。經(jīng)室內(nèi)測(cè)定,36%噁霉·福美雙可濕性粉劑1000倍液對(duì)黃瓜枯萎病菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用,抑制率為93.92%。其次抑制效果較好的是10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1500倍液、62.5%精甲·咯菌腈懸浮劑1500倍液和99%惡霉靈粉劑3000倍液,抑制率均在80%以上。盆栽試驗(yàn)測(cè)定80%嘧霉胺水分散粒劑1500倍液、99%惡霉靈粉劑3000倍液和32.5%苯甲·嘧菌酯懸浮劑1500倍液對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果在79.48%~93.61%,可作為土壤處理劑防治黃瓜枯萎病。有些藥劑的室內(nèi)測(cè)定抑制效果和盆栽試驗(yàn)防治效果結(jié)果表現(xiàn)不一致,這可能與環(huán)境條件、土壤有關(guān),有待于進(jìn)一步研究?；瘜W(xué)防治方法是防控植物病害的重要措施之一,具有舉足輕重的地位。篩選有效的化學(xué)藥劑可為防治黃瓜枯萎病奠定理論基礎(chǔ),為制定長(zhǎng)效防治措施提供支撐。嘧霉胺對(duì)黃瓜枯萎病表現(xiàn)出較好的防治效果與段廣榮等［１５］研究結(jié)果一致。99%惡霉靈粉劑3000倍對(duì)黃瓜枯萎病的防效為89.27%,與陳炳旭等［１６］的研究結(jié)果一致。而肖敏等［１７］研究發(fā)現(xiàn),用96%惡霉